血清α-醋酸萘酯酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法及临床应用

为简化α－醋酸萘酯酶同工酶检查技术，建立琼脂糖凝胶电泳法。１０ｇ／Ｌ琼脂糖－ＰＶＰ和ｐＨ７．４０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液，泳池ｐＨ８．６，μ＝０．０６巴比妥缓冲液，滤纸刺槽加样，电压１５０Ｖ，电流２ｍＡ／ｃｍ电泳４０ｍｉｎ，搭桥填充染色。染色液由α－醋酸萘酯ｐＨ６．２０．１ｍｏｌ／ＬＰＢ液和固蓝Ｂ盐组成，３７℃染色２０ｍｉｎ，醋酸漂洗比色。结果对照组（ｎ＝３０）α－ＡＮＥ同工酶谱带３～４条（Ｅ１、Ｅ１ａ、Ｅ２、Ｅ３）着色强度Ｅ３＞Ｅ１＞Ｅ１ａ＞Ｅ２，ｘＥ３占８８％，Ｅ１～Ｅ２１２％左右，相对电泳位置Ｅ１：ｐｒｅＡｌ／Ａｌ，Ｅ１ａ：Ａｌ／α１，Ｅ２：ｐｒｅ－α２，Ｅ３：α２／β，Ｒｆ分别为０．５４５、０．５２７、０．４３６、０．３６４。Ｅ３区组成复杂，用ＮＡＮＡ酶水解和ＷＧＡ亲加试验证明它富含ＳＡ和ＧｌｃＮＡＣ的一组不均一的糖蛋白。谱形异常的典型病例有Ⅰ型在症糖尿病和部分肝癌患者，它除有正常谱带外，前者多Ｅ４和Ｅ５，其色度比（％）Ｅ４０．１１４，Ｅ５０．１９８，相对电泳位置在β和β与Ｐｒｅ－γ之间，Ｒｆ＝０．２５４，０．１８２。肝癌病人谱带也多１～２条（Ｅ５和Ｅ６）位于Ａ／ｐｒｅ－γ和ｐｒｅ－γ，?

琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳及高分辨熔解曲线技术在α-地中海贫血新生儿筛查中的应用

目的比较毛细管电泳与琼脂糖凝胶电泳2种方法在α-地中海贫血(α-地贫)新生儿筛查中的应用价值;探讨新生儿脐血HbBart′s水平与α-地贫基因型的关系;探讨高分辨熔解曲线(highresolu-tionmelting,HRM)技术用于筛查非缺失型α-地贫的可行性。方法对1442例新生儿脐血样本同时采用琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳技术进行血红蛋白定量分析,将其中任意一种方法检出HbBart′s区带(其中毛细管电泳技术HbBart′s定量最低为0.1%)的样本全部挑出进行Gap-PCR,若样本未检出异常则进一步行HRM分析,随后进行反向点杂交和基因测序。同时对2种电泳HbBart′s均为阴性的样本进行2种常见静止型α地贫基因(-α3.7、-α4.2)的分子筛查。结果 1442例样本中,2种电泳方法HbBart′s均为阳性的样本为151例,基因确诊150例。4例琼脂糖凝胶电泳检测HbBart′s阳性而毛细管电泳检测HbBart′s阴性的样本,基因检测未见异常。7例琼脂糖凝胶电泳检测HbBart′s阴性而毛细管电泳检测HbBart′s阳性的样本,基因检测均为静止型α-地贫。1280例两种电泳HbBart′s均为阴性的样本检出10例静止型α-地贫。HRM技术将3种常见非缺失型α-地贫全部检出。结论与琼脂糖凝胶电泳相比,毛细管电泳技术定量分析HbBart′s更为简便、准确。脐血HbBart′s的含量随着α-基因缺陷的个数的增加而升高,其中α+-地贫中不同基因型的HbBart′s水平亦存在差异。新生儿脐血毛细管电泳HbBart′s含量0.1%应作为区分正常人与α-地贫携带者的指标。HRM技术可作为非缺失型α-地贫(尤其是αCSα和αQSα)的一种筛查方法。

一种基于琼脂糖凝胶电泳法检测SARS-CoV-2的新方法

鉴于琼脂糖凝胶电泳分析方法的准确、快速、简便等特性,优化后可以做为检出COVID-19病原的新方法。在不影响结果判读的情况下,通过对扩增时间及检测样本浓度进行优化,以达到预期目的。结果表明,检测SARS-CoV-2的最优反应程序为94℃预变性3 min;94℃变性时间、56℃退火时间及72℃延伸时间均降至5 s,且进行35个循环;最后72℃孵育5 min,最优模板用量比例(初始值设为4 ng)下限调整在(1:1000)^(1:5000)范围内。阳性样本测试结果符合预期。建立了一种简便、省时,适用于检测低载量病毒样本的新方法,为临床提供诊断参考。

尿蛋白普通琼脂糖凝胶电泳与SDS-PAGE的比较

目的:评价尿蛋白普通琼脂糖凝胶电泳(AGE)的临床价值。方法:采用普通AGE检测305例患者尿蛋白,其中112例做十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),两者进行比较,并结合患者的临床和病理诊断分析。结果:普通AGE图谱可分为五种类型,对应于SDS-PAGE的四种蛋白尿类型,分别为肾小管性蛋白尿、肾小球性蛋白尿、混合性蛋白尿和溢出性蛋白尿。结论:普通AGE能很好地判断肾小管性蛋白尿,较好地判断大部分肾小球性蛋白尿和混合性蛋白尿,很好地判断溢出性蛋白尿。

NaCl对琼脂糖凝胶电泳法分离单壁碳纳米管的影响

如何获得单一导电属性的单壁碳纳米管(SWCNT),使其在各领域得到更广泛的应用,引起了科研人员越来越多的关注.琼脂糖凝胶电泳(AGE)法以其简便,低成本,可规模化等优点在分离金属型(m-)和半导体型(s-)单壁碳纳米管的诸多分离方法中体现出独特的优势.本文利用紫外-可见-近红外(UV-Vis-NIR)吸收光谱分析手段,系统研究了NaCl的添加对AGE法分离SWCNT的影响.研究发现NaCl的添加对SWCNT的分离有一定的影响:当NaCl添加量低于70 mmol.L-1时,可以提高分离后体系中s-SWCNT的相对含量;当NaCl添加量高于70mmol.L-1时,随着添加量的增加,NaCl的加入开始抑制m-SWCNT和s-SWCNT的有效分离;当NaCl添加量达到160 mmol.L-1时体系分离效率明显降低.我们推测这种影响主要是由盐的添加改变了分散剂在m-SWCNT和s-SWCNT表面的吸附结构引起的.

琼脂糖凝胶电泳法分离金属性和半导体性单壁碳纳米管

琼脂糖凝胶电泳(AGE)是实现金属性单壁碳纳米管(m-SWCNTs)和半导体性单壁碳纳米管(s-SWCNTs)低成本、规模化分离的有效技术之一。本研究利用琼脂糖凝胶电泳分离单壁碳纳米管。通过紫外-可见-近红外吸收光谱和拉曼光谱对色谱带进行分段表征,发现电泳中迁移的最快的部分m-SWCNTs含量最高。考察了琼脂糖的浓度对SWCNTs中m-SWCNTs分离的影响。结果表明:高的琼脂糖浓度有利于m-SWC-NTs的富集,可以通过扩大电荷密度带来的迁移速率的差异来使SWCNTs中的m-SWCNTs得到更有效的分离。

半抗原-载体蛋白偶联物的三种电泳鉴定方法

【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致。【结论】3种电泳方法各有优缺点,非变性凝胶电泳简便、廉价、有效,较适合普通实验室使用。

全自动琼脂糖凝胶电泳系统检测血红蛋白A_2诊断β-地中海贫血

目的:分析全自动琼脂糖凝胶电泳系统检测血红蛋白A2(HbA2)在β-地中海贫血(β-地贫)筛查和诊断中的应用价值。方法:使用SH-2020全自动琼脂糖电泳系统对5 208例标本进行Hb电泳分析,测定Hb A、Hb F、Hb A2和异常Hb含量,并对可疑病例进行基因检测。结果:5 208例中检出β-地贫177例,Hb H病12例,β-地贫合并Hb E病10例,Hb G 5例,Hb D 2例,Hb CS 1例。结论:全自动琼脂糖凝胶电泳分辨率较高,能准确分析出Hb A、Hb F、Hb A2、Hb E、HbG、Hb D、Hb H和Hb CS,能较好地诊断地中海贫血(地贫),特别是对β-地贫筛查有很好的诊断价值。

甲醛致核酸损伤作用的实验研究

应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和液相色谱-电化学检测法(HPLC-EC)研究了典型环境污染物甲醛对DNA分子的损伤效应.结果表明:甲醛不仅可诱导人外周血淋巴细胞DNA发生链断裂,还可引起DNA DNA,DNA 蛋白质交联;甲醛与小牛胸腺DNA的体外作用较弱,但在铁离子介导下对DNA的氧化能力增强,可产生一定量的8 羟基脱氧鸟苷(8 OHdG)加合物;动物实验表明甲醛诱导大鼠肺组织DNA氧化损伤生成8 OHdG,提示甲醛较强的遗传毒性.

非浓缩尿蛋白电泳与其他尿蛋白检测方法的比较研究

目的评价非浓缩尿蛋白电泳定量测定尿蛋白意义,并与免疫散射比浊法进行比较。方法留取干化学法蛋白阳性(+^++++)的41例住院患者尿液,分别用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶(SDS-AGE)非浓缩尿蛋白电泳、免疫散射比浊法测定尿蛋白,并按尿总蛋白定量及尿蛋白电泳百分比计算肾小球性蛋白、白蛋白、肾小管性蛋白量,与比浊法作相关分析。结果41例尿非浓缩尿蛋白电泳结果阳性率为80%、免疫散射比浊法阳性率为66%,电泳法与免疫散射比浊法检测尿蛋白阳性率差异无显著性(P>0.05),2种方法在判断尿蛋白类型上完全符合者为63%,2种方法检测肾小管性尿蛋白、尿白蛋白、肾小球性尿蛋白的相关系数(r)分别为0.61、0.91、0.76,呈显著正相关(P<0.001)。结论非浓缩尿蛋白电泳与免疫散射比浊法检测尿蛋白阳性率差异无显著性,与免疫散射比浊法有显著的相关性,非浓缩尿蛋白电泳是一种具有较高检测灵敏度、能区别尿蛋白类型、反映尿蛋白全貌的方法。

2-甲基-1,4-萘醌对DNA光敏损伤的诱导作用

选择波长 337nm的激光作为激励光源 ,借助凝胶电泳研究了 2 甲基 1,4 萘醌诱导的DNA光敏损伤 .结果表明 :在氧气饱和、脱氧条件下光敏损伤显著 ,DNA损伤主要与光子剂量、核酸与萘醌浓度比及DNA存在形式有关 .

乳酸脱氢酶-5在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的：探讨乳酸脱氢酶同工酶（1actatedehydrogenase，LDH）-5在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其If缶床意义。方法：利用琼脂糖凝胶电泳法及酶促法分别对63例非霍奇金淋巴瘤患者的LDH及LDH-5表达水平进行检测，对两组阳性例数进行比较。结果：63例患者的中位发病年龄为56（19～84）岁，男36例，女27例。初治组43例LDH及LDH．5总阳性例数比较差异有统计学意义（P〈0．05），其中22例弥漫大B细胞淋巴瘤及9例T细胞淋巴瘤LDH．5阳性例数明显多于LDH（P〈0．05），而12例／bB细胞淋巴瘤LDH及LDH．5阳性例数比较差异无统计学意义（P〉0．05）；疾病进展组29例LDH及LDH-5总阳性例数比较差异无统计学意义（P〉0．05）；疾病复发组15例LDH及LDH-5总阳性例数比较差异无统计学意义（P〉0．05），但11例小B细胞淋巴瘤LDH-5的阳性例数明显多于LDH（P〈0．05）。结论：LDH．5可作为非霍奇金淋巴瘤判断肿瘤侵袭性、预测复发的指标。

LDH-5在非霍奇金淋巴瘤诊断与疗效监测中的作用

背景与目的:乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)是糖酵解中主要的酶,能够催化乳酸变成丙酮酸。本实验主要探讨乳酸脱氢酶同工酶-5(lactate dehydrogenase-5,LDH-5)在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)患者血清中的表达量及在疗效监测中的作用。方法:利用琼脂糖凝胶电泳法,测定了105例NHL患者与185例健康对照者的血清LDH-5水平,对其中28例化疗患者进行血清LDH-5随访,并对数据进行统计学处理。结果:NHL患者血清LDH-5水平为(10.38±3.52)%,明显高于健康对照者的(7.89±2.67)%,差异有统计学意义(P<0.01)。化疗有效的NHL患者,化疗前后测定结果显示,血清LDH-5水平呈递减趋势,不同疗效组间的结果差异有统计学意义(P<0.05)。LDH-5含量与NHL预后指标具有相关性。结论:LDH-5在NHL诊断与疗效监测中有较好的临床应用价值。

α-内收蛋白、ACE基因多态性及环境因素与高血压病的关系

目的 研究α -内收蛋白基因、血管紧张素转换酶 (ACE)基因多态性及环境因素与原发性高血压病 (EH)的关系。方法 聚合酶链反应 (PCR) -琼脂糖凝胶电泳检测基因型。结果 (1)α -内收蛋白基因、ACE基因各基因型及TrpTrp +DD联合基因型在正常血压组和EH组的分布差异无显著性。 (2 )在与EH有关的危险因素存在的条件下 ,肥胖组、高甘油三酯血症组、吸烟组α -内收蛋白基因TrpTrp型EH患者患病率高于其他基因型 ,有统计学差异 (P <0 0 5)。结论 EH是环境与遗传因素共同作用的结果 。

对氧磷酶基因(PON1)启动子区T(-107)C多态性与脑梗死的相关性研究

目的 探索对氧磷酶基因 (PON1 )启动子区 T(- 1 0 7) C多态性与脑梗死的关系。方法 选取病例组 1 55例 ,对照组 1 2 9例 ,提取空腹肘静脉血白细胞中 DNA,聚合酶链反应 (PCR)后限制性内切酶 Bst UI (Bsh1 2 36I)酶切、3%的琼脂糖凝胶电泳 ,紫外分析仪下观察结果 ,当 - 1 0 7位碱基为 C时 ,酶切为 52 bp和 67bp的两个片断 ,未切开的片断为 1 1 9bp。结果 低表达基因型 TT发生脑梗死的危险度显著升高 ,P=0 .0 0 5,OR= 2 .1 37(TT vs CC+CT) ,95%CI 1 .2 50～ 3.652 ,排除冠心病和糖尿病等干扰因素后也得到与前者一致的结果 ,P=0 .0 4 2 ,OR=1 .987(TT vs CC+CT) ,95%CI1 .0 1 8～ 3.880。结论 T(- 1 0 7) C多态性与脑梗死的发生相关。

三核铜配合物[Cu_3L_2](ClO_4)_2(H_2L=1,3-双(2-羟基-1-苯基-亚甲基)-丙烷)的合成与对pBR322 DNA的切断作用

利用席夫碱配体 [H2 L =1,3 双 (2 羟基 1 苯基 -亚甲基 ) -丙烷 ]与铜盐作用 ,得到了配合物 [Cu3 L2 ] (ClO4) 2 ,并用X射线单晶衍射测定了其晶体结构 .研究了该三核铜配合物与质粒pBR3 2 2DNA之间的相互作用 ,琼脂糖凝胶电泳实验结果表明该配合物能够将pBR3 2 2DNA从超螺旋构型切割成开环型和线型 .同时 ,紫外光谱实验可以推测 ,配合物在对pBR3 2 2DNA进行切断时 。

非浓缩尿蛋白电泳在高血压早期肾损伤诊断中的应用

目的探讨非浓缩尿蛋白电泳在高血压早期肾损伤诊断中的临床应用。方法采用十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳（SDS-AGE）对33例高血压患者进行尿蛋白分析。结果尿蛋白经SDS-AGE电泳后，根据尿蛋白电泳图谱，可区分为生理性、肾小管性、肾小球性、混合性蛋白尿。对照组电泳后有3例出现单纯淡染的清蛋白条带。患者组中2例未检出，生理性蛋白尿2例，肾小管性蛋白尿20例，肾小球性蛋白尿5例，混合性蛋白尿4例。结论SDS-AGE非浓缩尿蛋白电泳操作简便，无须浓缩尿液，省时，尿蛋白按分子量大小予以分离，结果清晰，便于保存，能正确的反映尿液内各蛋白组分的含量及变化，对高血压早期肾损伤诊断有较高的临床应用价值。

人胃癌组织中环氧化酶-2 mRNA的表达

目的 :检测环氧化酶 2 (COX 2 )mRNA在人胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中的表达情况 ,探讨其表达与胃癌临床病理特征的关系。方法 :应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 2 4例胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中COX 2mRNA表达水平。结果 :COX 2mRNA在胃癌组织中的表达水平为 1.2 0 8± 0 .412 ,高于其在癌旁组织中的 0 .5 0 4± 0 .10 7和正常胃黏膜组织中的 0 .473± 0 .0 98,差异具有显著性 (P <0 .0 1) ;COX 2mRNA表达与患者性别、年龄及肿瘤大小、Lauren分型、分化程度均无显著性相关 (P >0 .0 5 ) ,而与肿瘤淋巴结转移、远处转移、临床分期和部位密切相关 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论 :COX 2mRNA表达水平在人胃癌组织中增高 ,并与胃癌淋巴结转移、远处转移、分期、部位等临床病理特征密切相关 ,COX 2mRNA表达在人胃癌发生、发展。