四烯甲萘醌(MK-4)对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠模型的保护作用分析

目的 探究四烯甲萘醌(MK-4)通过减轻铁死亡对四氯化碳(CCl_(4))诱导的急性肝损伤(ALI)小鼠的保护作用及其机制。方法 选用8周龄成年ICR雄鼠,适应性饲养后,分为Control组、MK-4组、CCl_(4)模型组(6、12、24 h)、MK-4+CCl_(4)组(6、12、24 h),每组6只。Control组腹腔注射同等剂量玉米油;MK-4组腹腔注射40 mg/kg的MK-4溶液,1 h后腹腔注射同等剂量玉米油;MK-4+CCl_(4)组(6、12、24 h)先腹腔注射40 mg/kg的MK-4溶液,1 h后和CCl_(4)模型组(6、12、24 h)同时腹腔注射0.3 mL/kg CCl_(4)溶液,分别在6、12、24 h进行取材。通过HE染色观察小鼠肝脏的病理变化;普鲁士蓝染色检测肝组织中铁聚集;生化仪检测小鼠血清中AST和ALT水平;试剂盒检测肝匀浆中组织铁含量、氧化应激指标丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平;RT-PCR检测铁死亡标志基因长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)以及铁代谢相关基因铁调素调节蛋白(HJV)、转铁蛋白受体1(TFR1)和膜转铁蛋白(FPN)的表达,Western Blot检测GPX4的蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 在时效研究中,与Control组相比,CCl_(4)模型组(12、24 h)的肝质量系数和血清ALT、AST水平明显上升(P值均<0.05),且通过HE染色结果也反映出,肝损伤程度随着时间延长逐渐加重。同时,MK-4+CCl_(4)(6、12、24 h)组和CCl_(4)模型组(6、12、24 h)相比时,MK-4+CCl_(4)(12 h)组的肝质量系数和血清ALT、AST水平下降(P值均<0.05),且肝组织的坏死面积减少,因此在后续研究中采用12 h的小鼠各组织样本进行检测。与Control组相比,CCl_(4)组MDA上升,GSH下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05);与CCl_(4)组相比,MK-4+CCl_(4)组MDA下降,GSH上升,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。铁死亡关键指标ASCL4、PTGS2,与Control组相比,CCl_(4)组显著上升,GPX4则显著下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05);MK-4+CCl_(4)组较CCl_(4)组而言,ASCL4、PTGS2的mRNA水平下降,GPX4的mRNA水平上升,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。蛋白质免疫印迹的结果显示,与Control组相比,CCl_(4)组蛋白表达水平下降,MK-4+CCl_(4)组较CCl_(4)组相比,蛋白表达水平上升,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。普鲁士蓝染色结果显示:与Control组相比,CCl_(4)组铁聚集明显上升,MK-4干预后,MK-4+CCl_(4)组较CCl_(4)组铁聚集点下降。同时在对小鼠肝脏铁代谢基因的检测中发现,与Control组相比,CCl_(4)组铁含量显著上升,FPN、HJV的mRNA水平下降,TFR1的mRNA水平上升,差异均有统计学意义(P值均<0.05);进行MK-4进行保护后,铁含量下降,FPN、HJV的mRNA水平上升,TFR1的mRNA水平下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论 MK-4提前干预可减轻CCl_(4)诱导的小鼠ALI,其机制可能主要是通过抑制铁死亡并改善了小鼠肝脏铁代谢相关基因的表达。

食品中维生素K_(1)、甲萘醌-4和甲萘醌-7的测定

文章建立一种同时测定食品中维生素K_(1)、甲萘醌-4(Menaquinone-4,MK-4)和甲萘醌-7(Menaquinone-7,MK-7)含量的方法,以评估不同食品中维生素K的含量。样品经酶解、正己烷提取后,采用液相色谱串联质谱法进行分析。采用Agilent Poroshell 120 EC-C_(18)色谱柱(50 mm×3.0mm,2.7μm)进行分离,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸甲醇为流动相梯度洗脱。采用大气压化学电离源,正离子模式,选择反应监测模式检测。通过对色谱条件优化,在4 min内实现了3种维生素K的测定。维生素K_(1)、MK-4和MK-7在0.5~500.0 ng/mL浓度范围内线性良好,相关系数r^(2)>0.9932;加标回收率在87.5%~110.7%,相对标准偏差<7.09%。将该方法应用于27种食品中维生素K含量的测定,蔬菜类食品中维生素K_(1)的含量较高,肉蛋类食品中以MK-4为主,MK-7在发酵豆制品中含量较高。该方法操作简单、重现性好、准确度高,适用于食品中维生素K_(1)、MK-4和MK-7的含量测定,可为维生素K膳食摄入提供参考。

Hepatology International|经颈静脉肝内门体分流术后显性肝性脑病发生的预测:一项基于3D自动化肝脾评估的多中心研究

经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)是治疗门静脉高压并发症(例如静脉曲张出血和难治性腹水)的替代方法之一,该方法为在门静脉和肝静脉之间建立人工通道。然而,美国、中国和欧洲指南均推荐将内镜治疗和穿刺术治疗等姑息疗法作为门静脉高压的一线治疗方法,主要原因是TIPS术后显性肝性脑病(HE)的高发率及易复发性,以及对患者的生活质量产生负面影响并增加病死率。

高效液相色谱-荧光检测法测定食品中维生素K2的含量

建立了高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)同时快速分离检测猪肉、猪肝、纯牛奶、酸奶、黄油、鸡蛋、豆豉、纳豆8种食品中2种维生素K2的方法。样品经酶解、皂化、萃取、氮吹复溶处理后,用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,柱后锌粉还原柱(35 mm×4.6 mm)衍生,以甲醇(含有二氯甲烷10%、冰醋酸0.03%、氯化锌1.5 g/L、无水乙酸钠0.5 g/L)为流动相,进入荧光检测器进行检测。结果表明,四烯甲萘醌(Menatetrenone4,MK-4)、七烯甲萘醌(Menatetrenone7,MK-7)在15 min内分离出峰。2种维生素K2在各自的线性范围内关系良好,相关系数r=1.0000。当取样量为2 g,定容2 mL时,MK-4的检出限为0.01μg/100 g,定量限为0.04μg/100 g;MK-7的检出限为0.06μg/100 g,定量限为0.2μg/100 g。当取样量为10 g,定容2 mL时,MK-4的检出限为0.002μg/100 g,定量限为0.008μg/100 g;MK-7的检出限为0.012μg/100 g,定量限为0.04μg/100 g。精密度(RSD)均不超过3.56%,回收率为80.6%~95.5%。8种食品中,猪肉、纯牛奶、酸奶、黄油、鸡蛋中仅含有MK-4,其中纯牛奶中含量最低,仅为(0.34±0.02)μg/100 g,鸡蛋中含量最高,达(25.38±0.85)μg/100 g。猪肝、豆豉、纳豆中仅含MK-7,其中猪肝含量较低,为(25.45±0.83)μg/100 g,纳豆中含量最为丰富,高达(923.20±11.45)μg/100 g。该法准确、可靠、高效,可用于食品中维生素K2的高通量检测。

高效液相色谱法测定食品中维生素K_(1)和维生素K_(2)的含量

建立高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)测定食品中维生素K1和维生素K2含量的分析方法。方法:配方奶粉、酸奶、纳豆冻干粉和鸡胗冻干粉经酶解、异丙醇分散、正己烷萃取、旋转蒸发复溶后,使用Thermo Acclaim^(TM)120C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,锌粉还原柱(50 mm×4.6 mm)衍生,以900 mL甲醇:100 mL四氢呋喃(含冰醋酸0.3 mL,氯化锌1.5 g,无水乙酸钠0.5 g)为流动相,激发波长为243 nm,发射波长为430 nm,分离维生素K 1(Vitamin K 1,VK 1)、四烯甲萘醌(menaquinone-4,MK-4)、七烯甲萘醌(menaquinone-7,MK-7)和九烯甲萘醌(menaquinone-9,MK-9)。结果:VK 1、MK-4、MK-7和MK-9在20~1000μg/L范围内与峰面积有良好线性关系。配方奶粉、酸奶、纳豆冻干粉和鸡胗冻干粉中VK1、MK-4、MK-7、MK-9含量的相对标准偏差(RSD)均小于5%,表明精密度好。配方奶粉、酸奶和纳豆冻干粉不同水平加标回收率分别为85.0%~107.8%、85.8%~109.6%、85.1%~102.7%,回收率的RSD均小于5%,表明回收率高,相对标准偏差小。结论:实验建立的方法重复性好、准确度高,可以精准定量食品中维生素K_(1)和维生素K_(2)的含量。