H9亚型AIV型特异性电化学发光免疫检测方法的建立

【目的】H9亚型禽流感是重要的人兽共患性传染病,该亚型病毒为H7N9亚型和H10N8亚型流感病毒提供了6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS),并且一直处于动态重组过程中。因此,建立针对H9亚型禽流感的型特异性电化学发光免疫的高通量快速检测方法,加强H9亚型流感的监测,具有重要意义。【方法】用钌联吡啶标记H9亚型AIV的单克隆抗体,用MPI-E型电致化学发光分析系统评价钌标单抗标记效率;用生物素标记H9亚型AIV的多克隆抗体,HABA法检测抗体生物素化的效率;待测抗原与钌标单抗作用1 h后,将此抗原-抗体复合物与通过生物素-链霉亲和素系统固定在磁微球表面的多克隆抗体反应,最后加入反应底物三丙胺后即可在电化学分析系统进行发光检测。优化生物素化多抗和钌标单抗最佳工作浓度,确定临界值和反应谱,对所建立的方法进行敏感性、特异性和重复性试验。攻毒后3 d和5 d,采集攻毒组和空白对照组鸡只的88份咽拭子和肛拭子,分别用电化学发光免疫检测方法和鸡胚病毒分离法进行检测和比较。【结果】钌标抗H9亚型AIV单克隆抗体的标记效率为每个单抗Ig G分子上结合21个Ru2+,且间接免疫荧光方法证明其仍具有生物活性;生物素化兔抗H9N2亚型AIV多克隆抗体的标记效率为每个Ig G分子上结合了6个生物素分子,且Western blotting试验证明其仍保持生物活性;该方法的检测临界值为28.3,可疑区间为23.4—33.2;阴性和阳性变异系数均小于10%;检测限为5×104EID50,能够特异性地检测H9亚型AIV,不与其他亚型流感病毒(H1、H3、H4、H5和H6亚型)和其他类型的禽源病毒(NDV、IBV和IBDV)反应。3 h内即可完成检测,与鸡胚病毒分离法的符合率为86.4%。【结论】所建立的H9亚型AIV型特异性电化学发光免疫检测方法可以用于临床样品检测,对H9亚型禽流感的监测和防控具有重要意义。

胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测癌胚抗原结果比对

目的探讨胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原的结果差异性。方法随机抽取门诊体检标本204例,用胶乳增强透射免疫比浊法和电化学发光免疫分析法同时检测血清中癌胚抗原的浓度,比较两者间差异及相关性。结果两方法学检测结果具有高度相似性,Sprerman相关性检验,相关系数为0.998。结论胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测值的相关性良好,胶乳增强透射免疫比浊法值得在临床上推广使用。但建议各地区基层医院实验室建立本实验室参考范围。

电化学发光免疫分析方法及其应用

电化学发光免疫分析方法是近年来在生物分析领域兴起的一种非放射性微量检测技术，该方法具有灵敏度高、线性范围宽和适用面广等特点，被广泛应用于激素、肿瘤标志物和细胞因子等物质的检测，在医学、食品和环境分析等方面具有广阔的应用前景。该文就该方法的基本原理、类型、应用和发展作简要综述。

北京地区646名健康成年男性前列腺特异性抗原水平的调查

目的：探讨北京地区部分健康成年男性中总前列腺特异性抗原（PSA）、游离前腺特异性抗原(fPSA)和游离前列腺特异抗原与总前列腺特异性抗原（tPSA）比值的水平，并评价年龄与上述指标水平的相关性。方法：应用电化学发生免疫分析方法测定646名20－90岁健康男性血清tPSA、fPSA水平及fPSA／tPSA比值。同时应用两个变量间的直线相关方法统计与各PSA水平的相关性。结果：20－30岁组血清tPSA为0．9ng/ml±0．6ng/ml、fPSA为0．27ng/ml±0．91ng/ml、fPSA/tPSA为0．36±0．20，31－40岁组血清tPSA为0．8ng/ml±0．6ng/ml、fPSA为0．21ng/ml±0．14ng/ml、fPSA／tPSA为0．34±0．23；51－60岁组血清tPSA为1．0ng/ml±0．6ng/ml、fPSA为0．25ng/ml±0．15ng/ml、fPSA／tPSA为0．27±0．18；71－80岁组血清tPSA为1．11ng/ml±0．71ng/ml、fPSA为0．31ng/ml±0．22ng/ml、fPSA为0．29±0．14，81－90岁组血清tPSA为1．3ng/ml±1．1ng/ml、fPSA为0．42ng/ml±0．40ng/ml、fPSA/tPSA为0．36±0．17，年龄与各血清PSA水平无直接相关性。结论：我国健康成年男性的PSA水平可能明显低于西健康男性，而且年龄与PSA水平无直接相关性。