甲醇-氯仿提取革胡子鲶下脚料中的磷脂酰胆碱

利用实验室现有条件,根据磷脂酰胆碱易溶于甲醇、乙醇等低碳醇、乙醚和氯仿,不溶于丙酮、乙酸乙脂的原理,用有机溶剂提取革胡子鲶下脚料中的磷脂酰胆碱。通过单因素实验得到:甲醇-氯仿为提取的最佳溶剂。通过正交实验,研究了提取温度、提取时间、液料比、甲醇浓度等因素对磷脂酰胆碱提取率的影响,其影响因素主次顺序为:料液比>提取温度>甲醇的浓度>提取时间,最佳工艺为:提取温度40℃,提取时间30 min,料液比1∶3,甲醇浓度为95%。

氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性及免疫保护性研究

目的实验评价氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分(CMR)疫苗的免疫特性及免疫保护性。方法采用国内分离贝氏柯克斯体新桥株制备CMR疫苗,用CMR免疫Balb/c小鼠;采用间接免疫荧光法检测CMR免疫小鼠血清特异性抗体水平和用淋巴细胞增殖试验评价CMR疫苗体外刺激小鼠脾细胞增殖的能力;以贝氏柯克斯体攻击免疫小鼠和用贝氏柯克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠血和脾脏样本。结果CMR免疫第4周起,小鼠血清中检出高水平的特异性抗体,CMR加氢氧化铝佐剂免疫小鼠的血清特异性抗体显著高于未加佐剂组。CMR在体外刺激正常小鼠和免疫小鼠脾淋巴细胞增殖水平显著高于对照组,WCV则抑制正常脾淋巴细胞增殖。三种剂量(30μg、10μg、1μg/只)CMR免疫小鼠血和脾脏样本贝氏柯克斯体含量显著低于未免疫组,以30μg组及加佐剂免疫小鼠的样本含菌量更显著低于对照组。结论采用我国分离株制备的CMR疫苗能诱导机体产生高效特异性体液免疫和细胞免疫应答,使机体抵抗大剂量的贝氏柯克斯体感染,具有良好的免疫原性和免疫保护性;氢氧化铝佐剂能显著增强CMR疫苗的免疫保护效能。

紫金龙氯仿-甲醇组分对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用

目的探讨紫金龙氯仿-甲醇组分对脂多糖诱导RAW264. 7细胞炎症的抑制作用。方法脂多糖刺激RAW264. 7细胞建立体外炎症模型后,加入不同质量浓度(50、100、200、400 mg/L)紫金龙氯仿-甲醇组分,ELISA法或比色法检测白介素-6 (IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)含有量,Western blot法测定诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2 (COX-2)蛋白表达,以及核转录因子κ转抑制蛋白α(IκBα)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)磷酸化水平。结果紫金龙氯仿-甲醇组分可显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β、NO、PGE2释放(P <0. 05,P <0. 01),下调i NOS、COX-2蛋白水平(P <0. 01),降低p38、JNK、Erk1/2、IκBα磷酸化水平(P <0. 05,P <0. 01)。结论紫金龙氯仿-甲醇组分可有效抑制脂多糖诱导RAW264. 7细胞炎症,其机制可能与抑制NF-κB、MAPKs信号通路激活、减少炎症因子释放有关。

紫金龙氯仿-甲醇组分对急性实验性炎症的作用及机制研究

目的观察紫金龙氯仿-甲醇组分对体内急性实验性炎症的作用,探讨其抗炎作用的机制。方法于2015年4-7月,选择健康昆明小鼠60只和Wistar大鼠50只,采用醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀模型,观察紫金龙氯仿-甲醇组分的抗炎作用,并检测大鼠炎性组织中TNF-α、NO和PGE2的含量。结果与模型组相比,氯仿-甲醇组分能剂量依赖性降低小鼠腹腔渗出液的吸光度(P<0.05,P<0.01),中、高剂量于角叉菜胶致炎后4h分别显著降低大鼠的足趾肿胀率至31.54%和26.78%(P<0.01),且高剂量组可显著降低大鼠炎性组织中TNF-α、NO和PGE2的含量(P<0.05,P<0.01)。结论紫金龙氯仿-甲醇组分具有明显的抗炎作用,其可能通过调节TNF-α、NO和PGE2炎症因子的水平,从而抑制机体的炎症反应。

氯仿-甲醇法和酸水解法测定禽蛋中脂肪的方法比较

目的对比氯仿-甲醇法和酸水解法测定富含磷脂等结合态脂肪的禽蛋制品中脂肪含量的方法。方法采用氯仿-甲醇提取法对比GB5009.6-2016《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》中规定的禽蛋制品脂肪测定方法-酸水解法,测定禽蛋制品中的脂肪含量,考察了2种方法测定不同蛋制品的提取结果、提取时间、精密度和重复性。结果氯仿-甲醇提取法可以有效地提取蛋制品的磷脂等结合态脂肪,测定结果更接近于理论值,而酸水解法测定结果普遍偏低。氯仿-甲醇提取法提取需要至少1.8h,酸水解实验提取过程需要至少2.5 h,氯仿-甲醇提取法能缩短实验周期。氯仿-甲醇提取法对禽蛋制品脂肪的测定具有较高的精密度和较好的重复性,相对标准偏差在0.91%~1.62%之间,而酸水解的相对标准偏差在6.41%~9.13%之间。结论氯仿-甲醇法弥补了酸水解法水解磷脂的不足且测定快速、准确,适合测定禽蛋制品中的脂肪含量。

产油微生物的筛选及其产油率测定

为寻求可再生、环境友好且经济可行的化石能源替代燃料,采用苏丹黑B和尼罗红染色法及甲醇-氯仿提取法对平顶山各地不同生境富含油脂土壤中的高产油脂微生物进行分离筛选。结果表明:试验分离到2株产油菌株PDS1和PDS2。其中,产油细菌PDS1为革兰氏阴性菌,产油率为29.47%;产油细菌PDS2为革兰氏阳性菌,产油率为23.57%。

两种猪肌内脂肪含量测定方法的比较及其与胴体和肉质性状的相关性分析

[目的]比较分析甲醇-氯仿法(JL法)和索氏抽提法(SS法)提取肌内脂肪的效果,研究猪肌内脂肪含量与胴体质量、背膘厚、嫩度的相关与回归关系。[方法]屠宰测定了279头四元(皮杜长大)商品猪的胴体质量、背膘厚和肉嫩度,并利用索氏抽提法测定肌内脂肪含量,对肌内脂肪含量与其他性状指标进行相关性、回归及通径分析。随机挑选92份肉样,采用甲醇-氯仿法重新测定肌内脂肪含量,并与相应样本的索氏抽提法所得数据进行相关性与差异显著性分析。[结果]索氏抽提法测得的肌内脂肪湿含量和干含量之间极显著相关(r=0.996,P<0.01);甲醇-氯仿法和索氏抽提法测得的肌内脂肪湿含量之间也极显著相关(r=0.909,P<0.01),但索氏抽提法测得的肌内脂肪含量极显著高于甲醇-氯仿法(P<0.01)。相关性分析结果显示,肌内脂肪含量与胴体质量、背膘厚及嫩度均存在极显著相关性(P<0.01),背膘厚与胴体质量也存在极显著相关性(r=0.629,P<0.01),但肌肉嫩度与胴体质量、背膘厚无显著相关性(P>0.05)。回归分析结果表明:背膘厚和肉嫩度与肌内脂肪含量存在极显著的回归关系(P<0.01),而胴体质量与肌内脂肪含量不存在显著的回归关系(P>0.05)。[结论]索氏抽提法和甲醇-氯仿法均可作为有效测定肌内脂肪含量的方法,但在比较品种或个体间肌内脂肪含量差异时,需要使用同一种测定方法获得的数据;肌内脂肪含量与背膘厚、嫩度均存在显著相关和回归关系。

半连续精馏操作的研究

以甲醇-水、氯仿-甲醇-水为物系,采用半连续操与连续、间歇操作方式进行二元、三元组分的分离纯化的对比。实验结果表明,半连续操作甲醇分离的质量分数要高于连续操作的甲醇分离的质量分数;半连续操作塔顶甲醇质量分数的最大值小于间歇操作,但其平均值高于间歇操作;在回流比为4,加料温度为74.6℃,处理量为6 kg,操作时间为60 min的条件下,半连、连续、间歇方式操作,分离后甲醇的质量分数分别为99.92%、98.68%、99.93%,甲醇的回收率分别为97.55%、96.21%、94.93%,半连续相对于连续、间歇分别节能25%、36%;回流比为4,进料温度为25℃,加热功率为3 600 W,处理量为6 kg的条件下,当采出温度≤56.5℃时,在该三元体系中,氯仿的产量为4.82 kg/h,回收率为100%;当采出温度≤65℃时,甲醇的产量为0.59 kg/h,回收率为49.20%。

豆粕中残余脂质的提取与分析

豆粕中含有部分正己烷未能去除的残余脂质,采用体积比为2∶1的氯仿-甲醇溶液及水饱和正丁醇从豆粕中提取残余脂质,并对残余脂质成分进行了分析。传统的氯仿-甲醇溶液法可以将豆粕中大部分脂质提取出来,而与蛋白结合能力较强的极性脂需要进一步通过强极性的水饱和正丁醇提取。研究结果显示,豆粕中总脂质含量为2.10%,其中中性脂占25.24%,极性脂占74.76%,中性脂主要包括甘油三酯、FFA、甘油二酯;极性脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)。

金鲳鱼不同组织脂肪酸组成比较

为提高金鲳鱼加工中副产物的利用率,本实验采用氯仿-甲醇法提取金鲳鱼5个组织部位中的脂质,采用GC-FID法测定各组织脂肪酸组成。脂质含量由高到低依次为:内脏(27.12±7.96)g/100 g>鱼身骨(16.04±3.35)g/100 g≈鱼头(15.88±3.09)g/100 g>鱼皮(11.93±5.72)g/100 g>鱼身肉(5.09±2.13)g/100 g。5个组织脂肪酸组成基本相同,富含油酸(24.31%~25.84%)、棕榈酸(23.16%~25.00%)和亚油酸(19.04%~19.76%)。饱和脂肪酸(SFA)在内脏(35.32%±2.17%)中含量最高,显著高于其它组织(p<0.05);单不饱和脂肪酸(MUFA)在鱼身骨(34.27%±1.28%)、鱼头(34.56%±1.32%)及鱼身肉(34.34%±1.57%)中含量显著高于内脏(32.68%±1.64%)和鱼皮(33.22%±1.23%)(p<0.05);多不饱和脂肪酸(PUFA)在5个组织间含量无显著差异;n-3PUFA和EPA+DHA在鱼皮(10.34%±1.76%和6.04%±1.53%)中含量最高,显著高于其它组织(p<0.05)。内脏中SFA(35.32%±2.17%)>MUFA(32.68%±1.64%)>PUFA(31.09%±3.18%);鱼身骨、鱼头及鱼身肉中MUFA>SFA≈PUFA;鱼皮中SFA(33.70%±2.22%)≥MUFA(33.22%±1.23%)≥PUFA(32.07%±3.23%)。因此,金鲳鱼组织脂质营养丰富,颇具开发利用价值。

烹饪时间对鱼肉中脂肪酸的影响

目的考察不同烹饪时间对鱼肉中脂肪酸营养价值的影响,并对不同鱼类的适宜烹调时间进行评价。方法采用清蒸的方式对秋刀鱼、石斑鱼、鲫鱼和罗非鱼进行烹调,利用氯仿-甲醇提取法提取鱼肉脂肪酸,通过气相色谱技术(gas chromatography,GC)对鱼肉中脂肪酸进行定性定量,讨论烹饪时间对不同鱼肉中脂肪酸含量变化的影响。结果随着烹饪时间的增加,4种不同种类的鱼肉中不饱和脂肪酸的含量都呈现下降趋势,当烹饪时间为0.5~1.0 h时,不饱和脂肪酸二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)、油酸、亚油酸、亚麻酸含量下降速率最快并且产生有害脂肪酸(反式脂肪酸),ω-6/ω-3脂肪酸比值也呈现出上升趋势,鱼肉脂肪酸营养价值降低。结论在对鱼肉进行烹饪时,应严格控制鱼肉烹饪时间在0.5 h左右,才能有效的保证鱼肉中脂肪酸的营养价值。

鱼肉制品中脂肪的测定

鱼肉制品的脂肪含量较低且富含磷脂等结合态脂肪,鱼肉制品中的脂肪检测尚无国家标准。传统的脂肪检测方法无法准确地测定鱼肉制品中的脂肪含量。脂肪检测方法有很多种,每种方法都有其适用范围和优缺点。采用氯仿-甲醇法对比传统的酸水解法测定鱼肉制品中的脂肪含量。结果表明,氯仿-甲醇法弥补了酸水解法水解磷脂的不足,能够准确地测定鱼肉制品中的脂肪含量,在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的5%。