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甲醇营养型酵母高密度培养过程中甲醇和乙醇的GC快速检测 被引量:19
1
作者 邓兵兵 方宏清 +2 位作者 薛冲 赵洪亮 刘志敏 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期26-29,共4页
采用气相色谱法 (GC)快速检测甲醇营养型酵母发酵液中的甲醇、乙醇含量 ,具有样品处理简便 ,测定时间较短 ,结果重现性好的特点。在 1~ 10mg/mL范围内具有很好的线性关系。在毕赤酵母高密度高表达发酵过程中应用此法对甲醇和乙醇进行... 采用气相色谱法 (GC)快速检测甲醇营养型酵母发酵液中的甲醇、乙醇含量 ,具有样品处理简便 ,测定时间较短 ,结果重现性好的特点。在 1~ 10mg/mL范围内具有很好的线性关系。在毕赤酵母高密度高表达发酵过程中应用此法对甲醇和乙醇进行实时监控 ,细胞终密度超过 30 0g/L(干重 )。本方法为甲醇营养型酵母工程菌的发酵中试工艺研究提供了重要的发酵生化参数。 展开更多
关键词 气相色谱 甲醇营养型酵母 甲醇 乙醇 GC 快速检测 高密度培养 表达系统
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SARS-CoV S1蛋白在甲醇营养型酵母中表达及鉴定 被引量:1
2
作者 何仰东 姜曼 +1 位作者 倪兵 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第18期1837-1840,共4页
目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute resp iratorysyndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能。方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,... 目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute resp iratorysyndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能。方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,经过酶切和测序鉴定后,通过电穿孔法将重组质粒S1-pMETαA转化入宿主酵母菌株PMAD11,使其在甲醇的诱导下表达目的蛋白。最后用覆盖分析法对重组转化子初步分析,SDS-PAGE和W esntern b lotting法鉴定目的蛋白的表达和特异性。结果酶切鉴定和测序结果证实了S1基因成功地克隆到pMETαA载体中;覆盖分析、SDS-PAGE和免疫印迹法证实S1基因得到正确的表达。结论利用酵母表达系统,成功地克隆和表达了SARS-CoV S1蛋白,为进一步纯化该蛋白和研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 SARS-COV S1蛋白 真核表达系统 甲醇营养型酵母
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甲醇营养型酵母表达系统的研究进展 被引量:12
3
作者 何诚 朱运松 《生物工程进展》 CSCD 1998年第3期7-11,共5页
甲醇营养型酵母越来越被人们用作外源基因的表达系统。本文综述其在表达质粒构建,表达株的筛选,表达产物的糖链加工以及它分拣外源蛋白进入过氧化物酶体等的特点,不仅具有广泛的商业用途,而且在理论研究特别是膜蛋白结构与功能方面... 甲醇营养型酵母越来越被人们用作外源基因的表达系统。本文综述其在表达质粒构建,表达株的筛选,表达产物的糖链加工以及它分拣外源蛋白进入过氧化物酶体等的特点,不仅具有广泛的商业用途,而且在理论研究特别是膜蛋白结构与功能方面也有潜在应用价值。 展开更多
关键词 甲醇营养型酵母 基因表达系统 过氧化物酶体
全文增补中
人胰岛素样生长因子Ⅱ在甲醇营养型酵母P.pastoris中的表达、分泌和性质研究 被引量:1
4
作者 李旌军 黄秉仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期893-898,共6页
为获得IGF-Ⅱ的高效表达,构建了其多拷贝、分泌型表达载体:含有5个串联的IGF-Ⅱ表达单元;由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达;利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌.线形化表达载体转化P.pastoris蛋白酶缺陷... 为获得IGF-Ⅱ的高效表达,构建了其多拷贝、分泌型表达载体:含有5个串联的IGF-Ⅱ表达单元;由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达;利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌.线形化表达载体转化P.pastoris蛋白酶缺陷型菌株后,筛选到有IGF-Ⅱ表达和分泌的阳性转化子;进一步优化表达、培养条件后,IGF-Ⅱ在高密度发酵上清中的产量可达60 m g/L.对P.pastoris产生的rhIGF-Ⅱ的性质分析表明,其具有正确的分子量,N 端和较好的生物活性. 展开更多
关键词 甲醇营养型酵母 分泌 IGF-Ⅱ 表达 性质
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外源基因在甲醇营养型酵母中的表达及优化表达策略
5
作者 佟玉品 《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》 2002年第3期113-116,共4页
甲醇营养型酵母作为第二代酵母近年来在基因工程产品制备过程中得以广泛应用 ,目前已成为独具特色的外源基因表达系统。外源基因在表达过程中受多种因素影响。本文就外源基因在甲醇营养型酵母中的表达。
关键词 外源基因 甲醇营养型酵母 基因表达 优化表达 策略 异源基因表达
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甲醇营养型酵母表达外源蛋白的特点及策略 被引量:2
6
作者 范乔 刘宏迪 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期304-306,共3页
关键词 甲醇营养型酵母 乙醇氧化酶 启动子 蛋白表达
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表达于甲醇营养型巴斯德毕赤氏酵母中的重组雪花莲凝集素(GNA)的大规模生产和纯化
7
作者 BaumgartnerP 袁宁 朱春宝 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期137-137,共1页
关键词 甲醇营养型巴斯德毕赤氏酵母 重组雪花莲凝集素 生产 纯化
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重组人OCIF结构域D1~D6基因在毕赤酵母中的表达 被引量:3
8
作者 张兴群 王梁华 +1 位作者 焦炳华 袁勤生 《分子科学学报》 CAS CSCD 2004年第4期11-18,共8页
 利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1~D6(简称O CIFm)编码基因片段;...  利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1~D6(简称O CIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高. 展开更多
关键词 阳性表达 M基因 重组表达质粒 破骨细胞样细胞 表达产物 凋亡 原核 结构域 毕赤酵母 甲醇营养型酵母
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毕赤酵母外源基因表达系统研究进展 被引量:7
9
作者 杜中军 朱水芳 +1 位作者 黄文胜 翟衡 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第4期7-11,共5页
巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、... 巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等。 展开更多
关键词 毕赤酵母 外源基因表达系统 研究进展 甲醇营养型酵母
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酵母作为外源基因表达系统的研究进展 被引量:11
10
作者 李艳 王正祥 诸葛健 《生物工程进展》 CSCD 2001年第2期10-14,共5页
甲醇营养型酵母和裂殖酵母作为外源基因表达的有效系统 ,正引起人们广泛研究。甲醇营养型酵母具有易诱导调控、适用于高密生长、能高效表达外源蛋白的特点。裂殖酵母有许多与高等真核细胞相似的特点 ,是研究真核分子生物学和真核基因表... 甲醇营养型酵母和裂殖酵母作为外源基因表达的有效系统 ,正引起人们广泛研究。甲醇营养型酵母具有易诱导调控、适用于高密生长、能高效表达外源蛋白的特点。裂殖酵母有许多与高等真核细胞相似的特点 ,是研究真核分子生物学和真核基因表达有用的工具。本文综述了这两个酵母表达系统的特点。 展开更多
关键词 甲醇营养型酵母 裂殖酵母 表达系统 外源基因
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抗Aβ人源融合抗体在毕赤酵母中的高效表达纯化及性质研究 被引量:1
11
作者 刘立颖 许士奇 +3 位作者 赵雪梅 杜洪震 张伟 梁平 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期40-44,共5页
抗β-淀粉样多肽(Aβ)的抗体对老年性痴呆(AD)病变有清除作用,人源融合抗体由可识别结合Aβ的多肽序列A与人抗体Fc段连接重组构成。构建的单拷贝表达载体PA0815-αAFc,可以在毕赤酵母中高效表达。此表达载体含有一个AFc表达单元,并在受... 抗β-淀粉样多肽(Aβ)的抗体对老年性痴呆(AD)病变有清除作用,人源融合抗体由可识别结合Aβ的多肽序列A与人抗体Fc段连接重组构成。构建的单拷贝表达载体PA0815-αAFc,可以在毕赤酵母中高效表达。此表达载体含有一个AFc表达单元,并在受严格调控的醇氧化酶启动子的控制下由甲醇诱导表达,并利用α因子前导肽引导融合抗体分泌。载体线性化后整合入甲醇营养型酵母Pichia pastoris(Pp)GS115基因组中,经鉴定表达单位具有良好的遗传稳定性。对筛选得到的高分泌表达融合抗体的细胞株进行表达和培养条件的优化,使诱导上清液中融合抗体的产量选到100mg/L。利用Protein A层析柱分离、纯化,获得纯度较高的融合抗体。经鉴定分析其具有正确的分子量和N末端,且融合抗体可与Aβ抗原结合并能吸引巨噬细胞吞噬和清除抗原抗体复合物,具有抗体生物学活性。这是首次利用甲醇营养型酵母表达系统成功实现了抗Aβ融合抗体的高效分泌表达及产物纯化鉴定,为进一步研究AD及其治疗提供了新的途径。 展开更多
关键词 抗β-淀粉样多肽 人源融合抗体 甲醇营养型酵母表达系统 阿尔茨海默病 免疫治疗 纯化 性质
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Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂cDNA在P.pastoris酵母菌中的表达和鉴定
12
作者 何诚 唐辉滨 +2 位作者 田昱 宋后燕 朱运松 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期547-552,共6页
将编码379个氨基酸残基的PAI-1cDNA插入到含AOX1启动子和PHO1分泌信号肽序列的甲醇营养型酵母载体中,构建成表达质粒pYIS-1.表达质粒转化P.pastoris甲醇营养型酵母细胞,筛选His+Mut-表... 将编码379个氨基酸残基的PAI-1cDNA插入到含AOX1启动子和PHO1分泌信号肽序列的甲醇营养型酵母载体中,构建成表达质粒pYIS-1.表达质粒转化P.pastoris甲醇营养型酵母细胞,筛选His+Mut-表型的转化子,经低密度摇瓶培养,1%甲醇诱导表达7d后,培液经SDS-PAGE分析,PAI-1生物活性测定和Westernblot证实表达出分子量为43~51kD的4条PAI-1条带.表达的PAI-1能有效地分泌到培液中,占培液总蛋白的26%左右,达4mg/L培液;其比活性为1.16×104AU/mg. 展开更多
关键词 甲醇营养型酵母 表达 寡糖链 PAI-1
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人TRAIL在毕氏酵母表达系统中的表达
13
作者 王梁华 焦炳华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期420-424,共5页
目的 在甲醇营养型酵母(Pichia)中,表达人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)分子。方法 将可溶性TRAIL基因片段插入酵母表达载体pIC3.5,经氯化锂转化酵母GS115,甲醇诱导表达,5d后用... 目的 在甲醇营养型酵母(Pichia)中,表达人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)分子。方法 将可溶性TRAIL基因片段插入酵母表达载体pIC3.5,经氯化锂转化酵母GS115,甲醇诱导表达,5d后用SDS-PAGE和Western-blot进行分析,并用L929细胞测定其活性。结果 在酵母细胞中表达的TRAIL,SDS-PAGE分析占总蛋白的50%以上。 展开更多
关键词 甲醇营养型酵母 TRAIL 毕氏酵母表达系位 表达
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重组巴氏毕赤酵母恒化培养动力学及代谢迁移特性研究 被引量:8
14
作者 郭美锦 吴康华 +2 位作者 庄英萍 储炬 张嗣良 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期617-624,共8页
通过对甲醇营养型毕赤酵母基因工程菌以碳源甘油为限制性基质进行恒化培养动力学试验 ,结果认为 :(1 )细胞光密度与其干、湿重呈线性关系 ,当细胞光密度 (OD60 0 )为 1 0 0时细胞湿重 (WCW)为 1 2 8 3g L ,细胞干重 (WDW)则为 2 2 9g L... 通过对甲醇营养型毕赤酵母基因工程菌以碳源甘油为限制性基质进行恒化培养动力学试验 ,结果认为 :(1 )细胞光密度与其干、湿重呈线性关系 ,当细胞光密度 (OD60 0 )为 1 0 0时细胞湿重 (WCW)为 1 2 8 3g L ,细胞干重 (WDW)则为 2 2 9g L ;(2 )基因工程菌P .pastoris的生长与限制性基质甘油残留浓度的关系符合Monod关系式 ,通过 1 μ对 1 S进行线性回归得 μmax=0 .366h- 1,Ks=0 .1 82 3g L ,经参数推导甘油最大菌体得率系数YG =0 .54g g ,菌体维持生长消耗底物系数m =0 .0 0 69g (g·h) ;氧最大菌体系数YX O2 =30 .96g moL ,菌体维持生长时消耗氧系数mO2 =0 .0 0 0 8mol (g·h) ,最适理论稀释速率Dm =0 .341h- 1;(3)从氨水的消耗速率和呼吸商 (RQ)的变化认为随着比生长速率 (μ)的增大 ,甘油代谢流从糖原异生和磷酸戊糖途径线性地向糖酵解和三羧酸循环途径进行代谢迁移 。 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恒化培养 代谢迁移 动力学 重组人血清白蛋白
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毕赤氏酵母工程菌高密度发酵表达恶性疟原虫融合抗原的研究 被引量:5
15
作者 郭美锦 吴康华 +5 位作者 储炬 庄英萍 张嗣良 黄大庆 张青锋 潘卫庆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期456-459,共4页
The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in geneti... The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in genetically engineered methylotrophic Pichia pastoris were investigated by shake flask experiments in this paper.The results showed:(1)fermentation period with methanol inducement is about 96 hours;(2)the optimum methanol concentration as sole carbon source is 10g/L;(3)the range of pH is from 6.0 to 7.0. On the base of above experimental results the cell high-density fermentation had been done on the FMG-5L fermentor with multi-sensors.The results showed that the cell optical density (OD 600) can reached 550 and the ma-ximum expression level of target proteins was 780mg/L which was 4 times higher or more than the shake flask culture’s. 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恶性疟原虫融合抗原 发酵条件 优化 高密度发酵 表达
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人白细胞介素17基因的分离及其在酵母中的表达
16
作者 周俐梅 王嘉玺 +4 位作者 周泾 蔡欣 王利红 段聚宝 邹民吉 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期172-173,共2页
1995年,美国Immunex公司的姚政兵等人从激活的人T淋巴细胞中鉴定了一种新型的白细胞介素,即人白细胞介素17(human inter-leukm-17,hIL-17)。与此同时,法国的Fossiez等也从人类基因组中分离出相应的基因,二者的核苷酸序列完全相同。hIL-1... 1995年,美国Immunex公司的姚政兵等人从激活的人T淋巴细胞中鉴定了一种新型的白细胞介素,即人白细胞介素17(human inter-leukm-17,hIL-17)。与此同时,法国的Fossiez等也从人类基因组中分离出相应的基因,二者的核苷酸序列完全相同。hIL-17主要由活化的记忆性CD4^+T细胞产生,通过表达于许多细胞上的受体发挥作用,它能活化转录因子NF-κβ并诱导成纤维细胞中IL-6。 展开更多
关键词 人白细胞介素17 基因的分离 基础医学研究 成纤维细胞 医学科学院 啤酒酵母 毕赤酵母 甲醇营养型毕赤酵母 酵母表达系统 核苷酸序列
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重组毕赤酵母表达人血清白蛋白-人白介素2融合蛋白过程的代谢特性 被引量:2
17
作者 王舒 郑志永 +5 位作者 詹晓北 史仲平 高敏杰 刘立明 金坚 李华钟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期11-17,共7页
分析了重组甲醇营养型毕赤酵母在5L多参数自控发酵罐上生产人血清白蛋白-人白介素2融合蛋白(HSA-IL-2)的发酵过程。在使用多种在线传感器和离线检测参数的基础上,应用相关性分析的方法将细胞生长的关键酶(乙醇氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脱... 分析了重组甲醇营养型毕赤酵母在5L多参数自控发酵罐上生产人血清白蛋白-人白介素2融合蛋白(HSA-IL-2)的发酵过程。在使用多种在线传感器和离线检测参数的基础上,应用相关性分析的方法将细胞生长的关键酶(乙醇氧化酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶)酶活和代谢特性相关联。实验结果显示,甲醇诱导后葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶的酶活分别下降了46.1%和66.8%,说明胞内代谢流发生了迁移:三羧酸循环(TCA)和磷酸戊糖途径(HMP)中代谢流通量下降,甲醇完全氧化代谢成为主要代谢流。此外,在不同控制策略下,乙醇氧化酶的酶活和重组蛋白HSA-IL-2表达量也呈现出一定的差异。高溶氧低甲醇控制方式下HSA-IL2的表达量达到27mg/L,比低溶氧高甲醇条件下的表达量高33.7%。 展开更多
关键词 重组甲醇营养型毕赤酵母 在线测量 酶活分析 相关性分析
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重组人可溶性凋亡素-2配体在Pichia系统中的表达 被引量:2
18
作者 王梁华 朱玉平 +3 位作者 娄永华 彭燕 冯煜 焦炳华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期248-251,共4页
目的 :在甲醇营养型酵母 (Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。 方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 ... 目的 :在甲醇营养型酵母 (Pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。 方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 d,SDS- PAGE和 Western- blotting确认表达 ,L 92 9细胞鉴定活性。结果 :发现在酵母细胞中重组表达的 TRAIL在 SDS-PAGE上占总蛋白的 5 0 %以上 ,用抗人 TRAIL多抗可以确认表达了 TRAIL重组分子 ,杀伤肿瘤细胞的比活性较原核表达后复性的 TRAIL有明显提高 ,并能诱导几株肿瘤细胞 DNA片段化 ,说明 TRAIL可能已正确折叠并形成活性必需的高级结构。结论 :在 Pichia系统中正确表达了人可溶性 TRAIL分子。 展开更多
关键词 重组人可溶性凋亡素-2 Pichia表达系统 细胞毒 甲醇营养型酵母
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Metabolomics Study in Methylotrophic Yeast: A Minireview
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作者 Jye Ping Fam Suriana Sabri +2 位作者 Syarul Nataqain Baharum Abu Bakar Salleh Siti Nurbaya Oslan 《Journal of Life Sciences》 2017年第1期11-18,共8页
关键词 甲醇酵母 代谢组学 甲醇营养型酵母 重组蛋白 诱导型启动子 生物系统 成本效益 醇氧化酶
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毕赤氏酵母AOX2基因启动子突变体的分离和鉴定
20
作者 戴秀玉 王韫恂 +1 位作者 周坚 王忆琴 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期369-369,共1页
关键词 AOX2基因启动子 毕赤氏酵母 突变体 醇氧化酶 微生物研究所 外源蛋白 中国科学院 基因表达 蛋白表达 甲醇营养型酵母
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