甲型流感病毒A/WSN/1933(H1N1)感染A549细胞的circRNA表达谱分析与鉴定

环状RNA(circRNA)已被证明在众多生物过程中起着重要的调控作用,而circRNA在甲型流感病毒(IAV)复制过程中的功能尚不清楚。本研究旨在利用高通量测序分析IAV感染A549细胞后的circRNA表达谱变化来挖掘能够影响病毒复制的circRNAs并对其进行初步功能鉴定。利用测序结果,对全部circRNAs进行特征分析、差异表达筛选;对差异circRNAs进行GO分析、KEGG分析;对候选circRNAs进行qPCR、RT-PCR验证及Sanger测序鉴定,并通过空斑试验确定影响病毒复制的circRNAs。结果:本试验共筛选到11 630条差异表达circRNAs,对其中6条circRNA进行了鉴定,最终确定novel_circ_007428具有抗病毒作用。本研究对甲型流感病毒感染A549细胞后的circRNA表达谱进行了分析与鉴定,为进一步研究circRNA在流感病毒感染中发挥的调控作用奠定了基础。

射干止咳胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒作用初探

目的初步探讨射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内外抗病毒作用。方法通过细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)结合MTT法考察射干止咳胶囊体外抑制甲型H1N1流感病毒活性的作用;采用小鼠滴鼻法感染甲型H1N1流感病毒为模型,观察射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内抗病毒作用。结果体外抗病毒试验结果显示,射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的最高抑制率为11.86%,提示在攻毒剂量为100TCID_(50)的条件下,射干止咳胶囊在体外对甲型H1N1流感病毒的抑制作用不明显。小鼠滴鼻感染5LD_(50)的甲型H1N1流感病毒,射干止咳胶囊低、中、高剂量组小鼠的死亡率分别为30%、10%、30%,死亡保护率达50%、70%、50%,平均生存天数分别为13 d、14 d、13 d,说明各给药组对攻毒小鼠具有较好的死亡保护作用。结论射干止咳胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒的作用不显著,但射干止咳胶囊各剂量组对甲型H1N1流感病毒攻毒致小鼠死亡却具有明显的保护作用。

甲型流感病毒H1N1型灭活病毒标准物质研究

以人工培养真实病毒为原料,研制了一种甲型流感病毒H1N1型灭活病毒标准物质。该标准物质经化学灭活及灭活效果验证后,联合多家实验室采用数字PCR定量检测方法对拷贝数浓度进行定值,对标准物质的均匀性、稳定性及不确定度进行了评估。结果显示该标准物质均匀性良好,在-80~-70℃保存条件下稳定保存5个月,标准物质最终定值结果为(1384.5±249.3)copies/μL(k=2)。该标准物质可为H1N1型甲型流感病毒检测的全过程提供计量溯源和质量控制支撑,有助于提升相关核酸检测结果的准确性和可靠性。

感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的药效学研究

目的探讨感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的药效学情况。方法108例甲型H1N1流感病毒感染患者,随机分为观察组和对照组,每组54例。对照组使用磷酸奥司他韦治疗,观察组在对照组治疗基础上使用感冒清热片治疗。比较两组患者临床疗效、症状改善指标(起效时间、退热时间、止咳时间、痊愈时间)、以及治疗前后的中医证候(发热、咽痛、头痛、鼻塞流涕、咳嗽、乏力)积分、血清炎性因子[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]。结果观察组治疗总有效率96.30%高于对照组的77.78%(P<0.05)。治疗后,观察组患者发热、咽痛、头痛、鼻塞流涕、咳嗽、乏力评分分别为(0.83±0.24)、(1.12±0.30)、(1.07±0.29)、(1.03±0.32)、(1.05±0.33)、(1.09±0.28)分,均低于对照组的(1.46±0.37)、(2.31±0.58)、(2.14±0.52)、(2.25±0.63)、(2.36±0.61)、(2.42±0.65)分(P<0.05)。观察组起效时间(1.03±0.34)d、退热时间(1.56±0.40)d、止咳时间(4.35±0.68)d、痊愈时间(6.63±1.26)d均短于对照组的(2.32±0.57)、(2.63±0.74)、(7.24±1.16)、(9.38±1.72)d(P<0.05)。治疗后,观察组CRP(2.11±0.56)mg/L、TNF-α(19.34±2.20)μg/L、IL-6(4.02±0.54)ng/L均低于对照组的(4.83±0.69)mg/L、(25.89±2.73)μg/L、(6.13±0.62)ng/L(P<0.05)。结论感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的疗效显著,能有效缓解证候,加快症状缓解速度,提高抗炎作用。

基于蛋白质芯片技术筛选与甲型流感病毒NS1蛋白互作的宿主因子及通路分析

目的筛选出与流感病毒Non-structural protein 1(NS1)蛋白结合的人类宿主蛋白并加以分析,确定这些结合蛋白富集的方向及关键蛋白,为抗流感病毒的新药研发提供思路。方法将NS1样本、Biotin样本分别与HuProt^(TM)人类蛋白质组芯片进行杂交孵育,以两重复均满足Z-Score≥3为筛选条件对与NS1蛋白有结合的宿主蛋白进行筛选得到特异性检出蛋白,实验组(NS1蛋白)与对照组(Biotin)比值I Mean_Ratio≥1.4为条件筛选出显著特异性检出蛋白。用检出的195个蛋白进行GO(Biological Process,Molecular Function,Cellular Component)和KEGG_PATHWAY分析,通过蛋白-蛋白相互作用(PPI)及MCODE分析得到关键蛋白。结果获得显著特异性检出蛋白195个,GO分析结果显示这些蛋白主要参与了mRNA加工、RNA结合、蛋白结合,KEGG分析主要富集到RNA降解、氨基酸的生物合成等通路。得到的4个关键蛋白DDX6、HSPD1、PKLR、MTHFD1中DDX6与RNA的合成、翻译等过程相关,而NS1蛋白可以通过调控流感病毒RNA和宿主RNA促进病毒的感染,推测DDX6可能在该过程发挥作用;其他3个蛋白目前虽然没有明确的研究指明其与流感病毒有关系,但是能在其他RNA病毒的感染过程中发挥作用。结论与NS1结合的人类蛋白主要富集到RNA合成、加工、转录等过程中,MCODE分析得到的关键蛋白有潜力成为抗流感病毒新的靶点,但作用机制需要后续实验进行进一步验证。

2022—2023年北京市通州区甲型H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的分析2022—2023年北京市通州区流感病原学监测中甲型H3N2亚型流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因特性,为流感防控提供科学依据。方法对通州区2022—2023年流感病原学监测结果进行统计分析,选取不同时间分离到的34株甲型H3N2亚型流感毒株,进行HA基因扩增和测序,应用MEGA11进行HA基因的核苷酸和氨基酸变异分析,采用邻接法构建HA基因遗传进化树,在线预测N-糖基化位点,分析其基因变异和进化特征。结果2022—2023年共检测流感病原学监测样本3660件,流感病毒核酸阳性率为21.50%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为57.81%。发热疫情样本共计4855件,流感病毒核酸阳性率为54.25%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为61.50%。34株甲型H3N2亚型流感病毒的HA基因序列与疫苗株A/Darwin/9/2021相比,核苷酸相似度为97.00%~98.50%,氨基酸相似度为97.40%~98.10%。基因进化分析显示,2022—2023均分布在3c.2a1b.2a分支,2022年8—11月分离的14株毒株分布在1a.1亚分支,2023年2—3月分离的20株毒株则分布在2a.3a.1亚分支。与疫苗株相比,2022—2023年的34株毒株在4个抗原决定簇上(B、C、D和E)发生了多位点氨基酸变异,且在186和225位点上均发生了替换。2022年的14株毒株,增加了158NYTY位点,存在13个潜在糖基化位点,2023年的20株分离株122NESF糖基化位点丢失,共有12个潜在糖基化位点存在。结论2022—2023年,北京市通州区人群中流行的甲型H3N2亚型流感病毒分布在2个进化分支上,2023年3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支取代了2022年3C.2a1b.2a.1a.1分支,成为流行株。及时分析流感病毒基因特性和进化趋势,对流感的防控有重要意义。

甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺共信号分子变化研究

背景甲型流感病毒传染性强,重症感染病死率高。共信号分子是参与免疫应答的重要分子。探究甲型流感病毒感染后肺病毒载量与共信号分子的变化特点及相关性可为病毒感染后的治疗提供参考依据。目的探究甲型流感病毒A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8株)感染小鼠肺病毒载量和共信号分子的变化特点及相关性。方法72只7周龄BALB/c小鼠随机分为高剂量病毒组(108 TCID50/mL,50μL/只,32只)、低剂量病毒组(104 TCID50/mL,50μL/只,32只)和对照组(PBS,50μL/只,8只),三组分别于感染后24 h、48 h、72 h和96 h每个时间点每组各处死8只、8只、2只小鼠;解剖取左肺行HE染色,实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测肺病毒载量以及共信号分子CD28、CD226、ICOS、CTLA-4、TIGIT、PD-1 mRNA相对表达量。将高、低剂量病毒组所有病毒感染小鼠(n=64)肺病毒载量与共信号分子mRNA相对表达量行相关性分析。结果感染后96 h内,高剂量病毒组相比低剂量病毒组小鼠肺损伤较重,且共刺激分子CD28、CD226、ICOS mRNA相对表达量均减少(P均<0.05)。高剂量病毒组小鼠感染后24 h PD-1 mRNA相对表达量增加(P<0.01),感染后48 h CTLA-4 mRNA相对表达量增加(P<0.01)且病毒复制达到峰值。低剂量病毒组小鼠感染后72 h PD-1 mRNA相对表达量增加(P<0.05)且病毒复制达到峰值,感染后96 h CTLA-4 mRNA相对表达量增加(P<0.01)。病毒感染小鼠(n=64)肺病毒载量与PD-1 mRNA相对表达量存在正相关关系(r=0.540,P<0.001),与CD226 mRNA相对表达量存在负相关关系(r=-0.340,P=0.006)。结论甲型流感病毒感染小鼠肺组织中CTLA-4、PD-1 mRNA相对表达量增加等现象的早期出现可能提示小鼠感染的重症化。肺组织中的PD-1和CD226可能是与肺病毒载量相关的共信号分子靶点。

153例住院儿童甲型流感病毒肺炎及混合感染的临床特征

目的探讨住院儿童甲型流感病毒肺炎合并其他病原菌感染的临床特征。方法通过回顾性研究方法,分析2021年6月—2023年6月广州市妇女儿童医疗中心住院治疗的153例甲型流感病毒肺炎患儿的临床资料,针对有无合并其他病原菌感染,分为混合感染组及非混合感染组两组,分别为98例及55例,分析并对比两组的临床特征。结果甲型流感病毒肺炎患儿以发热、咳嗽、呕吐/腹泻等症状为主,其中混合感染组患儿呕吐/腹泻症状占比高于非混合感染组(P<0.05);两组患儿其他症状及并发症对比差异无统计学意义(P>0.05);儿童甲型流感病毒肺炎患儿检出合并细菌感染的患儿65例(29.41%),合并肺炎支原体感染的患儿33例(21.57%);合并病毒感染的患儿20例(13.07%)。与非混合感染组比较,混合感染组患儿乳酸脱氢酶水平更高,白细胞计数<4×10^(9)/L的人数占比更少(P<0.05);其他实验室指标对比差异无统计学意义(P>0.05);经过抗病毒及对症治疗后,150例(98.04%)患儿痊愈出院,3例出现严重并发症,其均伴有其他病原菌感染。与非混合感染组比较,混合感染组患儿住院天数更长、住院费用更高(P<0.05);其他预后指标对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论甲型流感病毒肺炎患儿易感染其他的病原菌,导致疾病治疗难度加大,因此临床要提高警惕,以防混合感染情况发生,尽早采取有效的诊治措施,提高疾病早期治愈率。

葛根汤颗粒对甲型流感病毒感染小鼠TNFR1/NF-κB/JNK等炎症和免疫指标的影响

目的基于PR8感染所致病毒性肺炎小鼠模型,探寻葛根汤颗粒抗流感病毒性肺炎损伤的作用机制。方法32只雌性SPF级ICR小鼠随机分为空白组、模型组、奥司他韦组、葛根汤颗粒组,每组8只。滴鼻法建立PR8毒株感染所致病毒性肺炎小鼠模型,计算肺指数和肺指数抑制率,应用光镜观察各组肺组织病理变化,运用ELISA和Western blotting法检测各组肺组织炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM1)和炎性免疫蛋白人肿瘤坏死因子受体-1(TNFR1)、核转录因子-κB(NF-κB)、Jun氨基末端激酶(JNK1)表达情况。结果与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可降低小鼠肺指数(P<0.001),葛根汤颗粒组对肺指数抑制效果优于奥司他韦组。病理提示,与模型组比较,葛根汤颗粒组可显著减轻支气管炎症反应渗出,减轻肺泡、肺间质和红细胞渗出。ELISA结果显示,与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可显著降低IL-6、ICAM1、VCAM1的表达(P<0.001);与奥司他韦组相比,葛根汤颗粒组IL-6含量降低(P<0.01)。Western blotting结果显示,与模型组比较,奥司他韦组和葛根汤颗粒组可降低TNFR1、JNK1蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),葛根汤颗粒可降低NF-κB蛋白的表达(P<0.05)。结论葛根汤颗粒可以降低甲型流感病毒感染小鼠肺组织中IL-6、ICAM1、VCAM1、TNFR1、NF-κB、JNK等炎性因子和炎性免疫蛋白的表达,调节炎症和免疫紊乱,为仲景经典处方临床应用提供基础理论依据。

基于生物信息学分析甲型H1N1流感病毒性肺炎的生物标志物

目的通过基于基因表达综合(GEO)数据集的生物信息学方法筛选和分析甲型H1N1流感病毒性肺炎的潜在生物标志物。方法从GEO数据库获取甲型H1N1流感病毒性肺炎的数据集,并筛选差异表达基因,使用STRING 12.0数据库和Cytoscape 3.9.1软件对这些差异表达基因进行分析并筛选出Hub基因,使用DAVID数据库对这些差异表达基因进行功能富集分析。结果筛选出1019个差异表达基因,其中上调基因522个,下调基因497个。富集结果显示,这些差异表达基因的功能主要富集于细胞质、蛋白质磷酸化、免疫应答、补体成分、激酶活性、T细胞受体信号通路及FoxO信号通路等。最终确定了CDK1、CCNA2、CCNB2、CDC20、TOP2A、KIF20A、DLGAP5、BUB1、KIF11和TPX2为Hub基因。结论本研究阐明了10个Hub基因(CDK1、CCNA2、CCNB2、CDC20、TOP2A、KIF20A、DLGAP5、BUB1、KIF11和TPX2)有可能作为甲型H1N1流感病毒性肺炎诊断和治疗的潜在生物标志物,但仍需更多的实验来进一步探索这些Hub基因在甲型H1N1流感病毒性肺炎中的具体机制。

7例儿童甲型H3N2流感病毒相关的致命性急性坏死性脑病

目的探讨H3N2流感病毒相关急性坏死性脑病的疾病特点,总结诊治经验。方法整理江西省儿童医院2022年6月1日至2022年6月30日收治的7例儿童急性坏死性脑病患儿的病例资料,分析此次流行季节甲型H3N2流感病毒相关急性坏死性脑病的临床表现、辅助检查、治疗方案及预后。结果7例患儿均有高热乃至超高热,其中4例患儿发热48 h内出现抽搐、意识障碍,随后迅速恶化出现脑干反射消失;3例患儿入院时即有DIC、休克、出血表现;其中5例患儿入院时流感快速抗原检测均阴性,行核酸检测甲型流感病毒呈阳性,7例患儿省疾控预防中心(CDC)病原学分型为H3N2,2例发病早期头颅CT检查为正常;7例患儿1例抢救无效死亡,4例因脑死亡放弃治疗后死亡,2例痊愈出院,死亡率71.4%。结论本文夏季流行的流感病毒为H3N2,快速抗原检测可为阴性,接种流感疫苗不能完全避免感染;甲流H3N2流感病毒致坏死性脑病病情进展迅速,易出现中枢性循环衰竭、出血、休克、DIC,救治困难,死亡率高。

疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的疗效观察

目的观察疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的临床效果及对患儿IL-1β、IL-6、IFN-γ的影响。方法106例甲型H1N1流感病毒肺炎患儿随机分为对照组与观察组各53例。对照组给予奥司他韦治疗,观察组给予奥司他韦联合疏风解毒胶囊治疗。比较两组临床疗效、预后相关指标、血气指标[动脉血氧分压(PaO_(2))、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))]、炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(iIFN-γ)]以及不良反应发生率。结果观察组治疗总有效率为96.23%,高于对照组的81.13%(P<0.05)。观察组患儿体温恢复正常时间、咳嗽缓解时间、肺啰音消失时间、病毒转阴时间均显著短于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组患儿PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)高于对照组,PaCO_(2)低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组患儿血清IL-1β、IL-6、IFN-γ均低于对照组(P<0.05)。两组患儿治疗期间不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的效果确切,有助于促进患儿病情快速康复,改善血气指标,降低炎性反应,且安全性良好。

甘露消毒丹调控PI3K/Akt信号通路干预甲型流感病毒感染的作用机制

目的 基于网络药理学探讨甘露消毒丹治疗甲型流感病毒感染的活性成分及作用机制,并用动物实验加以验证。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取和筛选药物有效成分,利用TCMSP及Swiss Target Prediction数据库预测潜在作用靶点。利用比较毒物基因组学数据库(CTD)、疾病相关基因与突变位点数据库(DisGeNET)、GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获得甲型流感病毒感染的疾病靶点,将药物预测潜在作用靶点与疾病靶点取交集获得交集靶点。利用Cytoscape3.9. 1构建药物-成分-靶点网络并进行拓扑属性分析,预测中药主要活性成分。利用蛋白互作数据库(STRING)及Cytoscape3.9. 1绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图,获取关键作用靶点。利用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。将C57BL/6J小鼠分为空白组、模型组、中药组及对照组,每组5只,甲型流感病毒PR8滴鼻感染小鼠构建感染模型,中药组予以甘露消毒丹灌胃,对照组予磷酸奥司他韦灌胃。观察肺指数、肺组织病理变化,实时荧光定量逆转录PCR (RTqPCR)法检测肺组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (AKT)基因表达,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α。结果 共筛选出甘露消毒丹125个化合物作为候选有效成分,获得286个潜在作用靶点,2 223个甲型流感病毒相关疾病靶点,61个交集靶点。药物-成分-靶点网络得到槲皮素、山奈酚、汉黄芩素、木犀草素、黄芩素、葛花苷元、金合欢素、异鼠李素、去氢二异丁香酚、柚皮素等10个关键成分。PPI网络得到TNF、IL-6、IL-1β、AKT1、TP53、JUN、HIF1A、PTGS2、MMP9、ESR1等10个关键靶点。GO功能富集分析共获得条目54条,其中生物过程20条,细胞组分14条,分子功能20条;KEGG通路富集分析共获得条目共20条,其中包括AGE-RAGE信号通路、癌症通路、松弛素信号通路、PI3K-Akt信号通路等。与空白组比较,模型组肺指数高(P<0.05);与模型组比较,中药组、对照组肺指数低(P<0.05)。模型组小鼠肺组织间质水肿,大量淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡壁明显增宽,肺泡融合。中药组及对照组小鼠肺组织间质水肿减轻,淋巴细胞、单核细胞浸润减少,肺泡壁增宽减轻,部分肺泡融合。与空白组比较,模型组小鼠肺组织中PI3K、AKT mRNA表达高(P<0.05)。与模型组比较,中药组PI3K、AKT mRNA表达低(P<0.05),对照组PI3K mRNA表达低(P<0.05)。与空白组比较,模型组肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α水平高(P<0.05)。与模型组比较,中药组肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α水平低(P<0.05);对照组肺组织中IL-6、IL-1β水平低(P<0.05)。结论 甘露消毒丹可通过抑制甲型流感病毒感染小鼠炎症反应改善肺损伤,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的过度激活有关。

桑藿排毒茶体外抗甲型H1N1流感病毒机制分析

目的在细胞水平观察桑藿排毒茶对甲型H1N1流感病毒的抑制作用。方法利用CCK-8试剂检测桑藿排毒茶的细胞毒性,通过分析不同处理组中甲型流感病毒RNA与蛋白表达水平的变化,评价该组方抗甲型流感病毒活性的高低。结果桑藿排毒茶与磷酸奥司他韦对犬肾细胞(MDCK)的最大无毒浓度(TC 0)分别为4.32、1.02 mg·mL^(-1),半数有效浓度(EC 50)分别为0.38 mg·mL^(-1)、3.5μg·mL^(-1)。在Q-PCR与Western blotting试验中,相较于病毒组,经药物处理后的感染细胞中流感病毒RNA与蛋白的表达量均显著降低,说明其对病毒的抑制作用较强。结论桑藿排毒茶在细胞水平可以抵抗甲型流感病毒感染,具有进一步开发意义。

槲皮素对甲型H1N1流感病毒诱导的A549细胞凋亡效应酶Caspase-3的影响

目的观察银杏叶主要活性成分槲皮素对甲型H1N1流感病毒感染的人肺上皮瘤细胞A549凋亡效应酶Caspase-3的影响。方法采用MTT法测定H1N1毒力、槲皮素细胞毒性作用、槲皮素对H1N1致A549细胞病变的抑制作用。然后用100 TCID50甲型H1N1感染A549 2 h后换用含10 mg/L槲皮素维持液继续培养,于感染后4、12、24、48 h收集细胞,提取细胞总蛋白,采用Western blot方法,应用Image-Pro Plus测定Caspase-3与β-actin灰度值,两者灰度比值为Caspase-3的相对表达量。结果甲型H1N1 A549的TCID50为10-4.75,槲皮素A549的最大无毒浓度为40 mg/L,槲皮素抑制甲型H1N1致A549细胞病变的最小有效浓度为10 mg/L。在甲型H1N1感染A549细胞后4～48 h内,槲皮素可显著抑制Caspase-3蛋白表达,具有明显的抗凋亡作用。结论槲皮素可通过抑制Caspase-3含量或活性而发挥抗病毒感染作用。

复合探针实时荧光RT-PCR法检测小儿上呼吸道感染甲型流感病毒的价值

目的 分析小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测的临床价值。方法选择2023年1月至2023年12月流感监测信息系统两家监测点上呼吸道感染甲型流感病毒感染的患儿80例监测标本进行回顾性分析,均开展复合探针实时荧光RT-PCR法检测,分析其诊断价值。结果 根据监测标本最终诊断结果显示,阳性标本68例、阴性标本12例。经复合探针实时荧光RT-PCR法检出67例,检出率为83.75%,敏感度为95.59%、特异度为83.33%、准确度为93.75%、阳性结果预测值为97.01%、阴性结果预测值为76.92%;批间批内变异系数均小于5%。结论 小儿上呼吸道感染甲型流感病毒应用复合探针实时荧光RT-PCR技术具有较高的敏感度、特异度及准确度,且检查结果快速,可为小儿上呼吸道感染甲型流感病变提供可靠的诊断,有利于制订合理的治疗方案。

甲型H1N1流感病毒性肺炎并发Ⅰ型呼吸衰竭伴2型糖尿病3例诊治分析

目的总结甲型H1N1流感病毒性肺炎并发Ⅰ型呼吸衰竭伴2型糖尿病的诊治经验。方法回顾性分析3例H1N1病毒性肺炎患者的临床资料,分析诊断治疗过程。结果 3例患者均伴有2型糖尿病,以高热、咳嗽入院;患者病情进展迅速,很快出现胸闷憋气症状,血氧饱和度下降,抗感染治疗效果差;血常规淋巴细胞比例均呈下降趋势,淋巴细胞计数减少;血气分析提示,Ⅰ型呼吸衰竭;胸部CT双肺出现广泛渗出性病变,以肺实变为主,影像学呈多样性。考虑病毒性肺炎,及早给予奥司他韦、甲强龙、丙种球蛋白及高流量面罩吸氧、抗感染、补液、降糖等综合治疗后,患者病情好转,影像学检查减轻,疾控中心呼吸道分泌物病毒学检测为甲型H1N1病毒。结论对高热、咳嗽、肺内湿啰音、胸部CT示病灶明显且白细胞及中性粒细胞不高的2型糖尿病患者,在无病毒学诊断依据情况下,及早行以抗病毒为主的综合治疗可达到较好疗效。

杭州市2013～2014年流感暴发流行期甲型流感病毒H3N2亚型基因特性分析

目的分析杭州2013~2014年冬春季流感暴发期间流行的甲型流感病毒H3N2亚型的分子特性。方法选取H3N2阳性标本提取病毒RNA,PCR扩增全基因组并测序,构建血凝素（HA）及神经氨酸酶（NA）分子进化树,对H3N2亚型的病毒进化进行分析。结果 6个代表株中H3N2未发生片段间的重配。以WHO推荐流感疫苗株A/TEXAS/50/2012为参考,HA1蛋白主要抗原决定区发生N145S氨基酸替换,并有其他多个位点的突变。病毒基质蛋白（M2）的金刚烷胺耐药位点全为S31N,神经氨酸酶抑制剂耐药位点未发生突变。结论 H3N2亚型甲型流感病毒HA1蛋白的氨基酸变异与2013~2014年杭州地区暴发流行有关。另外,病毒已出现对金刚烷胺的耐药突变,而对神经氨酸酶未发生耐药突变。

上海市人群甲型流感病毒H1、H3、H5、H9抗体血清学监测

[目的 ] 了解上海市人群对甲 3型、甲 1型流感病毒和禽流感病毒H9、H5的抗体 ,探讨甲 3型、甲 1型流感流行的趋势和禽流感病毒H9、H5抗体存在情况。 [方法 ] 应用常规血凝抑制试验微量半加敏法对上海市不同年龄组人群进行甲型流感抗体血清学监测。 [结果 ] 对A/SH/1/98(H3N2 )毒株的抗体阳性率为 96.2 0 % ;对A/SH /7/99(H1N1)毒株的抗体阳性率为 72 .60 % ;对H9毒株的抗体阳性率为 7.5 6% ;对H5毒株的抗体阳性率仅 0 .75 %。 [结论 ] A/SH/1/98(H3N2 )类毒株已不可能在上海再度引起流行 ;A/SH/7/99(H1N1)类毒株今后在人群中 ,特别在 0～ 4岁年龄组中可能存在散在性发生或局限性小爆发 ;本市人群曾受到禽流感H 9病毒的感染 ,不能排除由本市禽类中的H9病毒感染及人的可能 ;受禽流感H5毒株感染只是个别现象。

寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎的作用

目的探讨寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染小鼠肺炎的影响。方法小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组(27.5 mg/kg)、连花清瘟颗粒组(3.3 g/kg)和寒喘祖帕低、中、高剂量组(0.38、0.76、1.52 g/kg)。除正常组外,其余组小鼠均采用甲型流感病毒H1N1/PR8株病毒液经滴鼻感染建立肺炎模型。各组连续给予相应药物4 d,取样。测定小鼠体质量、肺指数及抑制率、流感病毒载量、14 d内小鼠死亡率、生存时间;ELISA法检测肺组织中IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α水平,HE染色观察肺组织病理改变并评分。结果寒喘祖帕颗粒中、高剂量组可降低感染后小鼠肺指数,其肺指数抑制率分别为24.01%、32.63%;可降低死亡率,其死亡保护率分别为44.44%、50%。寒喘祖帕低、中、高剂量组均可降低小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平,改善小鼠肺部病变,延长平均存活天数,生命延长率分别为17.84%、24.32%、19.46%。结论寒喘祖帕颗粒可改善流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎症状,可降低死亡率、延长平均存活天数。