Taq Man荧光定量RT-PCR快速检测甲3型流感病毒

目的建立一种特异、灵敏、快速的荧光定量RTPCR方法用于检测甲3型流感病毒核酸。方法根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物学软件进行序列比对,在甲3型流感病毒血凝素(HA)基因的保守区设计引物和TaqMan探针、并进行筛选。对荧光RT-PCR反应条件进行优化,检测该方法的特异性和灵敏度。并对疑似流感含漱液标本进行检测。结果该方法对甲3型流感病毒的检测有高度的特异性,对甲1型、乙型、禽流感病毒H5、SARS病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.01TCID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论本研究建立的TaqMan荧光定量RTPCR是一种快速检测甲3型流感病毒特异、敏感的新方法。

甲3型、乙型流感病毒在MHL混合细胞中增殖的研究

〔目的〕建立MHL混合细胞瓶分离培养流感病毒的方法 ,为进行流感监测及临床快速诊断打下基础。〔方法〕采用MDCK、HEP -2、LLC混合细胞培养瓶和MDCK单一细胞培养瓶 ,同时分别接种甲 3型和乙型流感病毒标准毒株 ,并设立阴性细胞对照组 ,观察甲 3型和乙型流感病毒毒株在混合细胞瓶和MDCCK细胞瓶中的细胞病变效应 (CPE)、血凝滴度和单克隆抗体荧光染色情况。〔结果〕病毒血凝滴度分别均为 1:160 ,经 1:5稀释的甲 3型和乙型流感病毒接种MHL混合细胞瓶和MDCK细胞瓶经 3 7℃、48h培养后 ,感染甲 3型病毒细胞出现细胞拉网、团聚病变现象 ,感染乙型流感病毒细胞则出现明显细胞固缩、脱落现象 ,MDCK单一细胞培养瓶CPE强于混合细胞培养瓶 :3 7℃、72h培养后 ,检测血凝滴度 ,感染甲 3型流感病毒的MDCK细胞和混合细胞均为l:40。感染乙型流感病毒的MDCK细胞为 1:12 0 ,MHL混合细胞为 1:2 0 ;单克隆荧光抗体检测 ,感染甲 3型和乙型流感病毒的MDCK细胞和混合细胞均呈阳性。〔结论〕应用MDCK、HEP-2 ,LLC混合细胞瓶分离、培养 ,不仅可对甲型流感爆发进行流行病学监测 ,同时还可分离鉴定其它呼吸道病毒 ,利于临床诊断、治疗和预防。

一起甲3型流感的流行特征及其病原学分析

[目的]对2003年8月福建省某县司前乡的一起暴发流感进行流行病学调查与病原学分析。[方法]进行流行 病学调查,用MDCK细胞和鸡胚进行病毒分离,用血凝抑制试验对分离到病毒的标本进行分型鉴定。[结果]司前乡暴发疫 情波及4个行政村,发生疑似流感326例,罹患率7.7%;流感病毒分离阳性率75%(7/9)。[结论]是一起由甲3型流感病 毒引起的暴发流行。

兰州市一起甲3型流感爆发流行的调查报告

目的分析兰州市永登县大同镇第一中学一起甲3型流行性感冒流行的基本情况,探讨流行因素以及防制措施。方法对2004年2月22日至27日该中学所有发病病人进行流行病学调查,描述和分析流行病学、病原学、临床情况及防制措施等相关资料。结果大同镇第一中学790名学生中共发病36例,罹患率为4.56%,发病班级以初(一)四班最多,为31例,占发病总数的86.11%;发病时间为2月22日,26日达到发病最高峰,28日以后再未新发病例;发病学生中男性21例,女性15例,年龄主要分布在14～16岁之间;临床表现以发热、咽痛、咳嗽为主,全身症状不典型,实验室检查阳性率为63.89%,病毒分型为甲3型;采取了控制传染源、切断传播途径、保护易感人群为主的综合防制措施后,该中学学生及周围人群再无新发病例发生。结论根据流感的流行因素、流行规律以及临床特点,及时排除了SARS和人间禽流感等病毒性呼吸道传染病,采取综合防制措施,防止流感在学校等聚集性场所中的爆发流行。

人甲3型流感病毒基质蛋白及其诱导抗体在临床检测中的应用

目的探讨抗重组人甲3型流感病毒基质蛋白(M1)抗体在临床检测中应用的可行性。方法在生物信息学分析的基础上,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人甲3型流感病毒感染细胞中获得目的基因,构建pET-28c(+)/IFV.M1P2重组质粒并在BL21DE3中诱导表达;重组蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。采用间接免疫荧光法检测重组蛋白抗体与病毒感染细胞和临床标本的反应性,并与流感病毒凝血抑制试验结果比较分析,确定重组蛋白抗体的灵敏度和特异性。结果间接免疫荧光法检测抗M1P2重组蛋白抗体与人甲3型﹑甲1型流感病毒反应的抗体滴度可达1∶1200和1∶1000,与乙型流感病毒及其他呼吸道常见病毒无特异性反应。同样方法检测262例上呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本,阳性18例(6.87%),凝血抑制试验阳性24例(9.16%)。与凝血抑制试验相比,间接免疫荧光法检测敏感性为62.5%,特异性为98.7%。结论重组M1P2蛋白具有较强的免疫原性,可模拟天然病毒蛋白诱导产生较强的抗人甲3型流感病毒抗体,该抗体具有较高的反应特异性和一定的灵敏度。

流感病毒监测中一株甲3型变种的发现

目的 :了解深圳市宝安区流感病毒的流行情况。方法 :宝安区两家医院临床样本经鸡胚接种和 MDCK细胞培养 ,用血凝试验和血糖抑制试验鉴定。结果 :分离到甲 3型流感病毒 13株 ,阳性率为 15 % ,并且在监测中发现一株甲 3型流感病毒的新变种。结论 :新变种出现可能造成流感流行 。

兰州市一起甲3型流感爆发流行的调查报告

目的分析兰州市永登县大同一中一起甲 3型流行性感冒流行的基本情况 ,探讨流行因素以及防制措施 ;方法对 2 0 0 4年 2月 2 2日— 2 7日该一中所有发病人数进行流行病学调查 ,描述和分析流行病学、病原学、临床情况及防制措施等相关资料 ;结果大同一中所在的 790名学生中共发病 36例 ,罹患率为 4 .5 6 % ,发病班级以初 (一 )四班最多 ,为 31例 ,占发病总数的 86 .11% ;发病时间为 2月 2 2日 ,2 6日达到最高峰 ,2 8日以后再未新发病例 ;发病学生中男性 2 1例 ,女性 15例 ,年龄主要分布在 14～ 16岁之间 ;临床表现以发热、咽痛、咳嗽为主 ,全身症状不典型 ,实验室检查阳性率为 6 4.5 2 % ,病毒分型为甲 3型 ;采取了以控制传染源、切断传播途径、保护易感人群为主的综合防制措施后该中学所及周围人群再无新发病例发生 ;结论根据流感的流行因素、流行规律以及临床特点 ,及时排除SARS和人间禽流感等病毒性呼吸道传染病的干扰 ,采用综合防制措施 ,防止流感在学校等聚集性场所中的爆发流行。

邳州市一起甲3型流感暴发调查分析

目的调查一起甲3型流感暴发疫情,为防止类似事件发生提供依据。方法病史调查和现场调查相结合,对疫情流行病学特征进行分析,采集部分患者咽拭子标本,用RT-PCR方法检测流感病毒。结果某校学生1 415人,临床诊断流感75例,罹患率为5.3%。疫情持续时间12d,高峰期发病占发病总数78.62%,呈双峰特点分布,具有明显的班级和寝室聚集性,所有病例1年内均未接种过季节性流感疫苗。结论此次为一起甲3型流感冬季暴发疫情,今后的工作中应注意季节性防范。

2022—2023年北京市通州区甲型H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的分析2022—2023年北京市通州区流感病原学监测中甲型H3N2亚型流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因特性,为流感防控提供科学依据。方法对通州区2022—2023年流感病原学监测结果进行统计分析,选取不同时间分离到的34株甲型H3N2亚型流感毒株,进行HA基因扩增和测序,应用MEGA11进行HA基因的核苷酸和氨基酸变异分析,采用邻接法构建HA基因遗传进化树,在线预测N-糖基化位点,分析其基因变异和进化特征。结果2022—2023年共检测流感病原学监测样本3660件,流感病毒核酸阳性率为21.50%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为57.81%。发热疫情样本共计4855件,流感病毒核酸阳性率为54.25%,其中甲型H3N2亚型流感病毒占比为61.50%。34株甲型H3N2亚型流感病毒的HA基因序列与疫苗株A/Darwin/9/2021相比,核苷酸相似度为97.00%~98.50%,氨基酸相似度为97.40%~98.10%。基因进化分析显示,2022—2023均分布在3c.2a1b.2a分支,2022年8—11月分离的14株毒株分布在1a.1亚分支,2023年2—3月分离的20株毒株则分布在2a.3a.1亚分支。与疫苗株相比,2022—2023年的34株毒株在4个抗原决定簇上(B、C、D和E)发生了多位点氨基酸变异,且在186和225位点上均发生了替换。2022年的14株毒株,增加了158NYTY位点,存在13个潜在糖基化位点,2023年的20株分离株122NESF糖基化位点丢失,共有12个潜在糖基化位点存在。结论2022—2023年,北京市通州区人群中流行的甲型H3N2亚型流感病毒分布在2个进化分支上,2023年3C.2a1b.2a.2a.3a.1分支取代了2022年3C.2a1b.2a.1a.1分支,成为流行株。及时分析流感病毒基因特性和进化趋势,对流感的防控有重要意义。

青年人群血清甲_3型流感抗体检测和流行株的抗原性分析

采集４５０例战士血清标本，分别用国家代表株甲３／济防／１５／９０（Ｈ３Ｎ２）和甲３／北京／３２／９２（Ｈ３Ｎ２）作血清血凝抑制抗体测定，青年对甲３型抗体阳性率为６０％～６７％，其ＧＭＴ为３４～４５。１９９４～１９９５年两年中在军营人群中分离到３株Ｈ３Ｎ２毒株流行株，分别应用国际、国家和地方代表株作抗原性分析，证明流行株与它们之间抗原性有明显差异。本文分离到的３株流行株均上送国家流感中心鉴定，证实为Ｈ３Ｎ２亚型毒株。

2004年北京婴幼儿中甲3型流感病毒血凝素基因特性对其抗原性改变的提示

目的了解2004年流感流行季节(2004年8月—2005年4月)北京地区婴幼儿急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒是否存在抗原性的改变以及其变异程度。方法提取1株于2004年3月和32株于2004年流感流行季节从北京地区急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒的病毒RNA,经RT-PCR扩增得到HA1区基因片段并进行核苷酸序列测定,使用生物信息软件分析HA1区基因序列。结果所测定的血凝素HA1区基因均为987bp,编码一个含329个氨基酸的蛋白质。将33株甲3型流感病毒流行株的血凝素(HA1)氨基酸序列与近年WHO推荐的参考疫苗株比较,我们发现一致的多处位点的氨基酸突变,而且突变位点涉及2个抗原决定簇(A、B)和受体结合部位。而2004年3月分离到的毒株在进化分析和氨基酸变异上均不同于2004年流行季节的毒株。结论对血凝素基因HA1区的序列分析结果提示2004—2005年流行季节的甲3型流感病毒较春季的流行株和2004年疫苗株出现了较大的漂移,提示其抗原性可能出现了改变。这种变异对于病毒抗原性的影响以及对于疫苗效果评价的意义值得密切关注。

清热宁冲剂抑制甲_3型流感病毒作用的实验研究

目的：体外观察清热宁冲剂抗甲３流感病毒（Ａ３Ｖ）作用，以期为该冲剂临床应用提供实验依据。方法：采用鸡胚培养术，应用血细胞凝集抑制法，选取抑制病毒指数为指标，将实验药物稀释成不同浓度，以中药制剂抗病毒口服液作为对照药物。结果：清热宁冲剂具有明显抑制Ａ３Ｖ作用，且作用强度强于抗病毒口服液。结论：清热宁冲剂抗Ａ３Ｖ作用明确，为该冲剂的临床应用提供了实验依据。

197例小儿甲_3型流感临床分析

流行性感冒(简称流感)为突然暴发,迅速蔓延的急性呼吸道传染病。1998年初春铜陵地区发生了有史以来较严重的流行性感冒,以家庭幼儿园、学校为流行单位,流行面广。经省防疫站咽拭病毒分离结果,确定为甲_3型流感病毒。现将我院在流行期间收治的197例流感住院患儿分析如下。

某集体生活单位一起甲3型流感暴发调查分析

目的分析武汉某集体生活单位的一起甲3型流感暴发流行的基本情况,探讨流行因素及防治措施。方法对2004年8月5日至8月14该单位所有发病人数进行流行病学调查,描述和分析流行病学、病原学、临床情况及防治措施等相关资料。结果该集体单位142人共发病32人,罹患率为22.54%;发病时间为8月4日,8日达到高峰,13日以后再未新发病例;临床表现以发热、咽痛、咳嗽为主,全身中毒症状比较明显,实验室检查阳性率为58.33%,病毒分型为甲3型;采取控制传染源、切断传播途径、保护易感人群为主的综合防治措施后,该单位再无新发病例发生。结论根据流感的流行因素,流行规律以及临床特点,及时进行病毒分离,明确病原及诊断,及时排除H1N1、禽流感H7N9等其他呼吸道传染病的感染,采用综合防治措施,防止甲3型流感在聚集性场所中的暴发流行。