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甲萘醌7对体外培养大鼠骨髓基质细胞分化的影响
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作者 徐兵 柳园 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第5期657-661,共5页
背景:目前甲萘醌7的研究主要集中在其抗骨质疏松的作用方面,关于其对体外细胞培养体系中大鼠骨髓基质细胞的作用尚不明确。目的:观察甲萘醌7对大鼠骨髓基质细胞增殖及分化的影响。方法:提取大鼠骨髓基质细胞,体外培养扩增后,种植骨髓基... 背景:目前甲萘醌7的研究主要集中在其抗骨质疏松的作用方面,关于其对体外细胞培养体系中大鼠骨髓基质细胞的作用尚不明确。目的:观察甲萘醌7对大鼠骨髓基质细胞增殖及分化的影响。方法:提取大鼠骨髓基质细胞,体外培养扩增后,种植骨髓基质细胞于细胞培养皿中,分别用质量浓度10^(-6),10^(-5),10^(-4)g/L的甲萘醌7及100μg/L的碱性成纤维细胞生长因子诱导骨髓基质细胞增殖,检测不同组骨髓基质细胞的相应吸光度值。于第2,4,6和8天检测骨髓基质细胞碱性磷酸酶水平和钙结节数量,并检测骨钙素、骨桥蛋白和Runx2蛋白的mRNA表达情况。结果与结论:①细胞增殖:甲萘醌7诱导的骨髓基质细胞增殖良好,各浓度的甲萘醌7及碱性成纤维细胞生长因子组均有促进骨髓基质细胞增殖的作用(P<0.05);②相关蛋白mRNA表达:甲萘醌7组比对照组能表达更多的碱性磷酸酶和钙结节。质量浓度10^(-4)g/L的甲萘醌7能上调骨钙素、骨桥蛋白和Runx2蛋白mRNA的表达(P<0.05);③结果证实,甲萘醌7能诱导骨髓基质细胞向成骨方向分化,可用于骨组织工程中种子细胞的诱导剂。 展开更多
关键词 甲萘醌7 碱性成纤维细胞 干细胞 骨髓干细胞 骨髓基质细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶 成骨分化 骨组织工程
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混合碳源发酵对纳豆芽孢杆菌生产甲萘醌-7的影响 被引量:3
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作者 罗苗苗 刘博 +1 位作者 纪晓俊 任路静 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期35-39,共5页
为了提高纳豆芽孢杆菌发酵生产甲萘醌-7的能力,以葡萄糖和甘油作为碳源进行深入研究。结果表明,葡萄糖作为碳源时有利于维持营养体形态,甘油作为碳源时有利于甲萘醌-7合成。结合了2种碳源的优点,采用葡萄糖/甘油混合碳源发酵策略。当葡... 为了提高纳豆芽孢杆菌发酵生产甲萘醌-7的能力,以葡萄糖和甘油作为碳源进行深入研究。结果表明,葡萄糖作为碳源时有利于维持营养体形态,甘油作为碳源时有利于甲萘醌-7合成。结合了2种碳源的优点,采用葡萄糖/甘油混合碳源发酵策略。当葡萄糖与甘油混合质量比例为75∶25时,芽孢形成率比以甘油为单一碳源时下降了61.71%,且发酵产甲萘醌-7水平比以葡萄糖和甘油为单一碳源分别提高了34.61%和23.87%。该方法弥补了菌体易形成休眠体芽孢和甲萘醌-7产量低等问题,在甲萘醌-7工业生产上具有重要价值。 展开更多
关键词 甲萘醌-7 纳豆芽孢杆菌 混合碳源 芽孢形成率
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一株产甲萘醌-7(MK-7)菌的分离鉴定及产物合成条件的初步研究 被引量:2
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作者 徐建中 王颖妤 +1 位作者 严为留 张伟国 《工业微生物》 CAS CSCD 2016年第3期1-7,共7页
本文从豆豉中分离出了一株高产MK-7的菌株并对其进行了鉴定,同时对该菌合成MK-7的条件进行了初步研究。在参照《伯杰氏细菌鉴定手册》,并根据形态学特征、生理生化特性、并结合16S rDNA序列分析结果,该菌属于解淀粉芽孢杆菌。该菌合成M... 本文从豆豉中分离出了一株高产MK-7的菌株并对其进行了鉴定,同时对该菌合成MK-7的条件进行了初步研究。在参照《伯杰氏细菌鉴定手册》,并根据形态学特征、生理生化特性、并结合16S rDNA序列分析结果,该菌属于解淀粉芽孢杆菌。该菌合成MK-7的最佳条件为:发酵温度37℃、装液量为30 m L/250 m L、接种量为2%和摇瓶培养时间为3 h。研究发现,菌株Y-2合成的MK-7主要存在于细胞内。以上结果可为基于菌株Y-2选育高产MK-7菌株和实现MK-7的产业化提供理论依据。 展开更多
关键词 中国豆豉 甲萘醌-7 解淀粉芽孢杆菌 产物分布
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维生素K_2合成途径中主要酶对MK-7产量的影响 被引量:4
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作者 徐建中 王颖妤 +1 位作者 严为留 张伟国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期248-254,共7页
对菌株Y-2维生素K_2合成途径中的6个主要酶基因分别进行克隆和表达,以探索不同酶基因对MK-7产量的影响。参照《分子克隆实验指南》完成对基因重组质粒的构建,并对spizizen转化法进行改进,实现重组质粒对菌株Y-2的转化。结果表明,分别过... 对菌株Y-2维生素K_2合成途径中的6个主要酶基因分别进行克隆和表达,以探索不同酶基因对MK-7产量的影响。参照《分子克隆实验指南》完成对基因重组质粒的构建,并对spizizen转化法进行改进,实现重组质粒对菌株Y-2的转化。结果表明,分别过量表达维生素K_2合成途径中的6个基因均能提高MK-7的产量。需要指出的是,过表达基因hep S对MK-7产量的影响最大,其中在摇瓶培养组的产量提高了38%,静置培养组的产量提高了48%。其余几个基因过表达后对MK-7产量的影响则根据培养方式的不同而各有差异。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 甲萘醌-7 合成途径 催化酶
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食品中维生素K_(1)、甲萘醌-4和甲萘醌-7的测定
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作者 贾永娟 刘杏立 +2 位作者 刘春冉 赵金宝 倪君君 《食品科技》 CAS 北大核心 2024年第1期290-296,共7页
文章建立一种同时测定食品中维生素K_(1)、甲萘醌-4(Menaquinone-4,MK-4)和甲萘醌-7(Menaquinone-7,MK-7)含量的方法,以评估不同食品中维生素K的含量。样品经酶解、正己烷提取后,采用液相色谱串联质谱法进行分析。采用Agilent Poroshell... 文章建立一种同时测定食品中维生素K_(1)、甲萘醌-4(Menaquinone-4,MK-4)和甲萘醌-7(Menaquinone-7,MK-7)含量的方法,以评估不同食品中维生素K的含量。样品经酶解、正己烷提取后,采用液相色谱串联质谱法进行分析。采用Agilent Poroshell 120 EC-C_(18)色谱柱(50 mm×3.0mm,2.7μm)进行分离,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸甲醇为流动相梯度洗脱。采用大气压化学电离源,正离子模式,选择反应监测模式检测。通过对色谱条件优化,在4 min内实现了3种维生素K的测定。维生素K_(1)、MK-4和MK-7在0.5~500.0 ng/mL浓度范围内线性良好,相关系数r^(2)>0.9932;加标回收率在87.5%~110.7%,相对标准偏差<7.09%。将该方法应用于27种食品中维生素K含量的测定,蔬菜类食品中维生素K_(1)的含量较高,肉蛋类食品中以MK-4为主,MK-7在发酵豆制品中含量较高。该方法操作简单、重现性好、准确度高,适用于食品中维生素K_(1)、MK-4和MK-7的含量测定,可为维生素K膳食摄入提供参考。 展开更多
关键词 维生素K_(1) 甲萘醌-4 甲萘醌-7 食品 液相色谱-串联质谱法
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UV+ARTP复合诱变筛选MK-7高产菌株的研究
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作者 任明 孙荣 刘建民 《食品与药品》 CAS 2020年第2期111-115,共5页
目的利用紫外(UV)和常压室温等离子体(ARTP)复合诱变技术筛选甲萘醌-7(MK-7)高产菌株。方法以产MK-7的纳豆芽孢杆菌为出发菌株,利用UV+ARTP复合诱变筛选MK-7高产菌株,并对突变菌株的遗传稳定性进行研究。结果从初筛的77株突变株中获得一... 目的利用紫外(UV)和常压室温等离子体(ARTP)复合诱变技术筛选甲萘醌-7(MK-7)高产菌株。方法以产MK-7的纳豆芽孢杆菌为出发菌株,利用UV+ARTP复合诱变筛选MK-7高产菌株,并对突变菌株的遗传稳定性进行研究。结果从初筛的77株突变株中获得一株MK-7高产菌株UA31#,其产量由出发菌株的7.8 mg/L提高到20.5 mg/L,经12代传代培养性能稳定。结论通过UV+ARTP复合诱变可获得遗传稳定性良好的高产MK-7菌株。 展开更多
关键词 紫外 常压室温等离子体 复合诱变 纳豆芽孢杆菌 甲萘醌-7
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高效液相色谱法测定复配营养强化剂维生素K_(2)的含量
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作者 王守靖 张静 +1 位作者 赵娜 刘建宇 《中国食品工业》 2024年第9期80-82,共3页
建立高效液相色谱法测定复配营养强化剂中维生素K_(2)(七烯甲萘醌MK-7)的含量。本方法利用维生素K_(2)在波长248nm处有最大吸收,对样品进行甲醇分散,50℃提取,甲醇为流动相,高效液相色谱测定。结果表明:MK-7标准溶液峰面积与浓度有较好... 建立高效液相色谱法测定复配营养强化剂中维生素K_(2)(七烯甲萘醌MK-7)的含量。本方法利用维生素K_(2)在波长248nm处有最大吸收,对样品进行甲醇分散,50℃提取,甲醇为流动相,高效液相色谱测定。结果表明:MK-7标准溶液峰面积与浓度有较好的线性关系;不同样品的精密度试验,相对标准偏差均小于5%,加标回收率均在95%~105%之间。此方法重复性好,准确度高,可用于复配营养强化剂中MK-7的测定。 展开更多
关键词 维生素K_(2)(七烯甲萘醌MK-7) 高效液相色谱 复配营养强化剂
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高效液相色谱-荧光检测法测定食品中维生素K2的含量 被引量:11
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作者 邓梦雅 彭祖茂 +3 位作者 朱丽 杨俊 杨世添 张协光 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第19期240-244,250,共6页
建立了高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)同时快速分离检测猪肉、猪肝、纯牛奶、酸奶、黄油、鸡蛋、豆豉、纳豆8种食品中2种维生素K2的方法。样品经酶解、皂化、萃取、氮吹复溶处理后,用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 m... 建立了高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)同时快速分离检测猪肉、猪肝、纯牛奶、酸奶、黄油、鸡蛋、豆豉、纳豆8种食品中2种维生素K2的方法。样品经酶解、皂化、萃取、氮吹复溶处理后,用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,柱后锌粉还原柱(35 mm×4.6 mm)衍生,以甲醇(含有二氯甲烷10%、冰醋酸0.03%、氯化锌1.5 g/L、无水乙酸钠0.5 g/L)为流动相,进入荧光检测器进行检测。结果表明,四烯甲萘醌(Menatetrenone4,MK-4)、七烯甲萘醌(Menatetrenone7,MK-7)在15 min内分离出峰。2种维生素K2在各自的线性范围内关系良好,相关系数r=1.0000。当取样量为2 g,定容2 mL时,MK-4的检出限为0.01μg/100 g,定量限为0.04μg/100 g;MK-7的检出限为0.06μg/100 g,定量限为0.2μg/100 g。当取样量为10 g,定容2 mL时,MK-4的检出限为0.002μg/100 g,定量限为0.008μg/100 g;MK-7的检出限为0.012μg/100 g,定量限为0.04μg/100 g。精密度(RSD)均不超过3.56%,回收率为80.6%~95.5%。8种食品中,猪肉、纯牛奶、酸奶、黄油、鸡蛋中仅含有MK-4,其中纯牛奶中含量最低,仅为(0.34±0.02)μg/100 g,鸡蛋中含量最高,达(25.38±0.85)μg/100 g。猪肝、豆豉、纳豆中仅含MK-7,其中猪肝含量较低,为(25.45±0.83)μg/100 g,纳豆中含量最为丰富,高达(923.20±11.45)μg/100 g。该法准确、可靠、高效,可用于食品中维生素K2的高通量检测。 展开更多
关键词 高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD) 食品 维生素K2 四烯甲萘醌(MK-4) 七烯甲萘醌(MK-7)
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高效液相色谱法测定食品中维生素K_(1)和维生素K_(2)的含量 被引量:9
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作者 孔凡华 郭倩 +5 位作者 白沙沙 徐佳佳 李东 王竹 张雪松 崔亚娟 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第4期226-231,共6页
建立高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)测定食品中维生素K1和维生素K2含量的分析方法。方法:配方奶粉、酸奶、纳豆冻干粉和鸡胗冻干粉经酶解、异丙醇分散、正己烷萃取、旋转蒸发复溶后,使用Thermo Acclaim^(TM)120C18色谱柱(150 mm... 建立高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)测定食品中维生素K1和维生素K2含量的分析方法。方法:配方奶粉、酸奶、纳豆冻干粉和鸡胗冻干粉经酶解、异丙醇分散、正己烷萃取、旋转蒸发复溶后,使用Thermo Acclaim^(TM)120C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,锌粉还原柱(50 mm×4.6 mm)衍生,以900 mL甲醇:100 mL四氢呋喃(含冰醋酸0.3 mL,氯化锌1.5 g,无水乙酸钠0.5 g)为流动相,激发波长为243 nm,发射波长为430 nm,分离维生素K 1(Vitamin K 1,VK 1)、四烯甲萘醌(menaquinone-4,MK-4)、七烯甲萘醌(menaquinone-7,MK-7)和九烯甲萘醌(menaquinone-9,MK-9)。结果:VK 1、MK-4、MK-7和MK-9在20~1000μg/L范围内与峰面积有良好线性关系。配方奶粉、酸奶、纳豆冻干粉和鸡胗冻干粉中VK1、MK-4、MK-7、MK-9含量的相对标准偏差(RSD)均小于5%,表明精密度好。配方奶粉、酸奶和纳豆冻干粉不同水平加标回收率分别为85.0%~107.8%、85.8%~109.6%、85.1%~102.7%,回收率的RSD均小于5%,表明回收率高,相对标准偏差小。结论:实验建立的方法重复性好、准确度高,可以精准定量食品中维生素K_(1)和维生素K_(2)的含量。 展开更多
关键词 高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD) 维生素K_(1)(VK_(1)) 维生素K_(2)(VK_(2)) 四烯甲萘醌(MK-4) 七烯甲萘醌(MK-7) 九烯甲萘醌(MK-9)
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基于RNA-seq分析bdhA敲除对枯草芽孢杆菌产纳豆激酶和MK-7的影响
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作者 黄茜琳 黄俊宝 +9 位作者 高旭丽 罗雅妮 陶伟 郭明雨 刘永圆 吴晶 吴超 薛正莲 陈宇 刘艳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2394-2406,共13页
纳豆激酶(nattokinase,NK)具有多种生理功能,是治疗心血管疾病的理想药物。甲萘醌-7(menaquinone-7,MK-7)是人体不可缺少的脂溶性维生素之一,可预防骨质疏松和帕金森等疾病。【目的】提高枯草芽孢杆菌中NK和MK-7共同生产的产量,揭示重... 纳豆激酶(nattokinase,NK)具有多种生理功能,是治疗心血管疾病的理想药物。甲萘醌-7(menaquinone-7,MK-7)是人体不可缺少的脂溶性维生素之一,可预防骨质疏松和帕金森等疾病。【目的】提高枯草芽孢杆菌中NK和MK-7共同生产的产量,揭示重组菌中共同生产NK和MK-7的机理,为MK-7和NK的生成提供新的代谢工程策略。【方法】以枯草芽孢杆菌为出发菌株,敲除2,3-丁二醇脱氢酶基因(bdhA),构建一株能增加NK和MK-7共同生产的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168-ΔbdhA。利用RNA-seq分析NK和MK-7合成途径关键酶编码基因的变化,总结NK和MK-7共同生产的机制。【结果】与原始菌株相比,Bacillus subtilis 168-ΔbdhA中2,3-丁二醇含量降低64.0%,为2.76 g/L。NK和MK-7的产量较原始菌株提高30.0%和60.0%。RNA-seq分析表明,中心碳代谢、氧化磷酸化和NK及MK-7合成等过程相关的基因表达存在差异。NK负调控因子codY下调2.19倍。在蛋白质分泌途径中,secA下调0.37倍,tatAD和tatC分别上调2.81倍和0.50倍。【结论】bdhA的敲除阻断了2,3-丁二醇的碳通量,促进甘油的吸收,碳通量更多地流向NK和MK-7的合成途径。负调控因子codY的下调促进NK转录,蛋白转运相关途径基因的上下调促进MK-7的胞外分泌,从而实现其产量的增加。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 纳豆激酶 甲萘醌-7 2 3-丁二醇脱氢酶 RNA-SEQ
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Menaquinone-7 production from maize meal hydrolysate by Bacillus isolates with diphenylamine and analogue resistance 被引量:2
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作者 Jian-zhong XU Wei-guo ZHANG 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2017年第6期462-473,共12页
A menaquinone-7(MK-7) high-producing strain needs to be isolated to increase MK-7 production, in order to meet a requirement of MK-7 given the low MK-7 content in food products. This article focuses on developing MK... A menaquinone-7(MK-7) high-producing strain needs to be isolated to increase MK-7 production, in order to meet a requirement of MK-7 given the low MK-7 content in food products. This article focuses on developing MK-7 high-producing strains via screening and mutagenesis by an atmospheric and room temperature plasma(ARTP) mutation breeding system. We isolated an MK-7-producing strain Y-2 and identified it as Bacillus amyloliquefaciens, which produced(7.1±0.5) mg/L of MK-7 with maize meal hydrolysate as carbon source. Then, an MK-7 highproducing strain B. amyloliquefaciens H.β.D.R.-5 with resistance to 1-hydroxy-2-naphthoic acid, β-2-thienylalanine, and diphenylamine was obtained from the mutation of the strain Y-2 using an ARTP mutation breeding system. Using strain H.β.D.R.-5, efficient production of MK-7 was achieved((30.2±2.7) mg/L). In addition, the effects of nitrogen sources, prenyl alcohols, and MgSO_4 on MK-7 production were investigated, suggesting that soymeal extract combined with yeast extract, isopentenol, and MgSO4 was beneficial. Under the optimized condition, the MK-7 production and biomass-specific yield reached(61.3±5.2) mg/L and 2.59 mg/L per OD600 unit respectively in a 7-L fermenter. These results demonstrated that strain H.β.D.R.-5 has the capacity to produce MK-7 from maize meal hydrolysate, which could reduce the substrate cost. 展开更多
关键词 Menaquinone-7 Bacillus amyloliquefaciens Analog resistance Diphenylamine resistance Maize meal hydrolysate
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