甲酰基肽受体2介导脂氧素A4减轻缺氧/复氧所致大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的探讨甲酰基肽受体2(FPR2)介导脂氧素A4(LXA4)减轻缺氧/复氧所致大鼠心肌细胞凋亡的作用。方法将大鼠心肌细胞H9C2分为空白对照组、缺氧/复氧组、LXA4处理组。空白对照组细胞不做任何处理,缺氧/复氧组细胞建立缺氧/复氧模型,LXA4处理组细胞在缺氧/复氧处理后给予10 nmol/L LXA4干预。检测各组心肌细胞FPR2 mRNA的表达情况及细胞凋亡情况,并计算凋亡指数。结果缺氧/复氧组、LXA4处理组、空白对照组细胞的FPR2 mRNA相对表达量依次升高,而凋亡指数依次降低(均P<0.05)。结论 LXA4在FPR2介导下减轻了缺氧/复氧损伤导致的心肌细胞凋亡。

脊髓损伤组织匀浆通过甲酰基肽受体2促进神经元突起的生长

背景:前期研究观察到神经干细胞新分化的神经元表达甲酰基肽受体2,并证实甲酰基肽受体2能促进神经干/祖细胞迁移,诱导向神经元分化。脊髓损伤组织中存在甲酰基肽受体2配体,然而不同的配体与甲酰基肽受体2结合可能导致不同、甚至相反的生物学效应。目的:探讨脊髓损伤产生的配体与甲酰基肽受体2作用后对神经元突起生长的影响。方法:采用酶消化法提取胎鼠大脑皮质神经元;制备SD大鼠脊髓损伤模型,提取损伤脊髓组织匀浆。①实验分组1:观察甲酰基肽受体2激活对神经元突起的影响,分组如下:对照组、甲酰基肽受体2阻断剂组(即添加WRW4)、脊髓匀浆组、脊髓匀浆+WRW4组;②实验分组2:观察甲酰基肽受体2激活后AKT和ERK信号通路阻断对神经元突起的影响,分组如下:对照组、AKT和ERK信号通路阻断剂组(即添加Ly294002+PD98059)、脊髓匀浆组、脊髓匀浆+Ly294002+PD98059组。神经元细胞贴壁24 h后,按上述分组处理7 d,免疫荧光染色共聚焦显微镜观察脊髓匀浆激活甲酰基肽受体2对神经元突起的影响;按上述分组处理30 min,Western blotting检测磷酸化蛋白水平;按上述分组处理24 h,Western blotting检测F-actin水平,观察在甲酰基肽受体2特异性阻断剂WRW4存在的情况下,对MAPK和PI3K/Akt通路中关键蛋白磷酸化的影响。结果与结论:①脊髓损伤组织匀浆液能够使神经元突起长度、初级分枝数、分枝节点数显著增加,这种增加效应大部分被甲酰基肽受体2受体特异性阻断剂WRW4阻断;②脊髓损伤组织匀浆液能够使神经元中ERK1/2和Akt的磷酸化增加,这种效应能够被WRW4阻断;③Akt信号通路阻断剂Ly294002和Erk信号通路阻断剂PD98059能够阻断脊髓匀浆的促进作用;④脊髓损伤组织匀浆能够使F-actin表达量明显增加,这种效应能够被甲酰基肽受体2特异性阻断剂WRW4所阻断;⑤这些实验结果说明,脊髓匀浆液能够通过激活甲酰基肽受体2促进神经元突起生长,这种作用机制可能与ERK1/2和Akt的磷酸化增加相关。

甲酰基肽受体1促进创伤性脑损伤后小胶质细胞诱导的神经炎症

目的观察模式识别受体在创伤性脑损伤(TBI)后炎性反应中的作用,并探讨可能的调控机制。方法将成年C57小鼠按照随机数字表法随机分为假手术组(Sham组)和TBI组,每组各3只,分别将Sham组正常皮层组织和TBI后3 d损伤周围皮层组织进行转录组测序分析;将小鼠随机分为Sham组和4个不同时间点TBI组(术后6 h、1 d、3 d和7 d),每组各6只,通过蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光检测Fpr1的表达变化情况;然后将小鼠随机分为Sham组、TBI组、TBI+溶剂组和TBI+HCH6-1(Fpr1抑制剂)干预组,每组各6只,通过Western blot、脑含水量测定和行为学检测等实验评估各组炎性反应和神经功能等。两组比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果TBI组损伤周围皮层组织Fpr1的蛋白表达水平在第3天高于Sham组最显著(相对表达量为2.480±0.331,t=7.757,P<0.01),且主要表达于小胶质细胞。TBI+HCH6-1(Fpr1抑制剂)干预组中炎症分子IL-1β、IL-18、TNF-α、Caspase-1和NLRP3的蛋白表达水平均低于TBI+溶剂组(t=2.161、4.245、2.992、5.945、4.409,P<0.05)。在行为学方面,TBI+HCH6-1(Fpr1抑制剂)干预组小鼠在第3天和第7天mNSS行为学评分低于TBI+溶剂组(t=4.183、3.162,P<0.05);TBI+HCH6-1(Fpr1抑制剂)干预组小鼠在第7天转角实验中左转%低于TBI+溶剂组(t=2.273,P<0.05);TBI+HCH6-1(Fpr1抑制剂)干预组小鼠在第7天挂线实验中停留时间长于TBI+溶剂组(t=3.123,P<0.05)。结论Fpr1促进TBI后小胶质细胞诱导的神经炎症,抑制Fpr1能够改善TBI后神经功能缺陷。

甲酰基肽受体1在ARDS中的作用研究进展

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是呼吸内科与重症医学科常见的危重疾病,严重危害人体的健康.肺部损伤后,炎症反应的调节对肺部损伤的恢复起到至关重要的作用.中性粒细胞是急性肺损伤、ARDS中的主要炎症反应细胞,而甲酰基肽受体是存在于中性粒细胞表面、以介导其趋化为主要功能的G蛋白偶联受体.目前研究发现,甲酰基肽受体1介导了ARDS过程中的炎症反应,特别是炎症细胞的趋化、聚集,抑制其表达后,炎症反应明显减轻,对ARDS中肺损伤的保护及修复具有重要作用,可作为治疗的重要靶点.

异丙酚抑制甲酰基肽受体1减轻脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤

为探讨异丙酚在脓毒症诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)小鼠模型中的保护作用并通过体外试验观察其对甲酰基肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)激动剂诱导的人中性粒细胞活化的抑制作用,将40只小鼠随机分为4组,每组10只:1组为用50μL 10%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)处理的假手术小鼠;2组为用50μL异丙酚(40 mg/kg)处理的假手术小鼠;3组为用50μL 10%DMSO处理的脓毒症小鼠(该模型通过单次腹腔注射200μL LPS构建);4组为用50μL异丙酚(40 mg/kg)处理的脓毒症小鼠。采用免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织中FPR1、淋巴细胞抗原6G(lymphocyte antigen 6 complex locus G, Ly6G)表达;髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)测定试剂盒评估肺组织中MPO活性;ELISA检测试剂盒评估支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中主要炎性因子水平。此外,体外条件下于培养的人中性粒细胞中分别添加DMSO或异丙酚,采用分光光度法检测中性粒细胞释放弹性蛋白酶和超氧化物的情况;Western blotting检测促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信号通路蛋白的表达情况。结果显示,脓毒症显著增加了小鼠肺部组织FPR1和Ly6G蛋白表达水平及MPO活性(均P<0.01),而经腹腔异丙酚注射可有效减少FPR1和Ly6G蛋白表达并显著抑制MPO活性(P<0.01)。与假手术组相比,脓毒症小鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和CXCL1表达水平显著增加(均P<0.01),而异丙酚腹腔注射显著逆转了上述变化(均P<0.05)。体外试验结果显示,异丙酚(5~100μmol/L)剂量依赖性地显著减少了N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine, fMLF)诱导的中性粒细胞弹性蛋白酶和超氧化物释放(均P<0.05)。Western blotting分析显示,异丙酚显著降低了fMLF诱导的人中性粒细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK)、p38 MAPK和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)的磷酸化水平(均P<0.001)。由此,在脓毒症诱导的小鼠ALI模型中,异丙酚腹腔注射可显著改善其肺部损伤,下调FPR1和Ly6G表达及肺组织中中性粒细胞数。进一步体外试验证实,异丙酚对fMLF诱导的中性粒细胞活化的抑制作用是通过与FPR1结合介导的,可抑制FPR1下游信号转导和炎症级联反应。

人参皂苷Rg1调节miR-144-3p/FPR2/p38信号通路对实验性脑出血大鼠血脑屏障损伤和神经炎症的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1调节miR-144-3p对实验性脑出血大鼠神经炎症和血脑屏障损伤的影响,以及对甲酰基肽受体2(FPR2)/p38通路的调控作用。方法:90只SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、人参皂苷Rg1低剂量组(10 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量组(40 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量+ago-miR-144-3p组(40 mg/kg人参皂苷Rg1+ago-miR-144-3p),每组18只,除对照组外均通过右侧尾状核注射胶原酶Ⅱ法构建实验性脑出血大鼠模型,按照各组要求腹腔注射给药以及脑内注射给药。对大鼠神经功能损伤进行评分;干湿比重法测定大鼠脑含水量;ELISA检测大鼠脑组织匀浆TNF-α、IL-6、IL-1β水平;电镜观察脑水肿周围超微结构;伊文思蓝(EB)法测定大鼠血脑屏障通透性;qRT-PCR与Western blot测定miR-144-3p/FPR2/p38通路表达。结果:与对照组相比,脑出血组大鼠血脑屏障损伤加重,大鼠神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达增加(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与脑出血组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组大鼠血脑屏障损伤减轻,神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达降低(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);ago-miR-144-3p可逆转人参皂苷Rg1对大鼠血脑屏障、神经炎症的保护作用(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可能通过调控miR-144-3p/FPR2/p38轴抑制大鼠血脑屏障损伤及神经炎症。

FPR-3及KI67在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨甲酰基肽受体3(FPR-3)及细胞增殖抗原KI67在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法回顾性分析安徽理工大学第一附属医院(淮南市第一人民医院)2019a 1月1日至2021a 12月31日诊治的100例乳腺癌患者临床资料及随访资料,对其术后癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化检测KI67表达水平,采用免疫荧光法检测FPR-3表达水平,采用χ^(2)检验结合临床病理资料行相关性分析。结果乳腺癌组织与癌旁组织中FPR-3总阳性率为76%、10%,两者之间的差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织与癌旁组织中KI67总阳性率为72%、12%,两者之间的差异有统计学意义(P<0.05);FPR-3及KI67表达与TNM分期有相关性,差异有统计学意义(P<0.05);FPR-3及KI67表达与淋巴结转移具有相关性,差异有统计学意义(P<0.05);FPR-3及KI67表达与病理类型具有相关性,差异有统计学意义(P<0.05);FPR-3表达及KI67与年龄及肿瘤大小都不具有相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。FPR-3与KI67在乳腺癌组织中的阳性表达水平呈正相关,用Spearman等级相关分析处理两个指标之间的相关性,其中r=0.375,P<0.05判定为差异有统计学意义,KI67会随着FPR-3阳性表达的升高而升高。结论FPR-3及KI67为诊断乳腺癌的重要诊治辅助指标。