电压依赖性钙通道α2δ-1亚基在瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏中的表达变化

目的：观察背根神经节电压依赖性钙通道α2δ-1蛋白在瑞芬太尼诱发切口痛大鼠术后痛觉过敏中表达的变化。方法：体重180~220 g雄性SD大鼠64只,采用随机数字法分为8组（n=8）：对照组（C组）;瑞芬太尼组（R组）;切口痛组（I组）;瑞芬太尼＋切口痛组（M组）;切口痛＋鞘内注射NS组（E组）;切口痛＋瑞芬太尼＋NS组（F组）;切口痛＋瑞芬太尼＋Cavα2δ-1错义寡聚核苷酸组（G组）;切口痛＋瑞芬太尼＋Cavα2δ-1反义寡聚核苷酸组（H组）。瑞芬太尼颈部皮下输注剂量为80μg/kg（1 ml）,输注时间30 min;切口痛模型为右后足掌切口,深达肌肉层;鞘内分别注射NS、Cavα2δ-1错义寡聚核苷酸、Cavα2δ-1反义寡聚核苷酸。C、R、I和M组为实验1部分,E、F、G和H组为实验2部分。各组大鼠适应环境两天,于手术前48 h、24 h（T-2、T-1）,手术后6 h,24 h,48 h（T0-2）分别使用热辐射刺激仪和von Frey纤维丝进行热刺激缩足潜伏期（PWL）和机械刺激缩足阈值（PWT）测定。实验2大鼠分别于造模后6 h及24 h痛敏测定结束后进行鞘内注射。实验1和实验2痛敏测定完成后,取L4-6节段背根神经节,采用Western blot免疫印迹杂交法测定Cavα2δ-1蛋白的表达。结果：实验1：I组、R组和M组的术后各时段PWL、PWT均较C组降低,且M组较I组进一步降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;M组背根神经节Cavα2δ-1蛋白表达水平较其余各组均高,差异有统计学意义（P〈0.05）。实验2：E组、F组、G组和H组的术后各时段PWL、PWT均降低,且F组、G组在T1-2较H组进一步降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;H组背根神经节Cavα2δ-1蛋白表达水平较F组、G组降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：背根神经节Cavα2δ-1蛋白可能参与瑞芬太尼诱发切口痛大鼠的术后痛觉过敏的形成;鞘内注射Cavα2δ-1-反义寡聚核苷酸能延缓切口痛大鼠的术后痛敏。

电压依赖性钙通道的α_2δ亚基和疾病及药物靶点的关系

目的介绍电压依赖性Ca2+通道(Cav)的亚单位之一α2δ的结构和功能以及与疾病的关系。方法对近期文献进行综述。结果电压依赖性Ca2+通道由5个亚单位组成。α2δ亚基由α2与δ亚基联接,共同对组成通道孔道的α1亚基进行辅助,以调解外钙内流。介绍了α2δ亚基的结构和在体内的分布,以及与疾病的关系(尤其是癫痫、偏头痛和神经源性疼痛)。gabapentin类药物是α2δ1和α2δ2亚基的小分子配体,通过α2δ亚基起治疗作用。结论α2δ亚基与疾病有关联,也是电压依赖性钙通道的分子靶点,值得进一步研究。

miR-499-5p靶向调控钙通道电压依赖性β1蛋白在慢性心房颤动、心房重构中的作用研究

目的:研究miR-499-5p靶向调控钙通道电压依赖性β1蛋白(CACNβ1)在慢性心房颤动心房重构的作用。方法:构建心房颤动新西兰大白兔模型,动物实验分为sham组、模型组、对照组、实验组,在造模前48 h,对照组和实验组分别以30 mg/kg剂量心脏冠脉注射rAAV9-miR-499-5p-inhibitors-NC和rAAV9-miR-499-5p-inhibitors,sham组、模型组心脏冠脉注射等剂量的PBS缓冲液。电生理刺激仪测定各组动物的心房有效不应期(AERP);JC-1染色法检测各组大白兔的心肌细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测各组大白兔心肌组织中CACNβ1的表达;荧光素酶报告基因分析miR-499-5p和CACNβ1的关系。结果:与sham组相比,模型组动物的AERP明显升高,线粒体膜电位以及CACNβ1的表达明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,实验组动物的AERP明显降低,线粒体膜电位以及CACNβ1的表达明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05);荧光素酶报告基因分析结果显示miR-499-5p能靶向调控CACNβ1的表达。结论:miR-499-5p在慢性心房颤动模型动物中表达升高,抑制其表达能明显改善动物的心脏功能,抑制其心房重构,这可能与靶向调控CACNβ1的表达有关。

血清α2δ-1、RvD1在急性脑出血患者病情评估和预后预测中的价值

目的探究血清钙通道α2δ-1、消退素D1(RvD1)水平在评估急性脑出血患者的病情和预后中的临床应用价值。方法选取2022年1月—2023年12月湖南中医药大学第一附属医院急诊科收治的急性脑出血患者126例为研究组,根据随访6个月患者预后情况分为预后不良亚组52例和预后良好亚组74例;另选取同期医院健康体检者60例为健康对照组。采用酶联免疫吸附法测定血清α2δ-1、RvD1水平;多因素Logistic回归分析急性脑出血患者预后不良的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清α2δ-1、RvD1水平对急性脑出血预后不良的预测价值。结果研究组血清α2δ-1水平高于健康对照组,血清RvD1水平低于健康对照组(t=28.379、16.412,P均<0.001);随着病情加重,急性脑出血患者血清α2δ-1水平逐渐上升,血清RvD1水平逐渐降低(F=109.100、54.370,P均<0.001);126例急性脑出血患者6个月预后不良发生率为41.27%(52/126),预后不良亚组患者年龄、发病至入院时间、NIHSS评分、血肿体积、血清α2δ-1大于/高于预后良好亚组(t=3.331、27.914、21.449、6.056、2.301,P均<0.01),血清RvD1水平低于预后良好亚组(t=5.824,P<0.001);多因素Logistic回归结果示,NIHSS评分、血肿体积、α2δ-1升高为急性脑出血患者预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=2.361(1.694~3.101)、2.147(1.514~2.798)、1.665(1.262~2.995)],RvD1升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.389(0.255~0.662)];血清α2δ-1、RvD1水平及二者联合预测急性脑出血患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.756、0.780、0.841,二者联合的AUC大于血清α2δ-1、RvD1水平单独预测(Z/P=2.623/0.009、2.127/0.033)。结论血清α2δ-1、RvD1水平可反映急性脑出血患者的病情程度,可作为患者预后不良的辅助预测指标,二者联合对急性脑出血患者的预后评估价值较高。

电压门控钙通道辅助亚基α2δ-1的结构和分子药理

电压门控钙通道(voltage-gated calcium channel, VGCC)辅助亚基α2δ-1在神经元兴奋传递中起促进作用,是加巴喷丁(gabapentin)和普瑞巴林(pregabalin)的作用靶点。α2δ-1由高度糖基化的α2亚基和δ亚基以4对二硫键相连,包含4个串联的Cache结构域和1个von Willebrand A结构域,但δ亚基的C-末端结构尚未完全解析。α2δ-1的结构和作用机制研究进展主要聚焦于以下3点:(1)α2δ-1的C-末端,传统观点认为含有跨膜基序(motif)。另一个观点认为是GPI锚定,尚缺乏直接的实验证明;(2)α2δ-1对电压门控钙离子通道的影响,包括直接的和非直接的调控对电压门控钙通道的膜上转运和电流的影响,以及α2δ-1的翻译后修饰对钙电流的影响;(3)α2δ-1不依赖于钙通道,而与其他蛋白质存在相互作用,互作效应表现在兴奋性电流增大或促进神经突触发生。在疾病研究方面,本文主要综述α2δ-1在慢性疼痛中的机制研究。α2δ-1参与的生理活动的分子机制复杂,现已突破传统的局限于电压门控钙通道辅助亚基的角色,并将有可能通过α2δ-1建立跨细胞膜的蛋白质-蛋白质相互作用网络的动态膜微区,以进一步评估其生理、病理和药理的相关性。

弱精子症患者精子中电压依赖性钙通道基因表达的变化

目的:探讨弱精子症患者精子中电压依赖性钙通道基因的功能性亚单位α1mRNA表达与弱精子症的关系。方法:首先根据WHO标准用计算机辅助精液分析(CASA)方法对供精者提供的精液进行筛选,然后用Per-coll非连续梯度离心法对精子进行优化,最后应用半定量反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别检测50例正常组成熟运动精子和50例弱精子症患者精子中各类型电压依赖性钙通道的α1mRNA相对表达量。结果:与正常成熟运动精子相比,弱精子症患者精子中电压依赖性钙通道的α1B(39.40±9.47)、α1C(48.30±11.60)、α1E(3.20±0.78)、α1G(8.40±2.03)、α1H(5.70±1.47)mRNA表达的差异具有极显著意义(P<0.01)。结论:L型和/或非L型电压依赖性钙通道的基因表达异常可能是导致人类精子运动能力下降的原因之一,为人类弱精子症病因提供了新的研究方向。

正常人类精子电压依赖性钙通道类型的分子生物学鉴别

目的:利用分子生物学技术对正常人类精子中电压依赖性钙通道的类型进行鉴别。方法:根据WHO标准用计算机辅助精液分析筛选出5例正常精子标本(前向运动精子>60%,活率>80%),混合后用上游法对精子进行优化。采用RT-PCR检测人类精子中电压依赖性钙通道的α亚单位。结果:α1A和α1D未检测出,而其他α亚单位,如α1H、α1G、α1E、α1B、α1C均有表达。结论:在正常人类精子中电压依赖性钙通道显著表达T型或非L型RNA,在精子运动和精子顶体反应中,细胞外的钙离子内流可能是通过T型或非L型电压依赖性钙通道介导的。

三叉神经痛大鼠中钙通道α2δ-1亚单位表达的变化

目的研究大鼠眶下神经结扎后钙通道α2δ-1亚单位(Cavα2δ-1)表达的变化,探讨Cavα2δ-1与三叉神经痛的关系。方法将12只SD大鼠随机分为神经结扎组和假手术对照组,每组6只。用铬肠线轻松结扎神经结扎组大鼠的眶下神经,建立三叉神经的神经病理性疼痛动物模型;假手术对照组仅暴露神经,不结扎。术前1 d,术后第3、6、9、12、15天测定机械刺激反应阈值。术后第15天收集三叉神经节(TG)和三叉神经脊束核尾侧亚核及颈段第一、二脊髓背侧角(Vc/C2)组织,采用Western印迹杂交法测定Cavα2δ-1蛋白浓度。结果神经结扎组大鼠术侧机械刺激反应阈值在术后逐渐降低,与术前比较,术后第9、12、15天机械刺激反应阈值差异有统计学意义(P<0.05)。术后第15天神经结扎组术侧TG和Vc/C2中Cavα2δ-1表达明显上调(P<0.01)。结论 Cavα2δ-1参与了大鼠三叉神经痛的发生发展,为进一步探讨三叉神经痛发病机制提供实验基础。

大鼠电压依赖性阴离子通道1的基因克隆与序列分析

目的克隆大鼠电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法以提取的大鼠心肌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得VDAC1基因片段,连接到pMD19-T克隆载体并测序鉴定。应用生物信息学方法分析VDAC1基因的序列同源性与结构特征。结果成功克隆了大鼠VDAC1基因,与人、牛、小鼠、兔和猪的VDAC1基因具有高度同源性,同源性分别为90.0%、90.6%、96.0%、91.1%和91.0%。VDAC1在体外哺乳动物网状细胞中的半寿期为30h,无卷曲螺旋结构,但有6个亲水区,在225～247aa具有真核细胞线粒体外膜孔道蛋白家族特征性模序结构。结论成功克隆了大鼠VDAC1基因,并应用生物信息学技术进行序列分析,为进一步研究其生物学功能及其在2型糖尿病发病机制中的作用提供了依据和线索。

线粒体电压依赖性阴离子通道1在阿尔茨海默病发生机制中的作用

线粒体电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)是存在于线粒体外膜上的一系列孔道蛋白,其亚型之一VDAC1参与线粒体通透性转换(MPT)孔道的功能发挥,调控阳离子、阴离子、ATP、无机磷酸盐以及其他代谢产物进出线粒体。研究发现,随着阿尔茨海默病(AD)的发生发展,VDAC1蛋白表达水平提高,且其与β-淀粉样蛋白(Aβ)及磷酸化tau蛋白相互作用,干扰ATP/ADP、蛋白质等代谢产物的转运。现就VDAC1的结构、特性以及在AD发病中的机制作一综述。

Ca^(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在心脏重构中作用的研究进展

Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ是一种分布广泛的多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与调节心脏的多种生理活动,如兴奋-收缩耦联和兴奋-转录耦联等生理过程;然而钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的持续过度表达会催化激活多种心脏靶蛋白,包括离子通道、Ca2+稳态蛋白、转录因子等,引起兴奋-收缩耦联、兴奋-转录耦联缺陷,提示钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ信号通路是促进心肌肥厚、心力衰竭和心律失常的中心机制之一。现对近几年来这一领域的进展进行扼要综述。

细胞凋亡及与线粒体电压依赖性阴离子通道1的联系在阿尔茨海默病中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性认知功能下降和行为能力受损为特征的中枢神经系统退行性疾病。病理特征主要表现为β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成老年斑及微管相关蛋白tau蛋白异常高度磷酸化导致神经原纤维缠结(NFTs),也包括突触细胞丢失、异常神经元变性坏死等[1,2]。细胞凋亡主要是一种由基因调控的细胞发生程序化死亡现象,在生物体内细胞凋亡必不可少。胚胎正常发育过程中,生理性细胞凋亡负责清除局部细胞及受损的异常细胞来维持组织细胞稳态。

脂多糖对大鼠尾核神经元L型电压门控钙通道电流的影响和外源性2-AG的调制作用

目的:探讨内源性大麻素2-花生四烯酰甘油(2-AG)对脂多糖(LPS)损伤的大鼠尾核神经元L型电压门控钙通道(L-VGCC)电流的调制作用及其分子机制。方法:原代培养新生大鼠尾核神经元,分为对照组、LPS组、2-AG组、2-AG+LPS组、SR141716A(CB1受体反向激动剂)+2-AG+LPS组和AM630(CB2受体反向激动剂)+2-AG+LPS组,应用全细胞膜片钳记录2-AG对LPS损伤的大鼠尾核神经元L-VGCC电流的影响;采用Hoechst染色法观察2-AG对LPS诱导的尾核神经元损伤的影响,并用试剂盒测定尾核神经元caspase-3的活性。结果:(1)LPS能增强L-VGCC电流密度,且未影响L-VGCC激活及失活的电学特征;(2)2-AG能抑制LPS增强L-VGCC电流密度的作用;(3)LPS增强L-VGCC电流密度并非是通过CB1和CB2受体起作用的;(4)2-AG本身对尾核神经元L-VGCC电流密度、激活及失活等电流特性均不产生影响;(5)LPS诱导的尾核神经元caspase-3活性增强可被2-AG抑制,CB1受体反向激动剂SR141716A可取消2-AG的这种效应;(6)LPS可诱导尾核神经元表现出典型的凋亡特征,2-AG可使LPS诱导的核固缩细胞数目显著减少。结论:内源性大麻素2-AG可通过调节尾核神经元L-VGCC电流起抗炎作用和保护神经元的效应。

类KQT亚科-钾离子电压门控通道成员1基因多态性与赣州市居民2型糖尿病的相关性

目的探讨类KQT亚科-钾离子电压门控通道成员1(KCNQ1)基因单核苷酸多态性与赣州市居民2型糖尿病(T2DM)发病的关系。方法采用巢式病例对照研究方法,选择新发T2DM患者521例(T2DM组)、糖调节正常(NGT)者521例(NGT组)。应用多重PCR技术、MassARRAY iPLEX单碱基延伸技术和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)技术,对KCNQ1基因rs2237892、rs151290位点进行基因分型,比较rs2237892、rs151290位点基因型和等位基因在2组中的差异。结果 rs2237892位点存在CC、CT、TT 3种基因型,其在T2DM组的分布频率分别为49.41%、43.48%、7.11%,NGT组的分布频率分别为43.26%、46.48%、10.26%,CC基因型在2组之间的频率分布差异有统计学意义(χ~2=4.502,P=0.034),OR(95%CI)值为1.647(1.036~2.620);等位基因C、T在T2DM组的分布频率分别为71.15%、28.85%,NGT组分别为66.50%、33.50%,等位基因C在2组之间的频率分布差异有统计学意义(χ~2=5.049,P=0.025),OR(95%CI)值为1.242(1.028~1.501)。rs151290位点存在CC、CA、AA 3种基因型,其在T2DM组的分布频率分别为39.09%、49.01%、11.90%,NGT组分别为36.57%、47.27%、16.16%,2组之间各基因型分布频率比较差异均无统计学意义(P>0.05);其等位基因C、A的分布频率在2组之间比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论 KCNQ1基因rs2237892位点多态性与赣州市居民T2DM的发病相关,而rs151290位点多态性可能与赣州市居民T2DM的发病无关。

电压门控钙通道α2-δ亚基配体治疗纤维肌痛综合征的研究进展

纤维肌痛综合征(FMS)是一种以全身慢性广泛性疼痛为特征的临床常见疾病,严重影响着患者的身心健康。药物治疗是目前纤维肌痛综合征综合治疗模式的重要组成部分,近年研究证实,电压门控钙通道α2-δ亚基配体(VGCCα2-δL)对于该病的治疗具有广阔的应用前景。本文将对VGCCα2-δL治疗纤维肌痛综合征的研究现状进行综述,旨在为纤维肌痛综合征的临床治疗提供参考。

β-淀粉肽(1-40)对海马神经元高电压激活钙电流的作用及银杏内酯B对该作用的影响(英文)

应用全细胞膜片钳技术探讨β-淀粉肽(1-40)(β-amyloid peptide1-40,Aβ1-40)对新鲜分离的大鼠海马CA1区锥体神经元高电压依赖性钙通道电流(high voltage-activated calcium channel current,INVA)的作用并观察银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对该作用的影响。利用细胞外灌流或者电极内液给药的方法,比较加药前后电流幅度的变化以判断药物是否发挥作用。细胞外给予老化处理的Aβ1-40可以浓度依赖性地增强IHVA的幅度,Aβ1-40的浓度为0．01-30 μmol/L时可分别使IHVA幅度增加(5．43±3．01)％(n=8, P>0．05)、(10．49±4．13)％(n=11,P>0．05)、(40．69±8．01)％(n=16,P<0．01)、(58．32±4．85)％(n=12,P<0．01)和(75．45±5．81)％ (n=6,P<0．01);新鲜配制的Aβ1-40对IHVA几乎没有影响(n=5,P>0．05)。L-型钙通道阻断剂nifedipine可以抵消Aβ1-40对IHVA的增强作用。Aβ1-40(1．0 μmol/L)对IHVA的增强作垌可以被cAMP的类似物8-Br-cAMP和腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)的激动剂forskolin增强[分别为(66．19±5．74)％,P<0．05和(73．21±6．90)％,P<0．05],被蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的抑制剂H- 89减弱[(20．08±2．18)％,P<0．05]。GB可有效地减弱Aβ1-40对IHVA的增强作用。以上结果表明Aβ1-40可通过AC-cAMP-PKA 增强IHVA引起胞内钙超载,这可能是其产生神经毒性作用的机制之一。GB可通过抑制Aβ1-40引起的异常钙离子内流对神经元起一定保护作用。

HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用。方法采用剂量递增方法,建立二乙酰吗啡成瘾大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为3组,正常组(Control,n=10)皮下注射等量生理盐水;模型组(Model,n=15)首次皮下注射二乙酰吗啡剂量为5 mg/kg,以后逐日递增剂量2.5 mg/(kg·d),连续注射20 d;模型+10 D组(Model+10D,n=15)在模型组基础上继续递增剂量至第10天。采用ELISA法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT)含量;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化;采用TUNEL染色检测各组心肌组织细胞凋亡;采用免疫组化、RT-qPCR和Western blot检测HK2、VDAC1及凋亡相关因子的mRNA和蛋白的表达变化。结果HE染色发现随着二乙酰吗啡干预时间的延长,心肌组织表现出不同程度的损伤。与正常组相比,模型组中血清LDH、GOT含量及心肌凋亡率升高,HK2和抗凋亡因子Bcl-2的mRNA和蛋白水平下降,VDAC1和促凋亡因子Bax、Caspase-3的mRNA和蛋白水平升高,Clevead Caspase-3蛋白水平升高;与正常组相比,模型+10 D组中以上指标,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二乙酰吗啡可导致心肌细胞凋亡,HK2和VDAC1可能参与了二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡的过程。

氯通道阻断剂对α_1-肾上腺素受体亚型引起的Ca^(2+)内流的影响

目的探讨氯通道阻断剂在α１Ａ、α１Ｂ、α１Ｄ肾上腺素受体（ＡＲ）亚型触发的Ｃａ２＋内流中的作用。方法采用Ｆｕｒａ－２荧光探针双波长测定胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）。结果在３种亚型的细胞上，肾上腺素（Ａｄｒ）触发的Ｃａ２＋内流均不受ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ影响； ＳＫ＆Ｆ９６３６５可部分抑制α１Ａ、α１Ｂ－ＡＲ介导的Ｃａ２＋内流，而对ａ１Ｄ－ＣＨＯ细胞无影响。在ＢＢ－ＣＨＯ细胞上，ｎｉｆｌｕｍｉｃ ａｃｉｄ（ＮＦＡ）和ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ呈浓度依赖性抑制Ｃａ２＋内流；当Ｃａ２＋内流被ＳＫ＆Ｆ９６３６５最大限度抑制后，ＮＦＡ和ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ可进一步抑制Ｃｄ２＋内流。α１Ａ－ＡＲ介导的Ｃａ２＋内流可被ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ抑制，抑制率达 １４％ １５％。 ＮＦＡ可抑制ａ１Ｄ－ＡＲ引起的Ｃａ２＋内流，抑制率为３９％±９％。结论氯通道参与α１Ａ、α１Ｂ及α１Ｄ－ＡＲ引起的经非电压依赖性Ｃａ２＋通道介导的Ｃａ２＋内流，其间存有异同。ＮＦＡ敏感Ｃａ２＋内流及ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ敏感的Ｃａ２＋内流与ＳＫ＆Ｆ９６３６５敏感的Ｃａ２＋内流存在非同一性。

敲低lncRNA CACNA1C-AS2促进上皮间质转化增强人食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2)通过调节上皮间质转化(EMT)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CACNA1C-AS2在癌旁组织和食管癌组织的表达;实时定量PCR检测食管癌细胞中CACNA1C-AS2 mRNA表达水平;在食管癌细胞中敲低和高表达CACNA1C-AS2后,采用噻唑蓝(MTT)法和细胞集落形成实验检测细胞的活力,TranswellTM小室法检测细胞的侵袭能力和纵向迁移能力,划痕愈合实验检测细胞的横向迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot法检测神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和锌指转录因子snail 2(slug)蛋白表达。结果 CACNA1C-AS2在食管癌组织和细胞系中均低表达;敲低EC-9706细胞和Eca-109细胞中CACNA1C-AS2后,食管癌细胞的侵袭、迁移能力和细胞活力显著增强,细胞凋亡减少;N-cadherin、vimentin和slug表达上调。过表达CACNA1C-AS2则结果相反。结论 CACNA1C-AS2通过促进EMT增强食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在PDGF诱导肝星状细胞胶原合成中的作用

目的观察Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对PDGF诱导下人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)colla-genα1(Ⅰ)合成的影响。方法 CaMKⅡαsiRNA转染对HSC内CaMKⅡα进行干扰,real-time PCR法检测HSC collagenα1(Ⅰ)及TIMP-1 mRNA的表达,Western blot法检测collagenα1(Ⅰ)及MMP-2、TIMP-1表达的变化,ELISA法检测HSC collagenα1(Ⅰ)分泌的变化。结果 CaMKⅡαsiRNA可显著抑制PDGF诱导下HSC collagenα1(Ⅰ)及MMP-2、TIMP-1的转录、蛋白表达以及collagenα1(Ⅰ)的分泌,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CaMKⅡα信号参与了PDGF诱导下HSC collagenα1(Ⅰ)的产生与分泌,同时通过抑制MMP-2、促进TIMP-1的表达而阻止胶原的降解,是肝纤维化发展过程中PDGF信号的重要调控分子和肝纤维化的潜在治疗靶点。