电压门控性氯离子通道2在血管紧张素Ⅱ促H9C2细胞肥大中的作用

目的:利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)体外复制心肌细胞H9C2肥大模型,观察电压门控性氯离子通道2(CLC-2)对心肌细胞肥大过程的影响,阐明其作用机制。方法:将H9C2分为对照(control)组、AngⅡ组、坎地沙坦(candesartan)组、坎地沙坦与AngⅡ联合应用(candesartan+AngⅡ)组。流式细胞术检测各组H9C2细胞体积的变化,RT-PCR和Western blotting检测各组细胞中CLC-2mRNA和蛋白表达的变化。结果:与对照组比较,AngⅡ组大体积细胞百分比明显增加(P<0.01),细胞中CLC-2mRNA和蛋白表达水平均增加(P<0.01);与AngⅡ组比较,candesartan+AngⅡ组大体积细胞百分比降低(P<0.01),CLC-2mRNA和蛋白表达也降低(P<0.01)。结论:AngⅡ可诱导心肌细胞H9C2肥大,其机制可能与CLC-2影响细胞内氯离子浓度有关。

心肌梗死患者同型半胱氨酸与钾离子通道、肌钙蛋白的相关性

目的分析急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)与心肌肌钙蛋白(cardiac troponin,cTn)、淋巴细胞电压门控性钾离子通道(voltage-gated potassium channel,VGPC)表达的关系。方法选取西安市第四医院收治的95例急性STEMI患者,分为血浆Hcy≤15μmol/L组(A组,44例)和血浆Hcy>15μmol/L组(B组,51例),检测两组血脂、cTnI、Hcy、淋巴细胞VGPC蛋白及其mRNA浓度,探索Hcy浓度与cTnI、淋巴细胞VGPC表达的关系。结果B组cTnI、Hcy浓度高于A组,差异有统计学意义(均P<0.05)。B组淋巴细胞VGPC蛋白表达高于A组,差异有统计学意义(t=9.80,P<0.01)。B组淋巴细胞VGPCmRNA表达高于A组,差异有统计学意义(t=15.77,P<0.01)。Hcy浓度与cTnI、淋巴细胞VGPC蛋白、mRNA浓度呈正相关(r=0.57、0.48、0.31,P<0.05)。结论急性STEMI患者血浆Hcy浓度与cTnI、淋巴细胞VGPC表达密切相关,Hcy浓度可能会影响淋巴细胞VGPC表达,进而引起血浆cTnI浓度上升。

乌头汤对痛性糖尿病周围神经病变大鼠疼痛行为及KCNQ2/5通道蛋白表达的影响

目的研究乌头汤对痛性糖尿病周围神经病变(PDPN)大鼠疼痛行为及电压门控钾离子通道(KCNQ)2/5蛋白表达的影响,探讨乌头汤治疗PDPN的作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)建立PDPN大鼠模型,给予低、中、高剂量乌头汤连续灌胃12 w,并设立正常组及模型组,观察治疗前后大鼠一般情况、体重、血糖、50%缩足反应阈值及甩尾时间;电镜下观察各组大鼠坐骨神经病理学形态变化;并取各组大鼠L4~6背根神经节和脊髓,采用Western印迹法检测其KCNQ2/5通道蛋白表达情况。结果与正常组相比,模型组血糖、50%缩足反应阈值及甩尾时间均明显升高(P<0.01);与模型组相比,乌头汤各组50%缩足反应阈值及甩尾时间均降低;与正常组相比,模型组KCNQ2、KCNQ5蛋白表达均明显降低(P<0.01);与模型组相比,乌头汤各组KCNQ2、KCNQ5蛋白相对表达量均升高。结论乌头汤对PDPN有一定的治疗作用,其作用机制可能与修复受损神经,改善神经传导功能及上调KCNQ2/5通道蛋白表达相关。

电压门控性氯离子通道与智力障碍的研究进展

电压门控性氯离子通道作为生物体内一类重要的离子通道, 有许多重要的生理功能。CLCN基因编码电压门控性氯离子通道蛋白, 该基因家族共有9个成员(CLCN1~7, CLCNKa与CLCNKb)。CLCN基因突变引起氯离子通道蛋白的异常表达, 影响神经元信号传导、离子稳态、细胞内转运以及溶酶体蛋白降解等生物学活动, 进而改变离子通道门控特性, 干扰神经系统的正常发育进程, 从而可能导致智力障碍的发生。近年来, 通过对CLCN基因家族的进一步研究发现, 该家族部分成员基因突变与智力障碍的产生关系密切。该文将对电压门控性氯离子通道和智力障碍的相关性进行综述。

抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1和抗接触蛋白相关蛋白2双抗体阳性疾病的临床特点

目的探讨血清抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI1)和抗接触蛋白相关蛋白2(Capsr2)双抗体阳性的自身免疫性疾病的临床特点。方法回顾性分析2014年7月至2017年12月在北京协和医院神经内科收治的7例血清抗LGI1和抗Caspr2双抗体阳性患者的临床资料,总结抗LGI1和抗Capsr2双抗体阳性疾病的临床特点。结果7例患者均存在中枢、周围和自主神经受累。在临床症状中,出现率最高的是失眠、肌肉颤搐、疼痛和多汗(100%);71%(5/7)伴有记忆下降或精神行为异常,57%(4/7)伴有尿便障碍,43%(3/7)伴有癫痫发作。在实验室检查中,100%(6//6)肌电图显示M波后发放电位和/或安静状态下异常自发放电;71%(5/7)脑电图显示慢波增多或基本节律变慢;71%(5/7)心电图显示窦性心动过速、电轴偏转、QT间期延长。1例在免疫治疗前因心律失常死亡,1例在治疗后因肺部感染死亡;5例临床症状明显改善,随诊1~2年,均未复发。结论抗LGI1和抗Caspr2双抗体阳性疾病的神经系统受累广泛,全面累及中枢、周围和自主神经。对于急性或亚急性起病的神经精神症状,尤其是伴有失眠、肌肉颤搐和多汗者,需要考虑本病可能。

电压门控氯离子通道7基因致综合征性耳聋相关骨硬化症机制的研究进展

电压门控氯离子通道7(chloride voltage-gated channel 7,CLCN7)基因突变可使陷窝内酸化不能,造成骨溶解障碍,从而导致以全身骨密度增高为特征的骨硬化症及溶酶体储积疾病等。而硬化骨压迫损伤神经、中耳负压及耳硬化等均可导致耳聋。该文将介绍CLCN7基因及CLCN7蛋白结构功能、骨溶解过程(包括破骨细胞简介和骨溶解机制)、骨硬化症、CLCN7基因突变致骨硬化症的机制及其治疗以及骨硬化症与综合征性耳聋,以期为临床诊断及治疗提供依据。

离子通道与玫瑰痤疮发病机制的研究进展

外界理化因素和情绪改变等会诱发玫瑰痤疮患者出现面部阵发性潮红,并伴有灼热、刺痛和瘙痒感。大量研究提示,离子通道激活后释放神经肽诱导的神经血管失调和神经源性炎症与玫瑰痤疮发病相关。本文综述近年来离子通道与玫瑰痤疮发病机制的研究进展,为以离子通道作为玫瑰痤疮的治疗靶点提供依据。

电压门控性钠离子通道2B对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆功能的作用

目的探讨阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)中,淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)在电压门控性钠离子通道2B(sodium channel-voltage-gated-beta 2B,SCN2B)介导的学习记忆认知功能改善中可能发挥的作用。方法将SCN2B基因敲除小鼠(SCN2B^(-/-))与APP基因敲除小鼠(APP^(-/-))、APP基因杂合子(APP^(+/-))以及APP基因过表达小鼠(APP^(+/+))配对杂交,用PCR基因检测技术对同窝小鼠尾组织进行基因分型,分为SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组,SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组以及SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组,C57BL/6野生型小鼠则为野生型(wild type,WT)组,每组9只。并将6月龄、12月龄、18月龄的SCN2B^(-/-)APP^(-/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/+)转基因小鼠和同龄野生型小鼠进行Morris水迷宫与Y迷宫行为学实验来检测每组之间的认知功能;取6、12、18月龄SCN2B^(-/-)APP^(-/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/+)的三种转基因小鼠和同龄野生型小鼠进行海马CA1区神经元突起的检测,同时对海马CA1区神经元的基底及远端突起数量进行定量分析。采用SPSS 21.0统计软件进行数据统计和分析。两组之间的差异用独立样本t检验比较分析,多组间比较用单因素方差分析,行为学实验结果使用重复测量方差分析进行统计。结果(1)水迷宫实验数据使用重复测量方差分析,数据显示18月龄小鼠中逃避潜伏期的组别和时间交互效应显著(F时间×组别=3.63,P<0.01)。简单效应分析发现18月龄小鼠中,与SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组和SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组小鼠比较,SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组小鼠第4~6天的逃避潜伏期明显延长[第4天:(47.00±2.00)s,(43.11±1.96)s,(41.89±3.06)s,t=-4.16,1.00,均P<0.05;第5天:(45.22±2.54)s,(36.33±2.78)s,(37.00±2.45)s,t=-7.08,-0.54,均P<0.05;第6天:(38.11±2.03)s,(34.11±2.32)s,(33.00±2.91)s,t=-3.90,0.90,均P<0.05。],目标象限停留时间缩短[(18.00±1.73)s,(25.56±1.33)s,(24.33±1.94)s;t=10.37,1.56,均P<0.05]。(2)Y-迷宫结果显示,与SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组和SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组小鼠比较,18月龄SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组小鼠新颖臂进入次数减少[(50.22±3.68)次,(57.22±3.74)次,(58.44±5.14)次;t=3.40,-0.48,均P<0.05],在新颖臂内停留时间减少[(10.89±0.62)min,(14.33±0.59)min,(13.89±0.74)min;t=8.16,0.44,均P<0.05]、在新颖臂活动距离明显减少[(37.26±2.01)m,(45.67±2.45)m,(46.11±3.27)m;t=7.81,0.91,均P<0.05]。(3)Golgi染色结果显示,与SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组和SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组小鼠比较,18月龄SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组小鼠海马神经元的顶端树突数量[顶端树突数量:(1.78±0.37)个,(3.67±0.81)个,(3.00±1.21)个;t=3.36,1.41,均P<0.05]和基底树突数量[基底树突数量:(1.11±0.50)个,(3.11±0.50)个,(2.56±0.69)个;t=4.06,1.21,均P<0.05]均显著减少。结论SCN2B敲低可以改善老年小鼠的空间学习记忆能力,而过表达APP可以部分抵消SCN2B敲低引起的小鼠认知功能改善,其机制可能是通过影响小鼠海马CA1区神经元基底及远端的突起数量而发挥作用的。

三叉神经感觉神经元5-HT1D受体调节CGRP表达和释放的机制

偏头痛是最常见的原发性头痛之一,它严重影响着患者的身心健康。5-羟色胺1(5-hydroxytryptamine 1,5-HT1)受体激动剂已被有效用于偏头痛的治疗近三十年,关于其在偏头痛中的具体作用机制一直是大家研究的重点。近年来的研究进展显示,5-HT1受体激动剂治疗偏头痛的机制主要与减少三叉神经节表达和释放降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的量有关,且该过程主要通过作用于三叉神经节感觉神经元中的5-HT1D受体,并通过电压门控性钙离子通道、有丝分裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1、TRPV1等而发挥作用。本文就该过程的可能的具体机制做一综述。

补肾活血中药复方含药血清通过调节NCC和CLC-5对高盐诱导的体外NRK-52E细胞发挥保护作用

目的:探讨补肾活血中药复方含药血清(NKABRS)通过钠氯同向转运体(NCC)和电压门控性氯离子通道5(CLC-5)对高盐诱导的体外大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E损伤、凋亡和骨代谢相关因子表达的影响及作用机制。方法:取SPF级2月龄雌性SD大鼠30只,随机分为对照组与补肾活血中药复方组,分别灌胃给药后制备对照血清和补肾活血中药复方含药血清并作用于体外培养的NRK-52E细胞,CCK-8法检测NKABRS对细胞活力的影响。体外培养的NRK-52E细胞,分为对照组、NKABRS(3%)组、NaCl(0.25 mol/L)组和NaCl+NKABRS组,CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot和RT-qPCR法检测细胞内骨桥蛋白(OPN)、NCC、CLC-5、骨形态发生蛋白7(BMP-7)和1α-羟化酶(CYP27B1)的表达,免疫荧光法检测细胞内CLC-5和NCC的蛋白含量及分布。通过RNA干扰技术敲减NRK-52E细胞NCC和CLC-5的表达,RT-qPCR检测敲减后各组细胞内BMP-7、1α-羟化酶和OPN的表达。结果:NaCl(0.25 mol/L)可抑制体外NRK-52E细胞的活力并增加其细胞凋亡率(P<0.01),同时增加细胞NCC和OPN表达,并减少CLC-5、BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01);NKABRS可增加NaCl诱导的细胞活力并降低细胞凋亡率(P<0.01),降低NCC和OPN表达,并提高CLC-5、BMP-7和1α-羟化酶的表达(P<0.01)。沉默体外培养的NRK-52E细胞内NCC基因可下调OPN表达并增加BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01),NKABRS可进一步提高BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.05);沉默细胞内CLC-5基因可增加OPN表达并减少BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01),NKABRS可抑制OPN表达并上调BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01)。结论:NKABRS可减轻高浓度NaCl引起的体外NRK-52E细胞的损伤和凋亡,其机制可能与减少NCC表达并增加CLC-5及细胞内骨代谢正向调节因子1α-羟化酶和BMP-7的表达有关。

ccd3-1改善大鼠神经病理性疼痛的作用研究

目的 观察ccd3-1对保留性坐骨神经损伤(SNI)模型所致大鼠神经病理性疼痛的效应,并初步探讨其作用机制。方法 将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和低、中、高剂量实验组,每组11只。分离大鼠坐骨神经分支,结扎并剪断腓总神经和胫神经建立SNI模型。SNI术后第7天,低、中、高剂量实验组分别鞘内给予0.1,0.3和0.9μg·kg^(-1)ccd3-1;假手术组和模型组均给予等量溶剂。用机械刺激法检测各组大鼠机械痛阈值的变化,用蛋白质印迹法检测大鼠背根神经节(DRG)细胞周期素蛋白依赖性激酶5(Cdk5)、脑衰反应调节蛋白2(CRMP2)、p-CRMP2(ser522)、N型电压门控钙离子通道(CaV2.2)总蛋白及膜蛋白的表达水平,用酶联免疫吸附法检测Cdk5激酶活性、降钙素基因相关肽(CGRP)、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化。结果 中剂量实验组、模型组和假手术组给药后2 h的机械痛阈值分别为(9.43±1.33),(2.30±0.84)和(11.37±1.75)g;Cdk5激酶活性表达分别为(217.20±37.29),(317.90±41.77)和(194.90±35.46)mU·g^(-1);p-CRMP2/CRMP2蛋白相对表达水平分别为1.03±0.18,1.82±0.34和1.07±0.12;膜/总CaV2.2蛋白水平分别为0.92±0.16,1.75±0.43和0.94±0.43;IL-6含量分别为(1 040.00±130.70),(1 388.00±116.70)和(960.9±82.06)pg·g^(-1);TNF-α含量分别为(1 812.00±292.40),(2 400.00±209.40)和(1 710.00±82.48)pg·g^(-1);CGRP含量分别为(244.80±35.70),(338.30±33.11)和(241.90±26.38)pg·g^(-1)。模型组的上述指标与假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);中剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 ccd3-1对SNI模型所致的大鼠神经病理性疼痛具有明显的改善效应,其机制可能与抑制Cdk5活性,下调CRMP2磷酸化,进而降低CaV2.2膜转运有关。

儿童Dent病CLCN5基因突变三例报告并文献复习

Dent病是一种罕见的X连锁隐性遗传性肾小管疾病，约65％的Dent病患者被检测出CLCN5基因突变，编码含746个氨基酸的电压门控性Cl-／H＋离子交换蛋白C1C-5，称之为Dent病l型；约15％的Dent病由OCRL1基因突变引起，编码磷脂酰肌醇二磷酸（PIP2），称之为Dent病2型；余下约20％Dent病尚未发现致病基因。

儿童Dent病研究进展

Dent病（Dent disease）是一种X连锁隐性遗传性疾病,于1964年由Dent等首次报道,临床特征主要是低分子蛋白尿（LWMP）、高钙尿、肾钙质沉着以及进行性肾衰竭,而其中30%～80%患者在30～50岁时发展至肾病终末阶段。近年来,随着基因诊断技术的成熟,越来越多Dent病已被报道。现将Dent病的研究进展综述如下。