电化学免疫分析法研究进展

电化学免疫分析法是将免疫分析与电化学分析技术相结合的一种免疫分析新方法.近十多年来,电化学免疫分析法的研究有了迅速的发展.本文对电化学免疫分析法的标记物、免疫方法、电化学检测技术进行了概括总结,并展望了电化学免疫分析的发展前景.

一种基于纳米金介导生物沉积铂催化氢还原的电化学免疫分析新方法

发展了一种基于纳米金介导生物沉积铂并以铂催化氢还原伏安法进行检测的高灵敏电化学免疫分析新方法.该方法采用夹心免疫分析模式,实现了人免疫球蛋白(hIgG)的测定.首先在聚苯乙烯微孔板中固定羊抗人hIgG捕获抗体,hIgG捕获后,碱性磷酸酶标记的hIgG抗体修饰的纳米金探针通过与hIgG形成夹心复合物而结合在微孔板上.结合的碱性磷酸酶催化抗坏血酸磷酸酯底物水解产生抗坏血酸,后者在纳米金的介导下还原铂离子沉积于纳米金表面.沉积的金属铂用王水[V(HNO3)∶V(HCl)=1∶3]溶解并电富集于玻碳电极上.通过测定铂催化氢还原产生的阴极电流,可实现hIgG的高灵敏分析.催化氢还原电流与hIgG浓度对数在100ng/mL～2μg/mL及100pg/mL～100ng/mL之间呈线性相关性,检测限达22pg/mL.由于铂催化氢还原的高灵敏度及纳米金介导的生物沉积放大反应,该法具有较高的分析灵敏度,且免疫分析微孔板模式使得该法可同时用于大量样品的分析.

功能化氧化锌纳米棒放大电化学免疫分析乳制品中大肠杆菌的研究

将检测抗体（dAb）和二茂铁甲酸（FCA）固载于二氧化硅修饰的氧化锌（ZnO@SiO2）表面制备纳米复合材料标记物（{dAb-ZnO-FCA}）,并将其用于放大电化学免疫分析乳制品中的大肠杆菌（Ecoli.在{dAb-ZnO-FCA}中,检测抗体用于免疫结合大肠杆菌,二茂铁甲酸作为电活性物质产生电流信号.采用“三明治”免疫分析模式,基于二茂铁甲酸产生的电流信号与大肠杆菌浓度之间的线性关系实现了对大肠杆菌的检测.实验结果表明,二茂铁甲酸产生的电流信号与大肠杆菌浓度的对数在2.0×102 ～2.0×106 cfu/mL范围内呈良好线性关系,检出限（S/N=3）为100 cfu/mL.利用该电化学免疫分析方法对乳制品进行了大肠杆菌的加标回收实验,回收率为95.8％ ～ 105％.

白血病细胞酶联免疫酶催化银沉积于插指电极阵列电化学免疫分析新方法

建立了一种检测白血病细胞表面抗原的细胞酶联免疫电化学分析新方法.该方法兼有细胞酶联免疫分析抗原、抗体结合的特异性和插指电极阵列酶催化银沉积电化学分析的灵敏性.在聚苯乙烯微孔板中包被白血病细胞,先后加入鼠抗人抗体及碱性磷酸酶(ALP)标记的马抗鼠抗体,ALP催化抗坏血酸磷酸酯(AAP)水解成抗坏血酸(AA),AA使银离子还原成银单质并沉积到插指电极阵列表面,导致插指电极阵列上相邻两个梳齿导通.通过对电导率的测定,可实现对细胞表面抗原的高灵敏分析.此分析方法灵敏度高(可检测出50个左右的HL-60细胞)、特异性好,且可用于大量样品的分析,为白血病等肿瘤疾病的早期诊断和免疫分型提供了新技术.此外,该方法也可用于细胞表面分子基因工程抗体活性的检测.

纳米复合材料标记物放大电化学免疫分析乳制品中的大肠杆菌

将检测抗体（dAb）和二茂铁甲酸（FCA）固载于二氧化硅修饰的氧化锌（Zn O@Si O2）表面制备纳米复合材料标记物（{dAb-Zn O-FCA}）,并将其用于放大电化学免疫分析乳制品中大肠杆菌（Escherichia coli）。采用“三明治”免疫分析模式,基于二茂铁甲酸产生的电流信号与大肠杆菌浓度之间的关系实现了对大肠杆菌的检测。结果表明,二茂铁甲酸产生的电流信号与大肠杆菌浓度的对数在2.0×102-2.0×106CFU/m L范围内保持良好的线性关系,检出限为100 CFU/m L（S/N=3）。利用该电化学免疫分析方法对乳制品进行了大肠杆菌的加标回收试验,回收率在95.8%-105%之间。

电化学发光免疫分析法在甲状腺疾病临床检验中的应用价值

分析电化学发光免疫分析法在甲状腺疾病临床检验中的应用效果。方法 选择我院在2021年1月至2023年1月期间收治的200例甲状腺疾病患者,分为甲状腺功能亢进(n=100)、甲减组(n=100),再选择同期到院内检查的健康体检者(n=100),均采取电化学发光免疫分析法以及放射免疫法进行检查,比较三组人员的甲功五项;两种方法的检查效能(检查准确率、灵敏度、特异度)。结果 电化学发光免疫分析法的整体检查结果优于放射免疫法。结论 甲状腺疾病临床检验中,应用电化学发光免疫分析法检查,可得到良好检查结果,应用价值高,值得推广。

液相色谱串联质谱法和电化学发光免疫分析法检测25-羟维生素D的一致性评价

目的比较液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)与电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测血清中25-羟基维生素D(25(OH)D)结果的相关性和一致性,以期指导临床选择合适的检验方法。方法收集该实验室临床血清标本94例,分别用LC-MS/MS和ECLIA这两种方法检测25(OH)D。采用Passing-Boblok回归分析两种方法的相关性,采用Bland-Altman及Mountain plot评估两种方法的一致性。以血清25(OH)D<20.0 ng/mL为维生素D缺乏,20.0~<30.0 ng/mL为维生素D不足,使用Kappa分析判断两种方法的诊断维生素D营养状况的符合率。结果LC-MS/MS与ECLIA检测25(OH)D结果分别为(26.67±4.79)ng/mL和(39.33±4.09)ng/mL,Passing-Bablok回归分析显示两种方法检测25(OH)D浓度的回归方程为Y ECLIA=-4.5581+1.7198 X LC-MS/MS,斜率为1.7198(95%CI 1.5863~1.8284),不包含1,截距为-4.5581(95%CI-7.6922~-2.1221),不包含0,提示两种方法存在系统差异或比例差异。Bland-Altman图显示两种方法差值的均值为-12.7,界外点数(比率)为3.19%。山形图的山顶值为-9.17 ng/mL,偏离0较多,表明两种方法检测的结果一致性较差。两种方法判断维生素D缺乏的Kappa系数为0.875,诊断符合率为94.68%;两种方法判断维生素D不足的Kappa系数为0.538,诊断符合率为75.53%。结论ECLIA与LC-MS/MS检测结果一致性较差,但依据营养状况诊断维生素D缺乏与不足的符合率较高。

金增强多重胶体金标记树枝状复合物放大的电化学免疫分析新方法

报道了一种电化学免疫分析新方法用于痕量(amol/L级)蛋白质的高灵敏检测.该法采用了两级信号放大策略.先以金标蛋白A与金标抗体形成的树枝状复合物作为一级信号放大,随后使用金增强溶液催化捕获在此复合物上的大量的胶体金纳米颗粒的增大以实现二级信号放大.这种两级信号放大步骤进而结合灵敏的金属溶出伏安分析法以有效增强抗原-抗体免疫反应响应.实验还通过引入免疫复合物的磁分离操作来降低非特异性吸附的影响.结果表明,在优化的实验条件下,开发的新方法在用于人IgG模型分析物测定时的检测下限可低至5.2 fg?mL-1或34.7 amol/L(S/N=3).这种基于胶体金的金属免疫分析新技术有望用于临床诊断、环境监测、生化防预等诸多领域中目标蛋白质的高灵敏检测.

电化学发光免疫分析在免疫检验中的应用价值

观察和探讨免疫检验中电化学发光免疫分析的应用价值。方法 基于等量电脑随机法下,将66例乙肝患者(2021年4月-2022年4月收治)均分为基础组和研究组,各33例;分别给予2组乙肝患者以ELISA(酶联免疫吸附分析)和ECLIA(电化学发光免疫分析)检验,对比两组免疫检验结果。结果 研究组在甲胎蛋白阳性检测率、甲胎蛋白水平及血清CA15-3含量数据方面均优于基础组(P<0.05)。结论 免疫检验中电化学发光免疫分析具有较高应用价值,建议推广。

罗氏电化学发光免疫分析仪残余试剂质量控制和回收价值研究

目的:评估罗氏电化学发光免疫分析仪残余试剂的回收质量,并对其回收价值进行分析。方法:对2022年10月至2022年12月联勤保障部队第988医院罗氏电化学发光免疫分析仪残余试剂进行回收、合并,并与原装试剂分别检测高值与低值两个浓度的质量控制品,检测指标包括血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)及降钙素原(PCT),进行精密度试验、准确度试验、回收试验,并对测量范围进行分析,评估回收的残余试剂的诊断价值。结果:精密度试验结果显示,高值、低值质量控制品批内及批间变异系数(CV)均与厂家要求相符;准确度试验结果显示原装试剂与残余混合试剂偏倚度均在可接受范围内,且两种试剂检测血清AFP、CEA及PCT水平差异均无统计学意义(P>0.05);回收试验结果显示回收率均为90%~110%;残余试剂的测量范围结果提示实测结果与理论结果呈现出良好的线性关系。结论:罗氏电化学发光免疫分析仪残余试剂在规定时限内可回收再利用,检测性能及质量符合临床要求,回收简单、易行,有利于节省成本。

罗氏cobas e801电化学发光免疫定量分析仪检测fPSA的分析性能验证

探讨罗氏cobas e801电化学发光免疫定量分析仪进行项目游离前列腺特异性抗原(fPSA)检测方法的精密度、正确度、可报告范围等分析性能。参照卫健委行业标准WS/T 492-2016验证fPSA精密度,采用卫健委行业标准WS/T 408-2012验证fPSA线性区间。研究发现,罗氏cobas e801电化学发光免疫定量分析仪检测fPSA分析性能结果均符合相关行业标准要求,能为临床提供更准确可靠的检测结果。

磁珠载体-电化学免疫分析研究进展

磁珠不仅拥有巨大的比表面积和高效的分散能力,而且在其表面可以形成牢固的免疫复合物;同时利用磁珠的超顺磁性可以快速的将其分离,样品前处理简单,不需要预浓缩、净化等复杂工序就可以实现对目标物的快速检测。此外,电化学分析技术具有超高的灵敏度,因此将磁珠与电化学免疫分析技术相结合,利用两者的优点则给人们提供了一种新的检测思路。目前,该领域研究活跃,并取得了重要研究进展,开发出了灵敏度高、检测速度快、简便易用的微型电化学免疫检测系统,可以用于食品检测、环境评估和临床诊断等领域。本文介绍了以磁珠为固相载体的电化学免疫分析技术的最新研究进展,特别是从磁电极免疫分析、基于旋转圆盘电极的免疫分析、酶标记免疫磁珠分析和纳米粒子标记免疫磁珠分析四个方面进行具体论述,并对该领域的发展前景做了展望。

化学发光免疫分析在生化检验中的应用

为提高甲状腺功能异常患者检验准确性,为临床提供准确的检验结果,探讨化学发光免疫分析在生化检验中的应用效果。方法:回顾性分析2021年01月~2022年12月在本院接受诊治的甲状腺机能亢进和甲状腺功能低下患者,各40例纳入观察组,选取同期甲状腺功能正常者40例纳入对照组,对比化学发光免疫分析法与电化学发光免疫分析法检测血清促甲状腺激素(TSH)、血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、血清总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、血清总甲状腺素(TT4)水平。结果:甲状腺机能亢进和甲状腺功能低下患者的甲状腺激素与对照组相比,差异显著(P<0.05);化学发光免疫分析法对血清TT3、TT4、FT3、FT4和TSH的检测诊断价值高。结论:在生化检验中,化学发光免疫分析法的准确性较高,在疾病的诊断和治疗中发挥着重要的作用,有助于甲状腺机能亢进和甲状腺功能低下的诊断,为治疗提供有效依据,临床效果显著,应用价值良好,建议推广应用。

罗氏全自动电化学发光免疫分析系统检测大小鼠甲状腺激素水平的实验研究

目的探讨罗氏全自动电化学发光免疫分析系统检测大、小鼠血清甲状腺激素水平的稳定性、可靠性,以及比较不同品系大、小鼠血清甲状腺激素水平的差异。方法 2016年11月—2017年3月,选取7～8周龄昆明小鼠60只和SD大鼠30只;7～8周龄昆明小鼠30只(随机分为实验性甲状腺激素增多组、实验性甲状腺激素减少组和甲状腺功能正常组,各10只),7～8周龄SD大鼠30只(随机分为实验性甲状腺激素增多组、实验性甲状腺激素减少组和甲状腺功能正常组,各10只);10周龄远交系SD大鼠、近交系BN大鼠、远交系昆明小鼠、近交系C57BL/B6N小鼠各20只。采用全自动电化学发光免疫分析系统检测总三碘甲状腺原氨酸(TT_3)、总甲状腺素(TT_4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_3)、游离甲状腺素(FT_4)。结果昆明小鼠、SD大鼠血清甲状腺功能指标批内变异系数分别为0.697%～1.853%、0.946%～1.253%,昆明小鼠、SD大鼠血清甲状腺功能指标批间变异系数分别为1.389%～2.670%、1.150%～2.834%。昆明小鼠、SD大鼠实验性甲状腺激素增多组TT_3、TT_4、FT_3、FT_4水平高于甲状腺功能正常组,实验性甲状腺激素减少组TT_3、TT_4、FT_3、FT_4水平低于甲状腺功能正常组(P<0.05)。各品系实验动物血清甲状腺功能指标变异系数均>5.000%,近交系实验动物血清甲状腺功能指标集中趋势优于远交系。结论罗氏全自动电化学发光免疫分析系统检测大、小鼠甲状腺激素水平的结果稳定性较好,能够较好地区分实验性甲状腺激素增多组、实验性甲状腺激素减少组及甲状腺功能正常组甲状腺功能的差异。

罗氏E170全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂再利用结果分析

目的探讨Roche E170全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂合并再利用的可行性。方法采用合并剩余试剂分别检测特定血清中5个肿瘤标记物[血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA199、CA153、CA125)]的含量,并进行精密度、准确性及回收率分析;与新试剂分别检测同一组标本中5个项目低、中、高3个浓度的含量,并做均值比较及相关性分析。结果合并剩余试剂检测AFP、CEA、CA199、CA153、CA125 5个项目低、高浓度血清批内、批间变异系数(CV)均符合相关标准。质控血清准确性在允许范围内,回收率均值在90%～110%之间。用合并剩余试剂与新试剂分别检测5个项目低、中、高3个浓度,各组均值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Roche E170免疫分析仪可以对剩余试剂合并再利用,能够保证检测质量,降低检测成本。

电化学发光免疫分析法检测T_3及T_4的性能验证

目的 验证罗氏Cobas E601全自动电化学发光免疫分析系统检测T3及T4的分析性能,并探讨配套系统性能验证的简易方案.方法 通过室内质控数据分析,并参考美国临床和实验室标准研究院（CLSI）相关文件,对罗氏Cobas E601全自动电化学发光免疫分析仪检测T3及T4的精密度、正确度、可报告范围和生物参考区间进行试验分析,并与厂商声明的性能或公认的质量目标比较.结果T3及T4的批内精密度变异系数（CV）为1.29％ ～ 6.15％％,＜1/4TEa（CLIA＇ 88）,实验室内精密度CV为4.02％～ 5.65％,＜1/3TEa（CLIA＇ 88）;室间质控品的检测结果与靶值的相对偏倚在-（1.38％～4.18％）之间,＜ 1/2TEa（CLIA＇ 88）;可报告范围与厂家提供的范围相近;T3及T4的测量数值均在提供的参考区间内.结论 罗氏Cobas E601全自动电化学发光免疫分析仪T3、T4检测的主要分析性能符合质量目标要求,能满足临床需要,所采用的验证方案简便可行,且具有实用性.

胰岛素抗体对电化学发光免疫分析法测定血清胰岛素的影响

目的探讨胰岛素抗体（IA）对电化学发光免疫分析法（ECLIA）检测胰岛素的影响。方法放射免疫法检测糖尿病患者血清IA,IA结合率〈5%组10例,IA结合率≥5%组53例。聚乙二醇（PEG）沉淀法去除IA,Roche E lecsys 2010测定胰岛素浓度。结果IA结合率〈5%组和IA结合率5%-10%组PEG处理前后的胰岛素浓度、游离胰岛素/直接胰岛素比值、胰岛素浓度改变值差异均无统计学意义（P〉0.05）。IA结合率10%-20%、20%-30%、〉30%组PEG处理前后的胰岛素浓度、游离胰岛素/直接胰岛素比值、胰岛素浓度改变值差异有统计学意义（P〈0.05）。IA结合率〉10%时,IA结合率与游离胰岛素/直接胰岛素比值呈负相关（r=-0.729,P=0.000）,与胰岛素浓度的改变值呈正相关（r=0.821,P=0.000）。结论IA结合率≤10%时,IA对ECLIA测定血清胰岛素浓度没有影响。IA结合率〉10%时,IA使ECLIA测定胰岛素结果假性升高。

电化学发光免疫分析法检测梅毒特异性抗体的临床应用及假阳性分析

目的评价电化学发光免疫分析法(ECLIA)在筛查梅毒特异性抗体中的临床应用价值,并分析假阳性产生的原因。方法选取2020年9月至2021年8月在该院就诊的门诊及住院78374例患者标本,均采用ECLIA筛查梅毒特异性抗体,阳性标本和临界标本采用梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)进行确证,计算ECLIA检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并对假阳性结果进行分析。结果ECLIA筛查梅毒特异性抗体的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00%、99.94%、97.65%、100.00%;当发光比值>20.00时,ECLIA与TPPA的阳性符合率为100.00%。结论ELCIA适合大规模的梅毒特异性抗体筛查试验,可为临床诊断梅毒提供重要血清学诊断依据。

类风湿因子对酶联免疫吸附试验和电化学发光免疫分析检测甲型肝炎IgM的影响探讨

目的探讨高浓度类风湿因子(RF)对酶联免疫吸附试验(ELISA)和电化学发光免疫分析(ECLIA)检测甲型肝炎病毒IgM抗体(Anti-HAV IgM)的影响,为临床明确诊断甲型肝炎提供依据。方法 60例类风湿关节炎(RA)患者采用免疫比浊法检测RF,用ELISA和ECLIA分别检测Anti-HAV IgM,并比较RF吸附前后ELISA检测Anti-HAV IgM的吸光度(OD)值的差异。结果 60例RA患者血清中,2例确诊甲型肝炎患者采用ELISA和ECLIA法均检测出Anti-HAV IgM阳性,另58例ELISA法检出Anti-HAV IgM阳性11例,阳性率18.96%(11/58);ECLIA检出Anti-HAV IgM阳性1例,阳性率1.72%(1/58),明显低于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。将58例RA患者血清用纯化的人IgG胶乳颗粒试剂吸附后重新进行ELISA检测,仅有2例阳性,吸附后的OD值较吸附前明显降低(P<0.05)。结论血清中高浓度RF会引起ELISA检测AntiHAV IgM的假阳性,而对ECLIA法检测结果干扰较小。

罗氏E601电化学发光免疫分析仪应用及报警故障处理

罗氏E601电化学发光免疫分析仪采用了当今最先进的电化学发光检测技术，该技术是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫以及化学发光免疫技术以后研究出来的新一代标记免疫测定技术，具有灵敏度及重复性好、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、维护方便等优点，是免疫分析重要的发展方向[1-3]。E601可以检测肿瘤标志物、特定蛋白、药物浓度、甲状腺、心梗、骨质疏松以及贫血等众多项目，充分满足临床的检测需求[4]。