5-脂加氧酶在胃癌中的表达与环氧化酶-2和甲酰肽受体2的关系及其临床意义

目的 探讨5-脂加氧酶(5-LOX)在胃癌中的表达与5-LOX与环氧化酶-2(COX-2)和甲酰肽受体2(FPR_(2))的关系及其临床意义。方法 采用免疫组织化学法检测70例胃癌组织中3个指标的表达情况,并分析三者间的关系以及临床病理联系。沉默5-LOX基因观察对COX-2及FPR_(2)的表达有无影响。结果 ≤45岁和>45岁患者5-LOX阳性表达率分别为76.0%和84.4%;肿块直径≤3 cm和>3 cm者阳性表达率分别为82.1%和81.0%;低分化腺癌、中-高分化腺癌和黏液腺癌阳性表达率分别为80.0%、80.0%和90.0%,组间差异均无统计学意义(P>0.05)。在无、有淋巴结转移组中5-LOX阳性率分别为71.8%和93.5%;在Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ期胃癌中5-LOX的阳性表达率分别为75.0%和95.5%,组间差异均有统计学意义(P<0.05);5-LOX在COX-2阳性和阴性病例中阳性率分别为81.6%和81.0%,组间差异无统计学意义(P>0.05);5-LOX在FPR_(2)阳性和阴性病例中阳性率分别为78.1%和84.2%,组间差异无统计学意义(P>0.05)。在SGC-7901转染实验中,沉默5-LOX基因对COX-2及FPR_(2)的表达没有影响。结论 5-LOX在胃癌的侵袭、转移过程中起重要作用,同时靶向5-LOX和COX-2有望成为治疗胃癌的有效手段。

消退素D1通过甲酰肽受体2调控小胶质细胞极化改善大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)是否通过甲酰肽受体2(formyl peptide receptor 2,FPR2)调节小胶质细胞极化,减轻脑缺血/再灌注后的炎症损伤。方法运用线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将造模后的大鼠随机分为模型组(MCAO),RvD1组和RvD1联合FPR2抑制剂Boc-2(RvD1+Boc-2)组,另设假手术(Sham)对照组。脑缺血后24 h,运用TTC染色法检测脑梗死体积和免疫荧光法检测髓过氧化物酶(MPO),免疫荧光双染法进行标记FPR2/Iba-1、CD16/Iba-1和CD206/Iba-1的表达,RT-qPCR法检测M1型释放的TNF-α、iNOS、IL-1β和M2型释放的Arg-1、TGF-β1、IL-10 mRNA的表达。结果RvD1明显减少脑梗死体积和MPO的表达,并且其受体FPR2在小胶质细胞上表达。RvD1降低M1型CD16+/Iba-1+细胞数和TNF-α、IL-1β、iNOS mRNA的表达,增加M2型CD206+/Iba-1+细胞数和TGF-β1、IL-10、Arg-1 mRNA的表达,联合使用FPR2抑制剂Boc-2后RvD1的这些作用都受到抑制。结论RvD1通过FPR2可以改善脑缺血/再灌注后炎症损伤,其作用与调控激活的小胶质细胞从M1型向M2型方向极化有关。

甲酰肽受体2通过p38 MAPK通路参与复发性流产的发生

目的 探讨甲酰肽受体2(FPR2)在复发性流产患者(RSA)绒毛组织中的表达,及其对滋养细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。明确FPR2对滋养细胞功能的影响,分析其在复发性流产中的作用,并对机制进行探讨。方法 收集临床样本(正常30例,RSA30例),利用免疫组织化学染色、Real-time PCR和Western blotting等方法,分析FPR2在RSA患者和正常绒毛组织间的定位和表达差异;应用CRISPR/Cas-9技术,对人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/Svneo的FPR2进行敲降并验证;采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验检测FPR2敲降后滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力改变;单独或联合使用p38 MAPK抑制剂SB203580后,采用免疫荧光染色和Western blotting分析FPR2敲降后磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)及p38 MAPK的表达水平;采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验检测滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力改变。结果 复发性流产患者绒毛组织FPR2表达增加;FPR2敲低显著提高了HTR-8/Svneo细胞增殖、迁移和侵袭能力。FPR2敲低显著上调p-p38 MAPK表达水平,而加入SB203580抑制p38 MAPK通路后,FPR2敲降对滋养细胞的迁移和侵袭能力增强作用被部分逆转。结论 FPR2在RSA患者绒毛滋养细胞中高表达,并通过p38 MAPK信号通路抑制滋养细胞的迁移、侵袭,可能在复发性流产发生中发挥重要作用。

沉默甲酰肽受体2基因对人胶质瘤U87细胞生长和侵袭迁移能力的影响

目的探讨沉默甲酰肽受体2（FPR2）基因对胶质瘤U87细胞生长、迁移和侵袭能力的影响及其可能机制。方法采用Western blot法和免疫组化法检测正常胶质细胞、胶质瘤细胞、正常脑组织和胶质瘤组织中FPR2蛋白的表达水平。以小干扰RNA（siRNA）沉默人胶质瘤U87细胞中FPR2基因的表达，采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测FPR2 mRNA和蛋白的表达量；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染FPR2 siRNA 24、48和72 h后对U87细胞增殖的作用；采用流式细胞术检测FPR2基因沉默对U87细胞凋亡水平的影响。以Transwell小室和裸鼠成瘤实验检测FPR2基因沉默对U87细胞迁移侵袭和成瘤能力的影响。采用Western blot法和酶联免疫吸附实验检测细胞周期和迁移相关蛋白的表达和释放水平。结果与正常胶质细胞和正常脑组织比较，FPR2蛋白在胶质瘤细胞和胶质瘤组织中的表达明显上调。与空白对照组和阴性对照组比较，siRNA干扰组U87细胞中FPR2 mRNA和蛋白的相对表达量明显降低。siRNA干扰组U87细胞在转染24、48和72 h时的生长抑制率分别为（23.1±5.1）%、（39.6±5.6）%和（44.4±6.7）%，与阴性对照组[分别为（3.2±0.6）%、（5.7±0.8）%和（7.9±0.9）%]比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。siRNA干扰组U87细胞在转染48 h后的凋亡率为（17.4±2.1）%，明显高于阴性对照组[（5.4±0.5）%]和空白对照组[（3.8±0.3）%]；siRNA干扰组迁移细胞数为（108.7±9.5）个，明显低于空白对照组[（312.9±17.5）个]和阴性对照组[（304.4±15.7）个]；siRNA干扰组侵袭细胞数为（19.3±3.2）个，明显低于空白对照组[（106.9±8.5）个]和阴性对照组[（102.4±7.4）个]，差异均有统计学意义（P〈0.05）。与阴性对照组比较，siRNA干扰组的裸鼠成瘤能力明显降低。siRNA干扰可明显下调细胞周期蛋白cyclin D1的表达和血管内皮生长因子（VEGF）的表达和释放，其主要通过β－catenin信号通路来实现。结论siRNA沉默FPR2基因可抑制胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭，并通过下调cyclin D1的表达和抑制VEGF的水平来实现。

甲酰肽受体2研究进展

甲酰肽受体2(FPR2)是一种趋化物质受体,属于G蛋白偶联受体家族。FPR2不仅高表达于嗜中性粒细胞和单核/巨噬细胞,在其他多种组织细胞中也有表达。FPR2的配体可分为多肽/蛋白和脂类两大类。FPR2与不同的激动剂结合产生不同的效应。研究发现,FPR2参与多种生理和病理过程,包括防御反应、炎症、神经退行性疾病、肿瘤、糖脂代谢紊乱相关疾病等。FPR2是治疗多种疾病的潜在靶标。本文对近年来在FPR2激动剂、信号转导、生理功能和病理意义方面的研究进展作一综述。

补阳还五汤通过甲酰肽受体2减轻大鼠脑缺血再灌注后氧化应激损伤

目的:探讨补阳还五汤通过甲酰肽受体2(FPR2)对脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激反应的抑制作用及神经保护作用。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤联合FPR2抑制剂(Boc-2)组,假手术组仅游离血管,不做插线处理。其他各组运用改良Longa法构建大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h后再灌注;再灌注后补阳还五汤组和补阳还五汤联合Boc-2组给予补阳还五汤(16 g·kg^(-1))灌胃,每日2次;补阳还五汤联合Boc-2组术前30 min腹腔注射Boc-2(0.4 mg·kg^(-1));假手术组与模型组给予等体积生理盐水。再灌注24 h后,退化神经元染色(FJC)观察FJC阳性细胞数目的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测缺血侧脑组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达;生化试剂盒检测缺血侧脑组织中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽(GSH),一氧化氮(NO)水平;免疫荧光检测还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶2(NOX2)平均荧光强度。结果:与假手术组比较,模型组的FJC阳性细胞数目增加(P<0.01),Bcl-2表达减少(P<0.01),Bax和cleaved Caspase-3表达增加(P<0.01),NO和MDA含量增加(P<0.05,P<0.01),GSH和SOD活性下降(P<0.05,P<0.01),NOX2表达增加(P<0.01);与模型组比较,补阳还五汤组FJC阳性细胞数目减少(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),cleaved Caspase-3和Bax明显减少(P<0.05,P<0.01),NO和MDA减少(P<0.05,P<0.01),GSH和SOD增加(P<0.01),NOX2表达减少(P<0.01)。给予Boc-2后,补阳还五汤的作用部分被抑制。结论:补阳还五汤可以减轻脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与FPR2调控NOX2的表达有关。

胃癌组织中甲酰肽受体2表达与胃癌患者预后相关性研究

目的探讨胃癌组织中甲酰肽受体2(FPR2)的表达与胃癌患者预后的相关性。方法选取病理科169例胃癌患者的病理组织标本和相对应的癌旁非癌组织标本,采用免疫组织化学染色方法检测两组组织标本中FPR2的表达情况,进而分析FPR2的表达在胃癌组织及癌旁组织中有无差异性。将胃癌组织分为两组,分别为FPR2表达阳性组及FPR2表达阴性组,采用Graphpad Prism 5软件分别对两组的存活时间和多项临床病理参数进行分析。结果胃癌组织中FPR2表达阳性率为72.2%(122/169),明显高于癌旁组织的22.5%(38/169),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在胃癌组织中,FPR2阳性表达组的标本数为122例,FPR2阴性表达组的标本数为47例,FPR2阳性表达组患者的总体存活时间短于FPR2阴性表达组;同时,FPR2的表达与淋巴结转移、浆膜浸润及TNM分期及性别呈正相关。Cox回归分析结果表明,FPR2是影响胃癌预后的一个独立危险因素。结论 FPR2在胃癌组织中表达,与患者的总体存活时间、淋巴结转移、浆膜浸润和TNM分期呈正相关,并且可以作为胃癌的独立危险因素。

甲酰肽受体2促进胃癌细胞侵袭及转移作用研究

目的通过体外胃癌细胞实验和体内裸鼠成瘤实验,探讨甲酰肽受体2(FPR2)对胃癌细胞侵袭、转移的作用。方法采用慢病毒转染技术干扰胃癌细胞SGC7901和XN0422中FPR2的表达,通过实时定量逆转录聚合酶链反应和Western blot方法检测干扰效率。利用划痕实验、Transwell实验、体内裸鼠皮下成瘤及腹腔种植实验,观察XN0422-mock、SGC7901-mock组以及XN0422-sh FPR2、SGC7901-sh FPR2组的侵袭转移、皮下成瘤和腹腔转移能力的改变。结果慢病毒感染XN0422、SGC7901细胞,FPR2表达量下降>80%。XN0422-sh FPR2组、SGC7901-sh FPR2组中侵袭、转移能力,皮下成瘤能力和腹腔转移能力均低于XN0422-mock组和SGC7901-mock组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FPR2可同时促进体外胃癌细胞的侵袭转移能力、体内皮下成瘤和腹腔转移能力。

甲酰基肽受体2介导脂氧素A4减轻缺氧/复氧所致大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的探讨甲酰基肽受体2(FPR2)介导脂氧素A4(LXA4)减轻缺氧/复氧所致大鼠心肌细胞凋亡的作用。方法将大鼠心肌细胞H9C2分为空白对照组、缺氧/复氧组、LXA4处理组。空白对照组细胞不做任何处理,缺氧/复氧组细胞建立缺氧/复氧模型,LXA4处理组细胞在缺氧/复氧处理后给予10 nmol/L LXA4干预。检测各组心肌细胞FPR2 mRNA的表达情况及细胞凋亡情况,并计算凋亡指数。结果缺氧/复氧组、LXA4处理组、空白对照组细胞的FPR2 mRNA相对表达量依次升高,而凋亡指数依次降低(均P<0.05)。结论 LXA4在FPR2介导下减轻了缺氧/复氧损伤导致的心肌细胞凋亡。

甲酰肽受体激活剂丹皮酚抑制类风湿关节炎的作用

目的探讨丹皮酚作为甲酰肽受体激活剂抑制类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的药理作用。方法由高通量基因表达数据库取得目标数据集,利用R语言进行多个数据集合的联合分析,探究未经处理、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理和丹皮酚与LPS共处理三组巨噬细胞差异表达基因,并分析其富集途径。在STRING数据库中构建了蛋白质-蛋白质相互作用网络,并在Cytoscape软件中将其可视化。利用TNF-α刺激成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)为模型,验证Hub基因甲酰肽受体2(formyl peptide receptor 2,FPR2)对RA炎症的抑制作用。结果通过生物信息学分析,得到169个与炎症发生相关的差异基因,275个与丹皮酚作用机制相关的差异基因,对两组差异基因进行联合分析,发现FPR在丹皮酚抗炎机制中起到关键作用;对丹皮酚的作用机制进行进一步的研究发现,丹皮酚能够激活FPR,丹皮酚对FLS炎症的抑制作用被Trp-Arg-Trp-Trp-Trp-Trp-NH2(WRW4)所挽救。结论丹皮酚可以通过FPR抑制RA的炎症发展。

人参皂苷Rg1调节miR-144-3p/FPR2/p38信号通路对实验性脑出血大鼠血脑屏障损伤和神经炎症的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1调节miR-144-3p对实验性脑出血大鼠神经炎症和血脑屏障损伤的影响,以及对甲酰基肽受体2(FPR2)/p38通路的调控作用。方法:90只SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、人参皂苷Rg1低剂量组(10 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量组(40 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量+ago-miR-144-3p组(40 mg/kg人参皂苷Rg1+ago-miR-144-3p),每组18只,除对照组外均通过右侧尾状核注射胶原酶Ⅱ法构建实验性脑出血大鼠模型,按照各组要求腹腔注射给药以及脑内注射给药。对大鼠神经功能损伤进行评分;干湿比重法测定大鼠脑含水量;ELISA检测大鼠脑组织匀浆TNF-α、IL-6、IL-1β水平;电镜观察脑水肿周围超微结构;伊文思蓝(EB)法测定大鼠血脑屏障通透性;qRT-PCR与Western blot测定miR-144-3p/FPR2/p38通路表达。结果:与对照组相比,脑出血组大鼠血脑屏障损伤加重,大鼠神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达增加(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与脑出血组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组大鼠血脑屏障损伤减轻,神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达降低(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);ago-miR-144-3p可逆转人参皂苷Rg1对大鼠血脑屏障、神经炎症的保护作用(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可能通过调控miR-144-3p/FPR2/p38轴抑制大鼠血脑屏障损伤及神经炎症。

妊娠糖尿病患者血清中FPR2的表达情况与Th1/Th2细胞平衡的相关性研究

目的探讨妊娠糖尿病(GDM)患者血清中甲酰肽受体2(FPR2)的表达情况与辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)平衡的相关性。方法采用回顾性研究,将2020年1月至2022年1月于北京市顺义区妇幼保健院进行产检并住院分娩的52例GDM孕妇设为研究组,并选择同期在北京市顺义区妇幼保健院产检和分娩的健康孕妇60名作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测两组孕妇血清中FPR2的相对表达水平;采用流式细胞术检测两组孕妇血清中Th1/Th2细胞比例;采用酶联免疫吸附试验检测两组孕妇血清中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10水平;采用Pearson法分析GDM患者血清中FPR2的表达水平与Th1/Th2细胞比例之间的相关性。结果研究组患者血清中FPR2、Th1表达水平分别为1.59±0.41、(9.59±2.56)%,均明显高于对照组[0.97±0.25、(8.61±2.02)%],Th2表达水平为(2.06±0.51)%,明显低于对照组[(3.28±0.88)%],且Th1/Th2细胞比例为5.11±1.02,高于对照组(3.20±0.79),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患者血清中IFN-γ、IL-2水平分别为(27.96±5.21)、(16.69±4.02)pg/mL,均明显高于对照组[(20.19±4.59)、(14.12±3.86)pg/mL],而IL-4、IL-10水平分别为(11.46±2.36)、(31.52±6.24)pg/mL,均明显低于对照组[(13.09±3.01)、(38.81±7.16)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson法分析结果显示,GDM患者血清中FPR2的表达与Th1/Th2细胞比例之间呈正相关(r=0.373,P<0.05)。结论GDM患者血清中FPR2高表达、Th1/Th2细胞比例升高,两者呈正相关,FPR2可能通过调节Th1/Th2细胞比例影响GDM的发生。

FPR2通过ERK1/2信号通路调控炎症状态下滋养细胞生物学功能

目的:明确甲酰肽受体2(FPR2)在炎症状态下对滋养细胞生物学功能的影响,分析其在绒毛膜羊膜炎中的作用,并探讨其机制。方法:收集10例绒毛膜羊膜炎患者和10例正常产妇的胎盘组织,利用免疫组化和Westernblot检测胎盘组织中FPR2的定位和表达。应用脂多糖(LPS)建立人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/SVneo体外炎症模型,利用Westernblot检测FPR2表达;应用小干扰RNA敲减FPR2基因,检测正常组、LPS处理组和LPS+FPR2敲减组细胞培养液上清中促炎因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,并通过EdU实验、流式细胞术、Transwell实验和划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移;利用Westernblot分析丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中关键因子细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p38和p-p38蛋白表达。结果:绒毛膜羊膜炎患者胎盘组织中FPR2表达显著增加(P<0.01)。FPR2敲减显著降低LPS诱导的HTR-8/SVneo细胞IL-6、IL-1β和TNF-α的分泌(P<0.01或P<0.05),同时减弱了LPS对HTR-8/SV⁃neo细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P<0.05或P<0.01);LPS激活了ERK1/2、JNK和p38信号通路(P<0.05或P<0.01),FRP2敲减后JNK和p38信号通路无显著变化,ERK1/2信号通路受到显著抑制(P<0.01)。结论:FPR2参与了炎症状态下滋养细胞功能的调节,其作用机制可能与ERK1/2信号通路有关。

长链非编码RNA lucat1对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)lucat1对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法 (1)采用实时荧光定量PCR法检测正常胃黏膜细胞GSE-1和胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中lncRNA lucat1和对甲酰肽受体2(FPR2)mRNA。(2)将体外培养的胃癌细胞SGC-7901、BGC-823分为观察组和对照组。观察组用Lipofectamine2000转染lucat1 shRNA,对照组不转染。转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测两组FPR2 mRNA相对表达量。(3)将体外培养的胃癌细胞BGC-823分为A、B、C组。A组转染lucat1 shRNA,B组转染lucat1 shRNA和FPR2过表达质粒,C组不转染。转染48 h,用Transwell小室实验和划痕实验观察各组细胞侵袭和迁移能力,结果分别用穿膜细胞数和细胞迁移距离表示。结果 (1)SGC-7901、BGC-823、GES-1细胞lncRNA lucat1相对表达量分别为3.651±0.332、3.023±0.331、1.000±0.098,FPR2 mRNA相对表达量分别为3.354±0.433、3.425±0.354、1.000±0.277。SGC-7901、BGC-823细胞lucat1、FPR2 mRNA相对表达量均明显高于GES-1细胞(P均<0.05)。(2)观察组、对照组SGC-7901细胞FPR2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.05、0.48±0.04,BGC-823细胞FPR2mRNA相对表达量分别为1.00±0.04、0.48±0.04,两组比较P<0.05。(3)Transwell小室实验A、B、C组穿膜细胞数分别为(143±7)、(194±9)、(233±8)个,三组穿膜细胞数两两比较P均<0.05。划痕实验A、B、C组细胞迁移距离分别为(0.342±0.027)、(0.534±0.021)、(0.652±0.029)mm,三组细胞迁移距离两两比较P均<0.05。结论 lncRNA lucat1可促进胃癌细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与上调FPR2表达有关。