野菊花水提物体内外抗甲1型流感病毒(H_1N_1)作用研究

目的:从体内外抗病毒实验观察野菊花水提物抗甲1型流感病毒(H1N1)作用。方法:以病毒滴鼻感染小鼠,观察野菊花水提物对肺指数、病毒致小鼠死亡率的影响;体外实验以H1N1感染MDCK细胞,观察野菊花水提物抗H1N1病毒作用。结果:野菊花水提物0.34、0.17、0.085 g/kg 3个剂量组口服给药均能有效降低流感病毒感染小鼠肺指数,与模型组比较肺指数抑制率分别达到28.9%、28.9%、23.6%,野菊花水提物0.34 g/kg能延长流感病毒感染小鼠平均生存时间,降低死亡率;体外实验显示野菊花水提物在无毒浓度下的最大稀释浓度18.28μg/mL下可以完全抑制病毒。结论:野菊花水提物在体内外对甲1型流感病毒均有较好的抑制作用。

银翘散抗甲1型流感病毒作用的实验研究

目的以MDCK细胞及小鼠流感肺炎模型为基础,观察不同浓度银翘散煎剂对流感病毒导致细胞病变的抑制作用和改善小鼠肺炎严重程度的情况,评价古方银翘散对甲1型流感病毒的抑制作用. 方法接种甲1型流感病毒于MDCK细胞,观察银翘散体外抗流感病毒作用;以甲1型病毒滴鼻感染小鼠,观察对肺指数、病毒致小鼠死亡率等的影响.结果银翘散的最大无毒浓度为1.13 g.L-1,100 TCID50病毒攻击量下,银翘散(在0.52～66 g.L-1浓度下)在MDCK细胞对甲1型流感病毒FM1株均无明显的抑制作用.银翘散对流感病毒致小鼠肺炎的抑制作用,其40、20、10 mg.kg-1三个剂量组的肺指数分别为1.35、1.36、1.52,其中银翘散40、20mg/kg两个剂量组与病毒对照组相比,差异有显著性(P＜0.01);银翘散100mg.kg-1与病毒对照组相比,在死亡保护率和平均存活时间均有统计学的差异显著性(P＜0.05).结论银翘散可改善流感病毒引起的小鼠肺炎症状,延长生命率,对甲1型流感病毒感染小鼠有死亡保护作用,对病毒性感冒显示了较好的疗效.

新加香薷饮及其组方药物抗甲1型流感病毒作用的比较研究

目的研究与比较新加香薷饮复方及其组方药物体内外抗甲1型流感病毒的作用。方法通过小鼠肺指数实验、死亡保护实验及鸡血球凝集试验,测定与比较新加香薷饮及其组方药物抗流感病毒的作用机制。结果与模型组比较,高、中、低剂量组的新加香薷饮对小鼠流感病毒性肺炎抑制,受感染小鼠的死亡保护以及流感病毒血凝滴度的抑制均有明显的作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。其中,高剂量组新加香薷饮的抗流感作用明显优于各组方药物,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论高、中、低剂量组新加香薷饮在体内、外均具有良好的抗流感病毒作用,其中,高剂量新加香薷饮的抗病毒作用较单味药显著,并呈一定的量效相关性。

板蓝根提取物抗甲1型流感病毒鼠肺适应株作用的研究

目的研究板蓝根提取液的抗甲1型流感病毒鼠肺适应株作用。方法以病毒滴鼻感染小鼠,建立病毒感染小鼠模型,观察小鼠病死率、肺指数及肺病理改变;用鸡胚培养法观察板蓝根提取物灭活甲1型流感病毒鼠肺适应株的作用。结果药物组小鼠病死率及肺指数明显低于模型组,有显著性差异。肺病理显示病变较模型组轻且炎性细胞渗出少。鸡胚实验结果显示板蓝根提取液能明显灭活病毒。结论板蓝根提取液具有一定的抗甲1型流感病毒鼠肺适应株和增强机体免疫力的作用。

防感煎剂对甲1型流感病毒感染小鼠Th细胞特异性趋化因子受体的影响

[目的]研究防感煎剂对甲1型流感病毒感染小鼠Th细胞特异性趋化因子受体的影响。[方法]建立H1N1型流感病毒感染小鼠模型,流式细胞仪直接免疫荧光法检测Th细胞特异性趋化因子受体CXCR3、CCR4、CCR5,动态观察。[结果]在感染后第1、5、9天,防感煎剂各剂量组可提高下降的CD4+CCR5+%、CD4+CXCR3+%,第13天基本恢复正常;防感煎剂似可减少感染后9～13天染毒小鼠CD4+CCR4+%表达,中高剂量组明显。[结论]防感煎剂主要促进感染早期CCR5、CXCR3表达增加,Th1细胞活化并向炎症部位趋化,引起Th1型抗病毒免疫炎症反应,在感染后期减少CCR4表达,提示有一定的抑制高反应性哮喘和特异性过敏反应的作用。

抗戾饮抗甲1型流感病毒的实验研究

目的以狗肾细胞株(MDCK)及小鼠流感病毒肺炎模型为基础,观察抗戾饮体内、外抗流感病毒的作用。方法将甲1型流感病毒FM1株接种于MDCK细胞,观察抗戾饮对细胞的毒性及体外抗流感病毒的作用;以甲1型流感病毒FM1株滴鼻感染致小鼠肺炎,观察抗戾饮对小鼠肺指数和肺指数抑制率及死亡保护作用的影响。结果抗戾饮的最大无毒浓度为0.21mg/mL,其最大无毒浓度在MDCK细胞对甲1型流感病毒FM1株无明显抑制作用;抗戾饮组的肺指数和肺指数抑制率与模型对照组相比,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01);抗戾饮组的死亡保护率和延长生命率与模型对照组相比,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论抗戾饮体外对甲1型流感病毒无明显抑制作用,但对甲1型流感病毒FM1株致小鼠肺炎具有良好的治疗效果。

射干止咳胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒作用初探

目的初步探讨射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内外抗病毒作用。方法通过细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)结合MTT法考察射干止咳胶囊体外抑制甲型H1N1流感病毒活性的作用;采用小鼠滴鼻法感染甲型H1N1流感病毒为模型,观察射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内抗病毒作用。结果体外抗病毒试验结果显示,射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的最高抑制率为11.86%,提示在攻毒剂量为100TCID_(50)的条件下,射干止咳胶囊在体外对甲型H1N1流感病毒的抑制作用不明显。小鼠滴鼻感染5LD_(50)的甲型H1N1流感病毒,射干止咳胶囊低、中、高剂量组小鼠的死亡率分别为30%、10%、30%,死亡保护率达50%、70%、50%,平均生存天数分别为13 d、14 d、13 d,说明各给药组对攻毒小鼠具有较好的死亡保护作用。结论射干止咳胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒的作用不显著,但射干止咳胶囊各剂量组对甲型H1N1流感病毒攻毒致小鼠死亡却具有明显的保护作用。

感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的药效学研究

目的探讨感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的药效学情况。方法108例甲型H1N1流感病毒感染患者,随机分为观察组和对照组,每组54例。对照组使用磷酸奥司他韦治疗,观察组在对照组治疗基础上使用感冒清热片治疗。比较两组患者临床疗效、症状改善指标(起效时间、退热时间、止咳时间、痊愈时间)、以及治疗前后的中医证候(发热、咽痛、头痛、鼻塞流涕、咳嗽、乏力)积分、血清炎性因子[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]。结果观察组治疗总有效率96.30%高于对照组的77.78%(P<0.05)。治疗后,观察组患者发热、咽痛、头痛、鼻塞流涕、咳嗽、乏力评分分别为(0.83±0.24)、(1.12±0.30)、(1.07±0.29)、(1.03±0.32)、(1.05±0.33)、(1.09±0.28)分,均低于对照组的(1.46±0.37)、(2.31±0.58)、(2.14±0.52)、(2.25±0.63)、(2.36±0.61)、(2.42±0.65)分(P<0.05)。观察组起效时间(1.03±0.34)d、退热时间(1.56±0.40)d、止咳时间(4.35±0.68)d、痊愈时间(6.63±1.26)d均短于对照组的(2.32±0.57)、(2.63±0.74)、(7.24±1.16)、(9.38±1.72)d(P<0.05)。治疗后,观察组CRP(2.11±0.56)mg/L、TNF-α(19.34±2.20)μg/L、IL-6(4.02±0.54)ng/L均低于对照组的(4.83±0.69)mg/L、(25.89±2.73)μg/L、(6.13±0.62)ng/L(P<0.05)。结论感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的疗效显著,能有效缓解证候,加快症状缓解速度,提高抗炎作用。

长春市2016—2020监测年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征分析

目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和变异分析。结果长春市109株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA蛋白相比均有S84N、S162N和I216T共同的氨基酸位点变异,且有1株发生了HA蛋白D222N位点突变,提示此毒株可引起患者下呼吸道症状。109株病毒株的HA基因之间核苷酸同源性为96.9%~100%,氨基酸同源性为97.2%~100%。在进化树分析上,都属于6B.1大分支,并且随着时间的推移,HA在基因进化树上离早期疫苗株A/California/7/2009越来越远,同一年份里也有毒株位于不同的小分支内。结论长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因在不断的变异中,应持续进行监测,为预防甲型H1N1流感大流行提供参考。

1例甲型H1N1流感病毒合并高黏液型肺炎克雷伯菌感染患者俯卧位通气的护理体会

总结1例甲型H1N1流感病毒感染合并高黏液型肺炎克雷伯菌感染患者俯卧位通气的护理体会。护理要点:做好患者的评估,正确掌握俯卧位通气开始及结束的时机,保证治疗的安全有效;根据患者病情,选择合适的翻身方式,保护各管路,做好皮肤护理;运用Richmond躁动-镇静量表(RASS)和镇静-躁动评分(SAS)评分,做好镇痛镇静管理,提高患者的舒适度,保障有效通气。做好气囊管理,预防呼吸机相关性肺炎(VAP)的发生。观察患者有无反流及误吸,做好胃残余量的监测,保证营养供给。监测感染指标,预防导管相关感染。

贯叶连翘提取物抗甲1型流感病毒活性的研究

目的研究贯叶连翘提取物体内外对甲1型流感病毒(IAV)活性的影响。方法以细胞存活率和抑制率为指标,采用MTT比色法检测贯叶连翘提取物体外抑制IAV活性的效应;体内实验以流感病毒滴鼻感染小鼠,分别ig给药,观察小鼠死亡率、生命延长率及小鼠病毒性肺炎的改变,判定其抗流感病毒作用。结果贯叶连翘提取物在体外随药物质量浓度的增加其细胞存活率和病毒抑制率明显升高,与病毒对照组相比均有显著性差异(P<0.01);并可降低流感病毒感染小鼠的死亡率,延长存活时间,明显减轻小鼠病毒性肺炎的症状(P<0.01)。结论贯叶连翘提取物在体内外均有良好的抗IAV活性的作用。

甲_1型流感病毒新分离株HA基因的序列分析

目的研究新分离的 H1 N1 亚型流感病毒株的 HA1基因序列。方法甲型流感病毒通过鸡胚增殖后提取 RNA、逆转录合成 c DNA,经 PCR扩增和产物纯化构建重组质粒 ,用双脱氧链终止法进行核苷酸序列测定并进行基因特性分析。结果新分离到的 3株流感病毒株 (H1 N1 ) HA 1区基因长度为 981bp,编码 32 7个氨基酸 ;与 A/桂防 / 10 / 94和 A/ Bayern/ 0 7/ 95(H1 N1 )标准株比较其同源性分别为 92 .8%和 91.3% ,丢失了第 130位氨基酸和 30 4位糖基化位点 ;新分离的 3株甲型流感病毒株 (H1 N1 ) HA1区氨基酸同源性高达 98% ;A/桂防 / 10 / 94和 A/ Bayern/ 0 7/ 95 (H1 N1 )毒株 HN1氨基酸的同源性高达 96 %。结论新分离到的 3株 H1 N1 毒株 HA编码氨基酸不同于 A/ Bayern/ 0 7/ 95 (H1 N1 )和 A /桂防 / 10 / 94(H1 N1 )标准株 。

玉叶解毒颗粒抗甲1型流感病毒的作用

目的:研究玉叶解毒颗粒体内外抗甲1型流感病毒(Influenza virus)作用。方法:体内试验检测玉叶解毒颗粒对小鼠感染流感病毒所致肺炎的抑制作用和死亡保护;体外实验通过对狗肾细胞(MDCK)的培养,探讨玉叶解毒颗粒在细胞上对感染流感病毒的抑制作用。结果:玉叶解毒颗粒对小鼠肺内的流感病毒有一定的清除作用,能减轻小鼠肺内的炎性病变,在剂量为15g.kg-1时对小鼠有死亡保护作用,体外实验在125g.L-1时能抑制流感病毒。结论:玉叶解毒颗粒在体内外具有明显的抗流感病毒作用。

2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲(A)型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因与世界各地不同年代分离的A/H1N1代表株HA基因的进化关系。方法:从NCBI数据库下载2009年新型A/H1N1亚型流感病毒的HA基因序列以及以往流行的人、猪和禽的A/H1N1亚型流感病毒参考序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件进行序列比对和构建系统进化树,并分别比较2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因与北美地区、欧洲地区、亚洲地区A/H1N1流感病毒HA基因编码蛋白的氨基酸序列。结果:不同时期人A/H1N1亚型流感病毒代表株HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1976～2007年北美地区分离的7株人A/H1N1亚型流感病毒具有较高的同源性,与欧洲和亚洲地区的同源性较低。不同种属间A/H1N1亚型流感病毒HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1998和2007年北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒的HA基因进化关系较近,与欧洲及亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及A/H1N1禽流感病毒进化关系较远。氨基酸比对结果显示2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因的重要抗原位点与北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒相近,与欧洲和亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及人类流感病毒疫苗株相比变化较大。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因可能是北美地区甲型H1N1猪流感病毒长期进化并与该地区人A/H1N1流感病毒部分基因片段重排的结果,对人H1N1甲型流感病毒疫苗可能并不敏感。

2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化及NA基因编码蛋白抗原性、酶活性位点、糖基化位点变异情况。方法:从NCBI基因库检索获得43株不同年代不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件进行基因进化分析和氨基酸序列分析。结果:2009年新型甲型H1N1流感病毒与禽H5N1流感病毒NA基因的同源性达到85%,潜在抗原位点氨基酸分布相同;所有毒株的酶活性中心位点高度保守,但糖基化位点有变异。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒的NA基因可能来源于禽H5N1流感病毒;神经氨酸酶抑制剂治疗有效。

2009年新型甲型H1N1流感病毒全基因组序列重组分析

目的:分析2009年流行的新型甲型流感病毒(A/H1N1)全序列的基因重组现象。方法:从NCBI基因数据库下载2009年新型甲型流感病毒(A/H1N1)全基因组序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件对8条基因序列进行拼接和比对,分析2009年爆发株与历史流行株序列间的同源性;同时采用Simplot3.5.1软件分析新型流感病毒A/H1N1基因重组现象。结果:2009年3月以来爆发的新型A/H1N1病毒株聚合酶B1(polymerase B1,PB1)基因来自于人H3N2,其同源性为93.7%;聚合酶B2(polymerase B2,PB2)和聚合酶A(polymerase A,PA)与禽H5N1同源性较高,同源性分别为89.0%、89.9%;血凝素(hemagglutinin,HA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)和非结构蛋白(non-structural protein,NS)与北美地区猪H1N1同源性较高,同源性分别为91.7%、93.1%和93.1%;神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和基质蛋白(matrixprotein,MP)与欧洲地区猪H1N1同源性较高,同源性分别为90.5%、95.5%。全基因序列同源性分析发现2009年新型A/H1N1病毒与北美地区猪H1N1病毒同源性最高,为83.9%。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒可能是人H3N2、北美地区猪H1N1、欧洲地区猪H1N1、禽H5N1的基因重排病毒。

1981～2005年中国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征

为了解1981～2005年我国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征，选取H1N1甲型流感病毒370株，提取病毒RNA，经逆转录和聚合酶链反应扩增HA1并测序，测定的序列用生物信息软件分析，与GenBank中相关序列比较，并对推导的编码氨基酸序列进行基因特性分析。结果表明：HA1氨基酸的变异表现为抗原决定簇4个区均有变异，Sb区和Ca区变化较大；HA1受体结合位点（RBS）的前壁130环的第134位赖氨酸从1991年起在部分毒株HA1序列上开始缺失，以后缺失株逐步增多，自2000年起测定的所有毒株上该氨基酸全部缺失，同时这些缺失株的第137位氨基酸也全部由苏氨酸替换为丝氨酸；糖基化位点从增多到减少，最后稳定在7个；1981～2004年我国H1N1甲型流感病毒血凝素HA1编码的氨基酸在种系发育树上同年代基本呈现集中分布，与时间和地域无关，2005年毒株分成两个分支在时间上有明显差异。

2009年新型甲型H1N1流感病毒基质蛋白及核蛋白基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲型流感病毒(A/H1N1)基质蛋白(M)及核蛋白(NP)基因的进化规律。方法:从NCBI数据库下载147条甲型H1N1流感病毒M基因及NP基因序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件对M基因和NP基因序列进行比对,并用NJ法构建进化树,同时采用EpiInfo软件分析1918～2009年人H1N1病毒的M基因和NP基因序列进化距离的线性趋势。采用MEGA4.0软件对M2蛋白氨基酸序列进行比对。结果:不同地区的2009年新型甲型H1N1流感病毒M基因、NP基因同源性高,但与历史上流行的H1N1流感病毒M基因、NP基因差异较大,且M基因进化距离随分离年限变化的趋势性检验结果有统计学意义(Ptrend=0.001)。2009年新型甲型A/H1N1流感病毒M2蛋白与1918～2008年人A/H1N1病毒M2蛋白氨基酸序列进行比对,结果显示在第11、43、54、57、77、78氨基酸位点发生了改变;与猪、禽A/H1N1的M2蛋白氨基酸序列进行比对,结果显示仅在第43、77位氨基酸位点发生改变。结论:2009年新型甲型A/H1N1流感病毒NP基因片段较以往流行的人H1N1流感病毒NP基因发生了改变;M2蛋白位于胞外编码区的第11位氨基酸、位于TM结构域的第43位氨基酸突变可能导致了新型甲型A/H1N1流感病毒对金刚烷胺类特异性抗病毒药物产生耐药。