三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2在肺癌A549和SPC-A-1细胞株中的表达及其意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在肺癌细胞株A549和SPC—A-1中的表达及其意义。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测两种肺癌细胞株中该基因的表达，应用流式细胞仪检测该蛋白的表达。结果ABCG2基因与蛋白在肺腺癌细胞株A549和SPC—A-1中均有表达，且A549的表达高于SPC—A-1。结论ABCG2可能参与肺癌耐药，可能也与肺癌的发生、发展有密切相关。

14-3-3蛋白家族的调控机制和生物学功能

14-3-3蛋白家族在真核细胞中广泛表达并高度保守,它们主要以同源/异源二聚体形式存在,可以同时与两个靶蛋白或一个靶蛋白的两个结构域相互作用。14-3-3蛋白通过磷酸化丝氨酸/苏氨酸介导和靶蛋白结合,从而发挥其调控功能。现对14-3-3蛋白的识别序列、与配体相互作用的特点,及其在细胞周期、凋亡、信号转导、线粒体/叶绿体前体蛋白跨膜转运中的调控机制和发挥的生物学功能进行综述。

钠-葡萄糖同向转运蛋白2(SGLT2)及其抑制剂研究进展

在2型糖尿病的发病机制中,提出了"八重奏"的病理生理理论,基于该理论,肾脏对糖尿病的重吸收作用也成为治疗的新靶点,而钠-葡萄糖同向轻化蛋白2(SGLT2)在肾近端小管表达,可介导葡萄糖的重吸收,增加尿糖排泄从而降低血糖,因此SGLT2有望成为2型糖尿病的治疗新药物,现将SGLT2的结构及在糖尿病患者中的表达以及临床研究结果相关文献进行回顾总结。

甲状旁腺激素相关蛋白、单羧酸转运泵家族1信号通路对肺腺癌细胞衰老的调节作用及其机制

目的探讨调节甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)、单羧酸转运泵家族1(MCT1)信号通路对Lewis肺腺癌细胞株LLC细胞衰老的影响及其机制。方法将LLC细胞分为A、B、C、D组,每组10孔。分别加入PTHrP信号通路激活剂PTHrP(1~34)、PTHrP受体竞争抑制物PTHrP(7~34)、MCT1信号通路抑制剂AZD3965、PBS培养72 h后收集细胞。用β-半乳糖苷酶(βGal)染色法观察各组细胞衰老程度,结果以细胞中βGal阳性染色面积占细胞总面积的百分比表示。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中PTHrP mRNA、MCT1 mRNA表达。建立细胞pHi与细胞内BCECF荧光强度关系的标准曲线,细胞pHi结果以495 nm/440 nm延荧光强度比值表示。按照试剂盒说明书操作检测各组细胞外乳酸水平。结果 A、B、C、D组细胞中βGal阳性染色面积占总细胞面积百分比分别为8.47%±0.15%、12.56%±0.20%、16.66%±0.20%、9.52%±0.30%。B、C组细胞中βGal阳性染色面积占总细胞面积百分比与D组相比,P均<0.05。A、B、C、D组细胞中PTHrP mRNA表达量分别为11.49±0.42、7.68±0.10、8.56±0.13、9.35±0.13,MCT1 mRNA表达量分别为7.84±0.19、4.38±0.09、3.53±0.10、6.58±0.21。A组细胞中PTHrP mRNA表达量高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞中PTHrP mRNA表达量低于C、D组(P均<0.05);C组细胞中PTHrP mRNA表达量低于D组(P<0.05);A组细胞中MCT1 mRNA表达量高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞中MCT1 mRNA表达量高于C组(P<0.05),但低于D组(P<0.05);C组细胞中MCT1 mRNA表达量低于D组(P<0.05)。A、B、C、D组细胞pHi分别为3.39±0.12、6.05±0.12、7.08±0.09、4.66±0.08,细胞外乳酸水平分别为(8.34±0.12)、(5.13±0.15)、(3.39±0.10)、(7.33±0.11)U。A组细胞pHi低于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞pHi低于C组(P<0.05),但是高于D组(P<0.05);C组细胞pHi高于D组(P<0.05);A组细胞外乳酸水平高于B、C、D组(P均<0.05);B组细胞外乳酸水平高于C组(P<0.05),但是低于D组(P<0.05);C组细胞外乳酸化水平低于D组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,各组细胞衰老程度与PTHrP mRNA表达量、MCT1 mRNA表达量、pHi、细胞外乳酸水平均相关,r分别为-0.613、-0.880、0.906、-0.961,P均<0.05。结论调节PTHrP、MCT1信号通路可以影响肺腺癌细胞衰老。其机制可能是由于PTHrP信号通路和MCT1信号通路相互影响,共同调节肺腺癌细胞的乳酸转运。

miR-144-3p通过调控ABCG2信号通路对膀胱癌细胞的影响

目的探究miR-144-3p通过调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)信号通路对膀胱癌细胞影响。方法选取2023年5月黑龙江省医院泌尿科实验室1株人膀胱癌T24细胞株为研究对象,细胞培养后接种6孔板中,将其随机分为A组、B组、C组,每组细胞均设置3个平行样本,每个样本细胞检测均设置3个复孔(每组共计12个样本量)。A组转染miR-144-3p模拟物,B组转染miR-144-3p抑制剂,C组转染无意义序列,另选正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞株为D组,以实时定量联合酶链式反应(quantification real-time polymerase chian reaction,qRT-PCR)法检测4组细胞中miR-144-3p表达情况,以CCK-8法检测4组细胞增殖活力,以Transwell检测细胞迁移数量,检测ABCG2通路蛋白表达情况;以双荧光素酶报告基因实验预测miR-144-3p与ABCG2靶向结合关系。结果转染前,T24细胞中miR-144-3p表达水平较SV-HUC-1细胞低,ABCG2水平较SV-HUC-1细胞高,差异有统计学意义(t=8.145、13.928,P<0.05);转染48 h时,miR-144-3p水平由低至高依次为B组、C组、A组,差异有统计学意义(P<0.05),ABCG2表达水平由低至高依次为A组、C组、B组,差异有统计学意义(P<0.05);转染48 h后,细胞增殖能力(A值)由低至高依次为A组、C组、B组,细胞凋亡率由低至高依次为B组、C组、A组,细胞迁移能力(个数)由低至高依次为A组、C组、B组,ABCG2表达水平由低至高依次为A组、C组、B组,差异有统计学意义(P<0.05);经在线数据库TargetScan预测,测得ABCG23’UTR与miR-144-3p存在结合靶点;共转染48 h时检测,3’-UTR-WT miR-144-3p组荧光素酶活性较3’-UTR-Wut miR-144-3p组低,差异有统计学意义(P<0.05);3’-UTA-WT NC组、3’-UTR-Mut NC组荧光素酶活性相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ABCG23’UTR与miR-144-3p存在结合靶点,miR-144-3p表达上调可抑制ABCG2表达,并抑制细胞迁移、增殖,促进细胞凋亡。

miR-9-5p和溶质载体家族26硫酸盐转运蛋白成员2在哮喘患儿血清中的表达及与疾病严重程度的相关性

目的探讨miR-9-5p和溶质载体家族26硫酸盐转运蛋白成员2(SLC26A2)在哮喘患儿血清中的表达情况及与疾病严重程度的相关性。方法选取2019年7月—2021年6月在杭州市富阳区第一人民医院就诊并确诊为哮喘的患儿168例为研究对象,根据疾病严重程度分为重度组(52例)、中度组(56例)及轻度组(60例),另选取同期在该院体检且与患儿一般资料匹配的健康儿童50例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测各组血清中miR-9-5p、SLC26A2 mRNA表达水平;检测各组血清炎症细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及C-反应蛋白(CPR)]水平;采用肺功能检测仪检测所有研究对象的肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC)];采用Pearson法分析miR-9-5p与SLC26A2表达水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-9-5p、SLC26A2水平预测重度哮喘患儿的价值。结果哮喘患儿血清中miR-9-5p、SLC26A2表达水平均低于对照组,且miR-9-5p、SLC26A2表达水平随着哮喘严重程度的增加而不断降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与健康儿童相比,哮喘患儿血清中TNF-α、CRP、IL-6表达均上升,FEV1、FEV1/FVC水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。哮喘患儿血清中miR-9-5p、SLC26A2水平与TNF-α、CRP及IL-6均呈负相关关系(r_(miR-9-5p)=-0.506、-0.657、-0.411,rSLC26A2=-0.301、-0.399、-0.279,均P<0.05),与FEV1、FEV1/FVC均呈正相关关系(r_(miR-9-5p)=0.376、0.46,rSLC26A2=0.262、0.254,均P<0.05)。miR-9-5p与SLC26A2表达呈正相关关系(r=0.477,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清miR-9-5p、SLC26A2水平预测重度哮喘患儿的曲线下面积(AUC)分别为0.934(95%CI:0.885~0.967)、0.884(95%CI:0.826~0.928),对应的灵敏度分别为98.15%、77.78%,特异度分别为82.46%、83.33%,血清miR-9-5p、SLC26A2水平联合预测重度哮喘患儿的AUC为0.974(95%CI:0.936~0.992),灵敏度为98.14%,特异度为85.96%。结论miR-9-5p和SLC26A2在哮喘患儿血清中低表达,二者呈正相关关系,且联合检测对评估重度哮喘患儿的临床价值高于单一指标,具有一定价值,可作为临床诊断重度哮喘患儿的潜在标志物。

胶质瘤与恶性脑膜瘤患者肿瘤组织ABCG2、IGFBP-2表达及预后的关系分析

目的探讨胶质瘤与恶性脑膜瘤患者肿瘤组织三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)表达及预后的关系。方法选取资阳市第一人民医院确诊胶质瘤患者96例和恶性脑膜瘤患者38例,采用免疫组化法检测患者肿瘤组织中ABCG2、IGFBP-2阳性细胞的表达,计算其阳性细胞百分率并划分阳性等级,并对比两组ABCG2、IGFBP-2表达差异及与预后死亡和复发的关系。结果胶质瘤组肿瘤组织ABCG2、IGFBP-2总阳性率与恶性脑膜瘤组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。胶质瘤组随访中复发率和病死率与恶性脑膜瘤组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。生存分析曲线结果显示,ABCG2、IGFBP-2高表达组出现不良事件(死亡、神经功能中度缺损)时间提前于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着胶质瘤、恶性脑膜瘤患者肿瘤组织ABCG2、IGFBP-2阳性细胞百分率等级的升高,其预后的复发率与病死率也逐级升高。

钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂调控心肌相关信号通路的研究进展

钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂是近几年来倍受关注的口服降糖药物,其通过抑制肾脏近曲小管的葡萄糖重吸收有效控制血糖水平,还可以调节代谢并对心血管、肾脏起到独立保护作用。近年来研究发现,SGLT-2抑制剂可通过AMP活化蛋白激酶(AMPK)、活性氮氧化物(RONS)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)、核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)、转化生长因子(TGF)β/SMAD同源物(Smad)等信号通路改善心肌梗死、心肌纤维化等导致的心肌损伤,缓解心室重构,保护心脏。

宫颈鳞癌组织中HIF-2、ABCG2的表达及意义

目的观察宫颈鳞癌组织中缺氧诱导因子2(HIF-2)、腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测88例宫颈鳞癌组织(观察组)、47例正常宫颈组织(对照组)中的HIF-2、ABCG2,分析其与宫颈鳞癌临床病理特征的关系及二者表达的相关性。结果观察组HIF-2、ABCG2的阳性表达率均高于对照组(P均<0.05)。HIF-2、ABCG2表达均与宫颈鳞癌FIGO分期、淋巴结转移及分化程相关(P均<0.05),与患者年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05);HIF-2与ABCG2的表达呈正相关(r=0.316,P=0.003),且二者均与宫颈鳞癌患者预后有关(P均<0.05)。结论宫颈鳞癌组织中ABCG2、HIF-2呈高表达,二者可能参与宫颈鳞癌的发生、发展。

miR-144-3p靶向调控ABCG2信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的研究miR-144-3p靶向调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding transporter G family member 2,ABCG2)对胃癌(gastriccancer,GC)HGC-27细胞侵袭和迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法通过qRT-PCR检测人GCHGC-27细胞株和人胃黏膜上皮GES-1细胞株中miR-144-3p和ABCG2的表达情况;通过靶基因预测软件预测miR-144-3p和ABCG2靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向结合关系;通过qRT-PCR检测miR-144-3p mimic或miR-144-3p inhibitor转染GC细胞后miR-144-3p及ABCG2的表达水平;通过明胶酶谱实验检测对转染ABCG2 siRNA的GC细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)活性的影响;通过Transwell侵袭和迁移实验检测转染miR-144-3p mimic、miR-144-3p inhibitor、ABCG2 siRNA对GC细胞侵袭和迁移能力的影响.结果与正常细胞组人胃黏膜上皮GES-1细胞株相比, GC细胞组人GCHGC-27细胞株中miR-144-3p的表达量明显降低, ABCG2的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);靶基因预测miR-144-3p和ABCG2 3’UTR存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实了miR-144-3p和ABCG2靶向结合关系;与对照组相比,转染miR-144-3p mimic组GC细胞中miR-144-3p的表达明显升高, ABCG2的表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),转染miR-144-3p inhibitor则表现出相反的作用;明胶酶谱实验检测结果表明ABCG2 siRNA转染可显著抑制GC细胞中MMP-2和MMP-9蛋白活性,抑制GC细胞侵袭和迁移能力,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 MiR-144-3p能够抑制GC细胞侵袭和迁移能力,其作用机制与靶向调控ABCG2-MMP-2/9信号通路有关.

甲酸转运蛋白FocA的分子结构揭示其是以五聚体形式存在的一个通道蛋白

FocA是甲酸-亚硝酸转运蛋白家族(FNT)的一个代表性成员,在细菌、古细菌、真菌、藻类和寄生虫中负责短链酸的转运。甲酸-亚硝酸转运蛋白家族中所有成员蛋白的分子结构和转运机制都是未知的。在这项工作中,我们解析了大肠杆菌中FocA蛋白的三维晶体结构,分辨率高达2.25。这个晶体结构显示,FocA构成了一个对称的五聚体,其中每个单体包含6个跨膜螺旋片段。而且,尽管FocA与水通道蛋白Aquaporin在序列上缺乏同源性,但它们的单体整体结构却异常相似。这些结果意味着FocA应该是一个跨膜通道蛋白,而不是此前认为的转运蛋白。进一步的结构分析识别出了通道中的重要氨基酸残基,明确了通道路径,并揭示了两个对通道起收紧作用的位点。但是与水通道蛋白Aqua-porin不同,FocA对水分子并没有通透性,却允许甲酸通过。在结构生物学和生物化学方面的进一步研究为阐明FocA的通道活性机理提供了重要线索。

复发性脑胶质瘤组织TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达与细胞增殖侵袭恶性行为的关系及预测预后的效能

目的探讨复发性脑胶质瘤组织四跨膜超家族成员1蛋白(TM4SF1)mRNA、锌转运体1(ZnT1)mRNA、miR-542-3p表达与细胞增殖侵袭恶性行为的关系及预测预后的效能。方法选取2016年3月至2020年3月我院收治的169例复发性脑胶质瘤患者,根据6个月预后情况分为死亡组、生存组。比较2组基线资料、组织TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达,并比较不同TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达者脑胶质瘤WHO分级,采用Cox比例风险回归模型分析预后相关因素,受试者工作特征曲线(ROC)及ROC下面积(AUC)分析各指标预测预后的效能,卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier,KM)生存曲线分析不同TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达水平者生存率。结果死亡组距离首次手术时间、脑胶质瘤WHO分级、肿瘤切除程度、TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达与生存组比较,差异有统计学意义(P<0.05);以2组TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达均值为分界进行分层,TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p高表达与低表达患者脑胶质瘤WHO分级比较,差异有统计学意义(P<0.05);Cox比例风险回归模型将距离首次手术时间、脑胶质瘤WHO分级、肿瘤切除程度控制后,TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p仍与患者预后相关(P<0.05);TM4SF1 mRNA+ZnT1 mRNA+miR-542-3p预测预后的AUC为0.938,大于单一指标预测(P<0.05);TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p高危患者患者生存率低于低危达者(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织TM4SF1 mRNA、ZnT1 mRNA、miR-542-3p表达与细胞增殖侵袭恶性行为关系密切,是预后的主要影响因素,三者联合可为临床预测预后提供参考依据。

IL-1β对BeWo细胞ABCG2 mRNA表达的影响

目的:探讨人滋养细胞ABC膜转运蛋白家族G2蛋白(ABCG2)mRNA的表达与白细胞介素-1β(IL-1β)的关系。方法:体外培养人胎盘滋养细胞BeWo,分为IL-1β干预组和空白对照组,每组重复3次,干预组分别于12、24、48、72小时收集BeWo细胞,抽提总RNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组细胞ABCG2 mRNA表达。结果:实时荧火定量PCR检测干预12、24、48、72小时ABCG2 mRNA表达量:IL-1β干预组1.19±0.02、1.90±0.04、2.59±0.03、2.98±0.07(×106copies/μg RNA),空白对照组1.00±0.03、1.01±0.03、0.99±0.03、1.04±0.02(×106copies/μg RNA),IL-1β干预组ABCG2 mRNA表达量显著高于相应时间点空白对照组的表达(F=6657.235,P=0.000)。IL-1β干预组后一时间点的表达量显著高于前一时间点的表达量(F=783.772,P=0.000),且IL-1β干预各组的表达量显著高于任一时间点空白对照组的表达量(F=744.127,P=0.000)。结论:IL-1β能增强BeWo细胞ABCG2的表达,提示IL-1β可能在转录水平上调ABCG2 mRNA表达。

ABCG2抑制剂对ALA-PDT诱导皮肤癌细胞凋亡的影响

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporter group 2,ABCG2)抑制剂Ko-143对5-氨基乙酰丙酸-光动力疗法(5-aminolaevulinic acid-photodynamic therapy,ALA-PDT)诱导人皮肤基底癌细胞TE354.T和皮肤鳞癌细胞SCL-1凋亡的影响。方法体外培养TE354.T和SCL-1细胞,分为对照组、ALA-PDT组(2 mmol·L^(-1)5-ALA+PDT)、Ko-143组(10μmol·L^(-1)Ko-143)和ALA-PDT+Ko-143组(2 mmol·L^(-1)5-ALA+10μmol·L^(-1)Ko-143+PDT),应用MTT法检测细胞增殖,应用流式细胞术检测细胞凋亡,应用ELISA法检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性和丙二醛(malonydialdehyed,MDA)含量,应用蛋白印迹(Western blot)法检测细胞中原卟啉IX(protoporphyrin IX,PPIX)、ABCG2、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白的表达。结果与对照组相比,ALA-PDT组和Ko-143组TE354.T、SCL-1细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中MDA的含量及PPIX和Cleaved caspase-3蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05),细胞中GSH-Px的活性及Bcl-2/Bax蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),ALA-PDT组TE354.T和SCL-1细胞中ABCG2表达水平的差异均无统计学意义(P>0.05),Ko-143组TE354.T和SCL-1细胞中ABCG2蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05);与ALA-PDT组相比,ALA-PDT+Ko-143组TE354.T、SCL-1细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞中MDA含量、PPIX和Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞中GSH-Px活性及细胞中ABCG2和Bcl-2/Bax蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论Ko-143可抑制ABCG2的表达,导致PPIX蛋白在细胞中的蓄积水平升高,进而提高ALA-PDT诱导TE354.T、SCL-1细胞氧化应激损伤和凋亡水平。

抑制核因子κB与妊娠糖尿病大鼠子宫胰岛素抵抗的关系

目的:观察妊娠糖尿病(GDM)大鼠子宫组织中,核因子-κB(NF-κB)及葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达,探讨GDM子宫胰岛素抵抗与抑制NF-κB表达的关系。方法:将30只SD孕鼠随机分为正常妊娠对照(NC)组、妊娠糖尿病(GDM)组和PDTC干预组,每组10只。采用链脲霉素(STZ)腹腔注射建立大鼠GDM模型。PDTC干预组大鼠在建模后每日腹腔注射PDTC(40 mg/kg)。大鼠分娩前及妊娠20 d处死留取子宫标本,观察子宫组织的病理变化。用免疫组化染色法及Western blot法检测子宫组织中GLUT-4与NF-κB的表达变化。结果:GDM组NF-κB的表达明显高于NC组(P<0.01);PDTC干预组NF-κB的表达明显降低(P<0.01)。GDM组GLUT-4的表达明显低于NC组(P<0.01);PDTC干预组GLUT-4的表达与GDM组比较明显升高(P<0.01)。结论:抑制核因子κB的活性能使GDM大鼠子宫组织中GLUT-4的表达升高,提示GDM大鼠子宫胰岛素抵抗的发生可能与核因子κB活化介导的GLUT-4表达下调有关。

基于TCGA数据库分析SLC5A1在胰腺癌中的表达及潜在促癌作用

目的基于癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库分析溶质载体家族5-成员1(solute carrier family 5-member 1,SLC5A1)在胰腺癌中的表达及其与临床病理、预后的相关性,探索其在胰腺癌发生、进展中的作用。方法利用GEPIA分析TCGA数据库中胰腺癌数据,比较SLC5A1在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,同时利用LinkedOmics和GEPIA分析其在胰腺癌中表达与不同临床病理特征的相关性;利用cBioPortal和LinkedOmics分析胰腺癌中与SLC5A1表达相关的基因,并利用DAVID和KEGG进行信号通路聚类;探讨SLC5A1与胰腺癌不同基因亚型标志物表达的相关性。结果SLC5A1 mRNA表达在胰腺癌组织显著高于非胰腺癌组织(P<0.05)。在胰腺癌中与SLC5A1高表达相关的基因大多位于细胞膜和细胞核,负责蛋白和离子的结合,参与细胞生物功能、代谢调节,其高表达与葡萄糖摄取、糖酵解/糖异生、胰腺分泌等的基因信号通路呈正相关。SLC5A1的表达与胰腺癌异常分化的内分泌外分泌(aberrantly differentiated endocrine exocrine,ADEX)亚型的胰岛素(insulin,INS)、核受体亚家族5-组A-成员2(nuclear receptor subfamily 5-group A-member 2,NR5A2)和蛋白酶-丝氨酸-3(protease-serine-3,PRSS3)表达呈正相关,差异有统计学意义;与胰腺祖细胞型叉头框A3(forkhead box A3,FOXA3)、肝细胞核因子1α(hepatocyte nuclear factor 1-alpha,HNF1A)、叉头框A2(forkhead box A2,FOXA2)、肝细胞核因子1β(hepatocyte nuclear factor 1β,HNF1B)、胰十二指肠同源框因子-1(pancreatic and duodenal homeobox 1,PDX1)、肝细胞核因4-γ(hepatocyte nuclear factor 4-gamma,HNF4G)、肝细胞核因子4-α(hepatocyte nuclear factor 4-alpha,HNF4A)、多毛和增强子断裂1(hairy and enhancer of split 1,HES1)表达均呈正相关,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论SLC5A1在胰腺癌中高表达;其高表达与葡萄糖摄取、糖酵解、胰腺分泌的基因信号通路呈正相关,与胰腺癌祖细胞亚型及ADEX亚型密切相关。

一例原发性肾性糖尿患者的临床与基因突变分析

目的探讨1例原发性肾性糖尿(primary renal glucosuria,PRG)患者的临床表现及其分子生物学基础。方法详细收集患者的临床资料、生化检查及影像学检查结果,抽取外周静脉血,提取基因组DNA,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增SLC5A2基因的14个外显子及其与内含子的交界区,测序确定突变情况。结果患者临床表现、实验室检查和影像学检查符合PRG诊断。基因突变分析显示,患者SLC5A2基因c DNA序列的第877位腺嘌呤A突变为胸腺嘧啶G(c.877 A>G),造成第293位氨基酸由丝氨酸改变为半胱氨酸(p.Ser293Cys),该突变位于SLC5A2的第7外显子。蛋白序列的保守性分析和突变蛋白的功能分析均表明p.Ser293Cys为致病性突变。结论通过SLC5A2基因突变分析,从分子遗传学方面证实患者PRG的诊断。临床上血糖正常的患者出现尿糖阳性且无其他近端肾小管功能障碍表现的患者应该考虑到该疾病可能,基因分析有助于确诊。

毕赤酵母GT1的原核表达与体外功能鉴定

为了开展体外互作实验,以pXMJ19质粒为载体构建pXMJ19-gt1-His重组质粒,通过单因素优化实验获得毕赤酵母甘油转运体GT 1的最优表达宿主为C41(DE3);最优表达条件为OD 600达到0.7时加入终浓度为0.1 mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),于30℃、110 r/min诱导10 h。通过超速离心验证了部分GT1蛋白在大肠杆菌中位于细胞质膜上,并筛选得到针对GT1重溶解率最高的去垢剂NP-40。在去垢剂环境下通过镍离子亲和层析纯化得到GT1蛋白,然后利用等温滴定量热法体外检测其与甘油的结合能力,结果表明:GT1与甘油在体外相互作用产生放热反应,且测得其与甘油的平衡解离常数K D值为6.58μmol/L。实验说明原核表达的GT1蛋白具有活性,且与甘油的体外相互作用明显,为GT1以甘油为配体进行结晶以及解析其三维结构提供了研究基础。

分子信标熔解曲线法分析SLC11A1基因插入/缺失多态性

目的针对溶质转运蛋白家族11成员1蛋白(SLC11A1)基因插入/缺失多态性位点rs17235416,建立基于荧光定量PCR(q PCR)的分子信标熔解曲线法对其进行基因分型。方法针对该位点设计特异性的引物和分子信标探针,联合应用非对称q PCR、分子信标探针和熔解曲线分析等技术建立分子信标熔解曲线法进行基因分型。对210份全血样本提取DNA后,用上述方法和改进的PCR-RFLP法对该位点进行检测和分型,并以测序法验证。结果 210份样本的基因型TGTG+/+、TGTG-/-和TGTG+/-分布频率分别为69.5%、4.8%和25.7%。分子信标熔解曲线法和PCR-RFLP法的分型结果与测序结果完全一致。结论国内外首次成功建立分子信标熔解曲线法检测SLC11A1基因rs17235416位点;该方法在大人群样本检测中具有简便、快速、准确等优点。