大鼠冠状动脉平滑肌细胞的分离及电压依赖性钾通道电流特性的初步研究

目的建立一种稳定、高效的大鼠冠状动脉平滑肌细胞(CASMCs)的急性酶分离方法,并对其电压依赖性钾离子通道(KV)进行研究。方法采用"三步"(依次用3种分离酶液)急性酶分离方法分离大鼠CASMCs,并进行细胞鉴定,采用膜片钳记录KV电流。结果①本分离方法可以获得数量较多,活性较好的平滑肌细胞;②测试电位为+60 mV时,KV电流密度达到最大值34.35±2.53 pA/pF,加入4-氨基吡啶后电流密度降至3.55±0.47pA/pF。两组之间电流密度的差异具有显著性(n=5,P<0.05)。KV稳态激活曲线的半数激活电压V1/2=23.66±1.03 mV,曲线斜率因子k=14.44±0.94 mV。结论 "三步"法为使用膜片钳记录CASMCs的离子通道电流提供了较好的研究方法。

人外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道电流的记录及其特性

目的：观察人外周血淋巴细胞膜上电压依赖性钾通道的特性。方法：膜片钳记录方法。结果：观察到该通道的最小激活电压为－38．6±2．1mV。复极过程中通道关闭常数为109．25±8．5ms，并可被10mmol／L的TEA所阻断。结论：人外周血淋巴细胞膜上存在着电压依整性钾电流，其物性与神经和肌肉细胞膜上的延迟整流性钾电流相类似。

体外培育牛黄抑制大鼠三叉神经节细胞电压依赖性钙通道电流参与镇痛机制

目的:研究体外培育牛黄(CBS)对大鼠三叉神经节(TRG)细胞电压依赖性钙通道电流(ICa)的影响,探讨牛黄镇痛作用的电生理机制。方法:在培养大鼠TRG细胞上采用全细胞膜片钳记录ICa。结果:CBS能够剂量依赖性地抑制TRG细胞电压依赖性钙通道电流,0.2,2,20μg.ml-1CBS可使钙电流幅值分别减少(30.3±4.7)%、(41.9±3.6)%和(56.7±6.8)%(n=6,P<0.01)。结论:CBS对钙电流的阻滞作用可能是其镇痛作用机制之一。

大黄素对大鼠近端结肠平滑肌细胞电压依赖性钾通道的影响

目的研究大黄素对大鼠近端结肠电压依赖性钾离子通道的影响,以探讨其增强结肠运动的机制。方法采用全细胞膜片钳技术测定电压依赖性钾离子通道快速激活型钾电流及延迟整流型钾电流。结果大黄素(1～30μmol·L-1)浓度依赖性地阻断延迟整流性钾通道,加快电流失活,其阻断作用不需要钾通道的开放。30μmol·L-1大黄素可抑制快速激活型钾电流。5μmol·L-1大黄素对钾通道的激活动力学及失活动力学没有影响,但30μmol·L-1大黄素使其激活动力学曲线明显右移,斜率常数由(13.0±0.6)上升至(19.6±2.5)mV,同时也使失活动力学曲线明显右移。结论大黄素可阻断延迟整流型钾通道及快速激活型钾通道,其阻断作用不是开放阻断。

电压依赖性钾通道与人类神经性疾病

电压依赖性钾通道是钾通道超家族中成员最多 ,最为复杂的亚家族。主要包括Kvα亚单位和辅助亚单位两部分。其中快速失活A型通道和毒蕈碱敏感的M通道已被大量研究。它们广泛分布于神经系统 ,主要参与各种生理和病理作用 ,如膜兴奋性的产生、神经递质的释放、神经元细胞的增殖和退化 ,以及神经网络的信号传递等。目前发现Kv通道亚型或亚单位的突变与学习和记忆的损伤、共济失调、癫痫。

山奈酚对急性短暂缺氧时大鼠海马CA_1神经元电压依赖性钾通道的作用

目的 研究山奈酚对正常和急性短暂缺氧时大鼠海马CA_1锥体神经元电压依赖性钾通道的作用。方法 急性分离大鼠海马CA_1区锥体神经元,采用全细胞记录。用含有氰化钾(KCN)60μmol·L^(-1)的标准外液灌流模拟细胞缺氧,观察山奈酚对正常和缺氧时海马CA_1区神经元电压依赖性钾通道的作用。结果 山奈酚对正常和缺氧时海马CA_1神经元电压依赖性K^1电流有明显的抑制作用,可同时抑制瞬时外向型钾电流(I_A)和延迟整流性钾电流(I_K)。具有浓度依赖和电压依赖性;山奈酚对I_A的半数抑制浓度(IC_(50))约为50μmol·L^(-1),对I_k的IC_(50)约为 80μmol·L^(-1)。结论 山奈酚对正常和缺氧时大鼠海马CA_1神经元电压依赖性钾通道有抑制作用。其对钾通道的抑制作用可能参与脑缺血保护。

电压依赖性钾通道与Miconazole在低氧性肺血管收缩中的作用

目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(PaSMCs)膜上电压依赖性钾通道(Kv)与细胞色素P450氧化酶抑制剂Miconazole在低氧性肺血管收缩中的作用。方法采用急性酶分离法分离出大鼠肺动脉平滑肌细胞(PaSMCs),利用全细胞膜片钳技术记录PaSMCs的Kv通道的电流特性;用低氧液体灌流PaSMCs造成急性低氧模型,记录低氧作用前后Kv通道的电流变化;用不同浓度的Miconazole作用于PaSMCs,记录加药前后的电流变化。结果低氧液体灌流以及不同浓度的Miconazole对Kv均有明显的抑制作用,且Miconazole的抑制作用具有一定的浓度依赖性,在加用Kv的特异性的阻断剂4氨基吡啶(4AP)后再加用该药不能进一步抑制Kv电流。结论低氧和Miconazole均作用于Kv通道的同一部位,支持PaSMCs膜上的Kv通道在低氧性肺血管收缩中起重要作用,而细胞色素P450氧化酶可调节细胞内的氧化还原状态,可能系一重要的氧感受器。

L-甲状腺素诱导心肌肥厚模型下电压依赖性钾通道信使核糖核酸的表达

目的 :探讨心肌肥厚易致心律失常的机制。 方法 :SD大鼠实验组 9只 ,对照组 7只 ,用 L -甲状腺素诱导法制备大鼠心肌肥厚模型 ,用逆转录多聚酶链反应方法(RT- PCR)半定量分析肥厚心肌内电压依赖性 K+ 通道信使核糖核酸 (m RNA)水平。 结果 :实验组与对照组相比 ,实验组即肥厚心肌内电压依赖性 K+ 通道 m RNA的表达水平显著下降 (P<0 .0 5 )。 结论 :电压依赖性 K+ 通道是心肌电活动的主要离子通道 ,心肌肥厚时电压依赖性 K+ 通道基因表达水平下降 ,可能会导致动作电位复极化时间延长 。

东莨菪碱致记忆障碍大鼠中枢电压依赖性钾通道亚型的表达

目的 研究东莨菪碱致记忆障碍大鼠模型中枢电压依赖性钾通道亚型mRNA表达的差异。方法 Morris水迷宫实验检验大鼠空间学习记忆能力 ,用RT PCR方法检测大脑皮层和海马中 5种电压依赖性钾通道Kv1 4 ,Kv1 5 ,Kv2 1,Kv4 2及Kv4 3mRNA的表达。结果 注射东莨菪碱大鼠的学习记忆能力明显下降 ,大脑皮层中Kv4 2的表达比对照组降低 2 8 8% ;海马中Kv1 4的表达升高 111 7% ,Kv2 1的表达升高 64 3 % ,而Kv4 2的表达降低3 3 9%。其它电压依赖性钾通道表达的变化不大。

人外周血淋巴细胞膜电压依赖性钾通道特性分析及试分型

目的 :研究人淋巴细胞膜电压依赖性钾〔K(v)〕通道的特性 ,为某些疾病状态下该通道特性变化提供对照。并试观察该通道是否存在不同亚型。方法 :膜片钳全细胞电流记录方法。结果 :在记录到的 39个细胞中 ,K(v)通道的激活电压为 - (40 .3± 2 .5) m V,在重复去极化状态下通道无失活 ,复极过程中通道的关闭时间为 (116 .3± 8.2 ) ms,且通道电流可被 10 mmol/ L的四乙基铵 (TEA)所阻断。结论 :人外周淋巴细胞膜可能仅具有一种〔K(v)〕通道 ,其特性与鼠 n型〔K(v)〕通道基本一致。

心肌细胞电压依赖性钾通道的研究进展

心肌细胞电压依赖性钾通道的研究进展周军，周兆年（中国科学院上海生理研究所上海２０００３１）在心肌，分布较多且研究较为深入的电压依赖性钾通道（ＶＤＰＣ）主要是短暂外向钾通道Ｉｔｏ、延迟整流钾通道ＩＫ和内向整流钾通道ＩＫ１，它们共同参与心肌动作电位的复极...

慢性孵育β淀粉样肽_(25-35)对培养大鼠海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响

目的 研究慢性孵育 β淀粉样肽2 5- 35(β AP2 5- 35)对海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响。方法 用RT PCR方法检测mRNA的表达 ,用光密度扫描法半定量测定表达变化。结果 在正常培养的海马神经元上延迟整流 (Kv2 1,Kv1 5 ) ,瞬间外向 (A型 ) (Kv4 2 ,Kv1 4 ) ,钙激活的大电导 (rSlo)钾通道亚型均有表达。β AP2 5- 353μmol·L- 1 孵育细胞 2 4h后 ,Kv2 1mRNA的表达明显上调 ,其它亚型则无显著性变化 ;β AP2 5- 35上调Kv2 1mRNA的作用主要发生在 β AP2 5- 35应用后 4 8h内 ;6 0h后Kv2 1mRNA表达水平显著下调。结论 Kv2 1转录水平的上调可能参与 β AP2 5- 35选择性地增加海马神经元上延迟整流钾电流 (IK)的作用。

IgA肾病患者肾组织内电压依赖性Ca^(2+)通道和高通透性Ca^(2+)激活钾通道mRNA的表达

目的观察IgA肾病(IgAN)患者肾组织内电压依赖性Ca2+通道(VOCC)和高通透性Ca2+激活钾通道(BKCa)mRNA表达情况,以评价VOCC和BKCa通道mRNA表达与IgAN患者肾脏病理损害的相关性。方法提取对照组(n=11)和IgAN患者(n=25)肾组织总RNA,以RT-PCR方法检测VOCC和BKCa mRNA表达量,同时将IgAN患者肾活检组织的一部分进行病理诊断和病理损害评分,病理损害评分采用Katafuchi半定量法。结果与对照组比较,IgAN患者肾组织内VOCC和BKCa mRNA的表达均呈显著增高(P<0.05);IgAN患者肾组织内VOCC mRNA表达与病理损害总积分、肾小球系膜细胞增生程度均呈正相关(r=0.6962,P<0.01;r=0.4220,P<0.05),而与肾小球系膜基质增多和肾小球硬化程度无相关性(P>0.05);IgAN患者肾组织内BKCa mRNA表达与病理损害总积分呈正相关(r=0.5582,P<0.05),而与肾小球系膜细胞增生程度、肾小球系膜基质增多以及肾小球硬化程度均无相关性(均P>0.05)。结论IgAN患者肾组织内VOCC和BKCa mRNA表达异常,两种通道蛋白的mRNA表达异常与肾小球组织病理损害总积分呈一定程度正相关,提示IgAN患者肾组织内VOCC和BKCa的表达情况,可作为IgA肾病进展与否的指标。

C_6神经胶质瘤细胞的电压依赖性钾电流

本文用全细胞膜片箝方法对大鼠传代培养C6神经胶质瘤细胞（C6细胞）的电压依赖性K+电流进行了研究。实验共记录了97个细胞，膜电位均值（SD）为-47．5±9．4mV。有7％的C6细胞没有外向K+电流。具有外向K+电流的细胞，维持电压在-70mV时K+电流的激活阈值为-36．5±5．9mV。通过对尾电流的分析其逆转电位（SD）为-84．6±4．1mV，接近于K+平衡电位。在记录的细胞中所含K+电流的成分不同，约占总数60％的细胞，其K+电流包含呈暂态的快成分和呈稳态的慢成分。约占总数33％的细胞只具有慢成分。

积分法:一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流的方法(英文)

目的 评价一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流 (Ito)的积分方法。方法 Ito的失活相可被 2指数或 3指数方程拟合。原始电流曲线下面积 (AUC)可通过指数方程积分获得。以细胞膜电容标准化后的曲线下面积表示除极化时程中钾离子的净通量 ,作为比较指标。钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞表现Ito下调 ,此数据用于验证Ito的积分分析方法的可靠性。结果 AUC可通过 3指数或2指数方程的积分公式获得 :AUC =A1τ1+A2 τ2 +A3τ3+A0 t -A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 -A3τ3e-t/τ3或AUC =A1τ1+A2 τ2 +A0 t-A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 。小鼠心室肌 5 0 %和 90 %动作电位时程分别约为 10ms和 30ms。将Ito0～ 10ms (AUC50 )和 0～ 30ms(AUC90 )的曲线下面积以细胞膜电容进行标准化。野生型鼠心肌细胞的AUC50 和AUC90 明显高于钙调磷酸酶过表达转基因鼠 ,此结果与转基因鼠心室肌细胞动作电位时程延长相一致 ,与前期发表结果一致 (钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞Ito各成分下调 )。结论 积分法是药理学中一种简便准确的分析Ito的方法。

鱼藤酮及神经肽PACAP27对PC12细胞电压依赖性钾通道亚型Kv2.1和Kv3.1b表达的影响

为探讨电压依赖性钾通道亚基Kv2.1、Kv3.1b在神经毒素鱼藤酮及神经肽PACAP27作用下可能的表达变化,本研究采用定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹分析(Westernblot)检测了PC12细胞Kv2.1、Kv3.1bmRNA及蛋白水平的表达。结果显示:(1)鱼藤酮可使Kv2.1mRNA的表达增高(P<0.05),但同时却又使Kv2.1蛋白水平的表达降低(P<0.01),PACAP不能逆转其作用(P>0.05);(2)鱼藤酮及PACAP27对Kv3.1bmRNA的表达无明显影响(P>0.05),但鱼藤酮却可使Kv3.1b蛋白水平的表达降低(P<0.05),PACAP27可以拮抗鱼藤酮导致的蛋白降低(P<0.01)。以上结果提示神经肽PACAP27及鱼藤酮对于Kv2.1、Kv3.1b表达的影响在mRNA及蛋白水平存在着差异,PACAP的保护作用可能与其在蛋白水平增加Kv3.1b的表达有关。

1mT工频磁场对小鼠皮层神经元电压依赖性钾通道的影响

为研究工频磁场在细胞水平上对神经电活动的影响,利用1mT,50Hz工频磁场照射(15min,30min)急性分离的小鼠皮层神经元,记录神经元电压依赖性钾通道电流,研究工频磁场对钾通道特性的影响.结果表明,工频磁场抑制钾通道电流,并且具有时间依赖性.另外,工频磁场减小了瞬时外向钾通道的半数激活电压,斜率因子变大,增大了延迟整流钾通道的半数激活电压,斜率因子不变.研究表明工频磁场改变了电压依赖性钾通道的特性,进一步影响神经元的一系列电活动.

木黄酮对小鼠胰岛β细胞上电压依赖性钾电流的影响

目的:研究酪氨酸激酶抑制剂木黄铜活性对胰岛β细胞中电压依赖性钾电流的影响,探讨酪氨酸激酶在胰岛β细胞中的作用.方法:原代培养小鼠胰岛β细胞,经0.1mmol/L酪氨酸激酶抑制剂木黄酮急性处理处理或者慢性处理12h后,运用全细胞电流记录的方法观察电压依赖性钾电流的改变.结果:木黄酮急性处理可显著抑制小鼠胰岛β细胞的电压依赖性钾电流.木黄酮处理12h后,小鼠胰岛β细胞的电压依赖性钾电流较对照组明显减小,降低为对照组的59.3%8.5%(P<0.01,n=6).结论:木黄酮抑制小鼠胰岛β细胞中电压依赖性钾电流,提示酪氨酸激酶活性抑制在胰岛β细胞功能损害中具有重要作用.