拟南芥电压依赖型阴离子通道参与水杨酸信号应答

电压依赖型阴离子通道蛋白(voltage-dependent anion channels,VDAC)是线粒体外膜分布的重要蛋白,参与形成线粒体通透性转换孔,控制线粒体内外的物质进出。以RLD拟南芥为材料,构建VDAC过量表达和抑制表达的转基因株系,初步探索VDAC在水杨酸(Salicylic acid,SA)信号传递途径中的作用。对转基因拟南芥种子进行SA处理的萌发实验,发现VDAC影响拟南芥种子对SA的敏感性:过量表达株系种子对SA敏感,萌发率较低,而抑制表达株系种子敏感性较低,萌发率高。用实时荧光定量PCR检测SA信号传递的Marker基因PR1,发现在过量表达株系中,伴随VDAC水平升高,PR1上调;同样在抑制表达株系中,VDAC降低,PR1下降。由此说明,VDAC参与了拟南芥SA信号传递。

Ⅰ型电压依赖型钠通道基因突变嵌合体的检测

目的:寻找鉴定Ⅰ型电压依赖型钠通道基因(SCN1A)突变嵌合体的有效方法,降低癫痫伴热性惊厥附加症的再发风险。方法:抽取携带已知突变c.5768A>G/p.Q1923R的患儿及无突变的患儿母亲的外周血全基因组DNA,将患儿的DNA与母亲的DNA以1∶0、1∶1、1∶3、1∶7、1∶15、1∶31及0∶1混合,对包含该突变位点的片段进行PCR扩增后,进行变性高效液相色谱(dHPLC)技术分析、常规测序及焦磷酸测序(pyrosequencing)。结果:常规测序仅能检测出1∶0及1∶1混合样本的突变,而dHPLC及焦磷酸测序均能检测出低至1∶15混合样本的突变,且后者能对突变进行定量。结论:利用dHPLC结合焦磷酸测序的方法能有效快速地检测出低至3%左右的突变,可以避免绝大多数SCN1A基因嵌合突变的漏检。

肾小管性酸中毒Ⅳ型电压依赖型一例报告

患儿 女,1岁9个月。主因咳嗽1个月,发热2周于1996年11月11日入院。既往史无可记述。查体:体温39℃,血压11.0/7.OkPa,身高96cm,体重10kg,发育营养稍差。双肺呼吸音粗,心、腹未见异常。胸片报告“肺炎”。腹部B超检查肝、脾、肾未见异常。血常规检查:血红蛋白101g/L。印象:肺炎;贫血(轻度)。遂予凯福隆与止咳药,第9天换用红霉素,第12天退热,第20天肺部啰音消失。

孕鼠子宫平滑肌与左心室心肌细胞L型电压依赖型钙通道基因表达的变化

目的:探讨孕鼠子宫平滑肌与左心室心肌细胞L型电压依赖型钙通道基因(VDCC-L)的功能性亚单位α1、β2mRNA表达与分娩的关系。方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定未孕鼠、晚孕鼠、产时鼠、产后鼠子宫平滑肌与左心室心肌VDCC-L α1、β2 mRNA相对表达量的变化。结果:4组子宫平滑肌细胞VDCC-Lα1、β2 mRNA表达量,α1依次为0.2911±0.1777、0.4376±0.1342、0.8003±0.1659和0.3942±0.1503,β2依次为0.3045±0.1542、0.3168±0.1459、0.6469±0.1304和0.3202 ±0.1239;α1、β2mRNA在分娩前后的表达规律相似,晚孕鼠较未孕鼠表达增加,其差异均无统计学意义(P>0.05),产时表达急剧升高,与未孕鼠、晚孕鼠相比,差异均具有显著性意义(P<0.05),产后则急剧减少,与产时相比,差异均有显著性(P<0.05)。心肌VDCC-L在4组的表达量,α1依次为0.3020 ±0.1140、0.5033±0.1641、0.6625±0.1801和0.6065±0.1482,β2依次为0.3288±0.1140、0.5250±0.1711、0.6702±0.1405和0.5748±0.1523;孕期有所增加,晚孕鼠与未孕鼠相比差异无统计学意义(P>0.05);产时表达进一步增加,与未孕鼠相比,差异具有显著性意义(P<0.05),与晚孕鼠相比,差异无显著性(P>0.05);产后24h仍维持较高水平,与产时相比无显著性差异(P>0.05)?

电压依赖型钙离子通道和癫

癫疒间 是一种最基本的神经障碍 ,其发病机制复杂 ,临床治疗困难。近年来随着分子基因和药理学研究的进展 ,钙离子通道在癫疒间 发病中的作用已经越来越被人们所认知。本文首先介绍了电压依赖性钙离子通道的分类 ,然后从基因和药理学的角度综述其在癫疒间 发病中的作用 ,最后描述了所述信息和癫疒间 治疗药物发展之间的联系 ,为癫疒间 的治疗提供了广阔的前景。

SiRNA抑制大鼠背根神经节神经元电压依赖型钠通道Nav1.8表达的实验研究

目的应用小片段干扰RNA(SiRNA)转染原代培养背根神经节(DRG)神经元,观察SiRNA干扰DRG神经元基因Nav1.8表达的有效性。方法根据RNA干扰的原理及SiRNA的设计原则,设计2个长度为21bp的以Nav1.8基因为靶点的SiRNA(SiRNAa和SiRNAb),另选择相同长度的无义双链RNA作为阴性对照RNA。T7RNA聚合酶的作用下体外转录合成SiRNA,阳离子脂质体转染试剂将SiRNA导入体外培养DRG神经元,于转染后48h提取RNA,采用RT-PCR和荧光定量PCR检测Nav1.8基因的表达情况。结果在靶向Nav1.8的两个SiRNA序列中,SiRNAa转染神经元后导致Nav1.8基因表达显著降低(48.32±6.84)%,SiRNAb使Nav1.8表达降低(23.32±3.19)%,P均<0.01,阴性对照SiRNA对Nav1.8的表达不产生影响。结论利用体外转录合成的SiRNA成功转染原代培养的DRG神经元,并诱导产生内源性Nav1.8基因的特异性表达抑制。具有较高干扰效应的SiRNA片段可应用于抑制Nav1.8基因表达,进而研究Nav1.8的功能及在疼痛治疗中的作用。

硝苯地平调控JunB表达拮抗敲除L-型电压依赖型钙通道H9c2细胞缺氧/复氧损伤的研究

目的:探讨硝苯地平(Nif)通过调控JunB的表达拮抗敲除L-型电压依赖型钙通道(Cacna1C^(-/-))H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)损伤。方法:建立Cacna1C^(-/-) H9c2细胞H/R损伤模型,用Nif处理细胞。Western Blot检测细胞中JunB和Cleaved caspase-3蛋白的表达,Real-time PCR检测细胞中白介素-6(IL-6)mRNA的表达,比色法测定细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果:H/R增加细胞中JunB的表达,Nif能够降低细胞H/R状态下JunB的高表达,减少Cleaved caspase-3和IL-6的表达,抑制LDH从细胞中漏出。结论:Nif能通过调控Cacna1C^(-/-) H9c2细胞中JunB的表达拮抗心肌细胞H/R损伤。

电压依赖型K^＋通道在大鼠腺苷脑和脊髓镇痛及氟烷麻醉中的作用

腺苷作为一种内源性的抑制性神经递质在中枢神经系统中直接或间接参与机体睡眠、镇静、痛阈调节和抗伤害作用。有研究表明，脑和脊髓背角感觉神经元中存在大量的腺苷受体，尤以A1受体为主。腺苷与其受体结合后通过作用于细胞膜表面的G蛋白，激活ATP敏感型K^＋通道，使神经细胞膜产生超极化，抑制神经元电兴奋的传导，从而产生镇痛作用。但是电压依赖型K^＋通道的激活是否参与腺苷脑和脊髓水平麻醉和镇痛作用有待进一步探讨。

纳升电喷雾串联质谱鉴定吗啡依赖2个重要相关蛋白的N端乙酰化修饰

目的:用纳升电喷雾串联质谱(nanoESI-MS/MS)鉴定吗啡依赖相关蛋白。方法:采用吗啡递增给药法建立吗啡依赖模型,用纳洛酮催促后出现典型的戒断症状,以盐水组为对照,对长期接受吗啡处理和纳洛酮催促戒断这2种状态的大鼠纹状体进行了比较蛋白质组研究,确定了33个差异点。其中差异点150和209用电喷雾串联质谱进行了氨基酸序列分析。结果:电喷雾串联质谱分析表明差异点150和209为2个重要的吗啡依赖蛋白质:G 蛋白β1亚基和电压依赖型阴离子通道蛋白1(VDAC-1),并且这2个蛋白质都发生了 N 端乙酰化修饰。结论:纳升电喷雾串联质谱分析是研究蛋白质 N 端乙酰化的好方法。N 端乙酰化对蛋白质生物学功能有重要作用。这2个蛋白质 N 端乙酰化的生物学功能及其与吗啡依赖的关系值得深入研究。

山莨菪碱抑制成年大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩及其机制

目的:观察山莨菪碱对大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩功能的影响并探讨其机制。方法:采用单细胞动缘探测系统和双激发荧光光电倍增系统观察山莨菪碱对大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩功能的影响,应用信号转导通路中相关受体的激动剂或拮抗剂探讨其作用机制。结果:山莨菪碱1×10-9、1×10-7、1×10-5mol·L-1可直接抑制心室肌细胞钙瞬变和收缩功能;卡巴胆碱可以消除山莨菪碱的作用,而IP3受体阻断剂肝素(1×10-6mol·L-1)和细胞膜电压依赖型钙离子通道阻滞剂维拉帕米(1×10-6mol·L-1)可以减弱山莨菪碱的作用。结论:山莨菪碱抑制心室肌细胞钙瞬变和收缩功能可能与其阻断M受体、抑制细胞内钙库钙离子释放和经过电压依赖型钙离子通道的钙离子内流有关。

铅对四乙基铵诱导海马细胞外信号调节激酶2活力变化的影响

目的探讨急、慢性铅暴露对四乙基铵(tetraethylammonium,TEA)诱导海马CA1区细胞外信号调节激酶2(extracellular signal-regulated kinase,ERK2)活力的影响。方法大鼠怀孕后开始饮用质量浓度为0.2%醋酸铅溶液,断乳后乳鼠则直接饮用,于30 d时,取幼鼠海马脑片稳定培养2 h,作为慢性染铅脑片;另取正常30 d幼鼠海马片稳定培养2 h后,为正常脑片。用TEA和或铅灌流脑片,并用不同的电压依赖型离子通道抑制剂进行处理,于不同时间收集脑片CA1区。用磷酸化抗体,以Western blots方法测定脑片ERK2活力。结果正常脑片组在TEA被冲洗掉10 min后ERK2活力比对照组升高了1.58倍,而22、5 min没有明显变化;nifedipine,L-VDCC抑制剂,可抑制ERK2活力升高。而TEA不能诱导预先用0.8,4.0,20.0μmol/L醋酸铅急性灌流脑片及慢性染铅脑片ERK2活力升高。结论染铅导致的学习记忆损害可能与其抑制活化ERK2含量升高有关,并且铅可能是通过阻止L-VDCC Ca2+内流来对TEA诱导活化ERK2含量升高产生抑制作用。

尼卡地平用于麻醉期间的血压调控

尼卡地平是第一个可以静脉注射的二氢吡啶类钙通道拮抗剂，1981年在日本首次上市，主要通过抑制血管平滑肌电压依赖型钙通道介导的细胞外钙内流，阻断心脏平滑肌S型钙通道而产生确切的降压作用，对血管的选择性较高，对心脏的影响轻，半衰期短，生物利用度低，适用于防治麻醉手术期间的高血压反应，可用于施行控制性低血压等。本文综述近几年来尼卡地平在麻醉手术期间调控血压的应用情况。

黄芩素对大鼠胰岛素分泌的作用及机制研究

目的 研究黄芩素(baicalein)促进大鼠胰岛素分泌及其离子通道作用机制,探究其治疗糖尿病的作用及机制。方法 运用胶原酶P消化Wistar♂大鼠的胰腺组织,继而使用Histopaque1077梯度离心,消化离心后可以得到纯度较高的大鼠胰岛,DispaseⅡ消化胰岛获取单个细胞。应用胰岛素分泌实验监测不同黄芩素浓度(20、50、100μmol·L^(-1))干预下胰岛素分泌情况。应用钙成像技术记录黄芩素干预时,单个β细胞内Ca^2+浓度变化。应用膜片钳技术记录不同药物浓度干预下,单个β细胞的电压依赖性钾电流(Kv)。结果 胰岛素分泌实验显示,16.7 mmol·L^(-1)葡萄糖条件下,黄芩素浓度依赖性促进胰岛素分泌。钙成像技术证实,一定浓度的黄芩素升高了β细胞内Ca^2+浓度。膜片钳技术表明,黄芩素浓度依赖性抑制了单个β细胞的Kv电流。结论 黄芩素可以通过抑制单个β细胞的Kv电流,升高β细胞内Ca^2+浓度,最终促进胰岛素分泌。

肥城桃果实VDAC基因的克隆、生物信息学分析及蛋白诱导表达

线粒体膜通透性转换孔(MPTP)是线粒体膜上的一种蛋白复合体,在线粒体介导的程序性死亡过程中起着重要作用。电压依赖型阴离子通道蛋白(VDAC)是MPTP的重要组成蛋白,可调节其开放与关闭,但VDAC在植物体中的作用机理尚不明确。本试验通过RT-PCR结合DNA末端快速扩增(RACE)方法,克隆得到肥城桃果实线粒体VDAC基因cDNA,全长共1 225 bp,其中编码区828 bp,编码276个氨基酸;氨基酸序列比对和系统进化树分析发现,桃果实VDAC与其它植物的VDAC蛋白具有较高的一致性;体外构建了pET-30a-VDAC重组表达载体,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;使用镍柱纯化法,得到纯化的重组蛋白,为下一步研究桃果实VDAC蛋白的结构和功能奠定了基础。

高血压促进血管平滑肌细胞L型钙离子通道重塑的研究进展

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表达多种离子通道,包括各型钙离子通道,其中L型电压依赖型钙离子通道(L-type voltage-dependent calcium channels,LTCC)对于调节微小动脉血管张力发挥着重要作用。高血压时动脉血管张力异常增高,这种血管张力的变化又会影响LTCC的功能和表达。本篇综述将重点阐述VSMCs上研究较为充分的LTCC。首先,简要介绍LTCC在血管功能调节方面的作用;其次,讨论高血压时VSMCs上LTCC功能和表达变化的最新研究;最后,根据现有研究阐述LTCC作为高血压治疗靶点的应用前景。

箬竹叶氯仿部提取物对小鼠气管平滑肌的舒张作用及其机理

使用高钾溶液(80 mmol/L KCl)和乙酰胆碱(100μmol/L ACh)对小鼠离体气管环进行了预处理诱导气道异常收缩,进而研究了箬竹叶氯仿部提取物(CEIT)对气管的舒张作用及其机理.结果表明:CEIT能够抑制高钾和ACh诱导的预收缩,且呈剂量依赖性.此外,CEIT阻断了VDCCs电流,抑制了细胞外Ca^(2+)内流.在ACh诱导的收缩反应中,不仅VDCCs通道参与其中,还有其他离子通道的参与.CEIT能够抑制NSCCs通道,从而抑制内钙释放.CEIT能够通过阻断VDCCs通道和NSCCs通道抑制外钙内流和细胞内钙释放,从而舒张小鼠气管平滑肌.提示CEIT中的活性成分可以作为一种治疗气道异常收缩的药物.