长链非编码RNA钾离子电压门控通道亚家族Q成员1重叠转录本1通过靶向miR-24-3p调控人牙周膜干细胞增殖和成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)钾离子电压门控通道亚家族Q成员1重叠转录本1(KC‐NQ1OT1)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响及分子机制。方法分离培养正常牙周组织的hPDLSCs,矿化液诱导hPDLSCs成骨分化,研究下调lncRNA KCNQ1OT1、过表达miR-24-3p对hPDLSCs增殖、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、碱性磷酸酶(ALP)的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-24-3p、OCN、OPN、ALP的表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖能力;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-24-3p的靶向关系。结果在hPDLSCs成骨诱导中,lncRNA KCNQ1OT1表达水平升高,miR-24-3p表达水平降低(P<0.05);下调lncRNA KCNQ1OT1表达,抑制细胞增殖,降低OCN、OPN和ALP的mRNA与蛋白表达水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-24-3p,过表达miR-24-3p后,抑制细胞增殖,降低OCN、OPN和ALP的mRNA与蛋白表达水平(P<0.05)。抑制miR-24-3p可逆转下调lncRNA KCNQ1OT1对细胞增殖以及OCN、OPN和ALP的mRNA与蛋白表达水平的影响(P<0.05)。结论下调lncRNA KCNQ1OT1通过靶向上调miR-24-3p抑制hPDLSCs的增殖和成骨分化。

钾电压门控通道亚家族C成员3在胃癌组织中的表达及其与腹腔镜胃癌根治术患者预后的关系

目的探讨钾电压门控通道亚家族C成员3(KCNC3)在胃癌组织中的表达及其与腹腔镜胃癌根治术患者预后的关系。方法收集60例腹腔镜胃癌根治术患者的临床资料,采用免疫组织化学法检测KCNC3水平并分析其与患者临床特征和预后的关系。结果肿瘤分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结远处转移的胃癌患者的胃癌组织中KCNC3阳性表达率分别明显高于肿瘤分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结远处转移的胃癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素分析结果显示,分化程度为低分化、有淋巴结远处转移、KCNC3表达阳性均是腹腔镜胃癌根治术患者预后的独立危险因素(P﹤0.01)。结论胃癌组织中KCNC3表达与临床特征有关,KCNC3表达可作为预测腹腔镜胃癌根治术患者预后的生物标志物。

ClC-3基因过表达对小鼠骨量和骨结构的影响

目的:研究过表达电压门控氯通道家族蛋白成员3(voltage-gated chloride channel family protein 3,ClC-3)基因对小鼠骨骼的影响。方法:3月龄雄性FVB小鼠用鼠尾基因检测法确定基因型后分为2组:野生型(WT)组和ClC-3过表达(ClC-3 transgene)组,每组各8只。分别测量2组小鼠体重,右侧胫骨长度和重量。取胫骨上段和中段进行脱钙,石蜡包埋,切片,HE染色后,采用骨形态计量学分析胫骨上段松质骨的骨小梁面积百分数(percent trabecular area,%Tb.Ar)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁宽度(trabecular width,Tb.Wi)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)和胫骨中段皮质骨的骨组织总面积(total tissue area,T.Ar)、皮质骨面积(cortical area,Ct.Ar)、皮质骨面积百分数(percent cortical area,%Ct.Ar)、骨髓腔面积(marrow area,Ma.Ar)、骨髓腔面积百分数(percent marrow area,%Ma.Ar)。结果:小鼠经鼠尾基因检测后确认为野生型或ClC-3过表达型。与WT组相比,ClC-3 transgene组小鼠体重及胫骨长度重量均减小(P<0.05);松质骨的%Tb.Ar和Tb.Wi均减小(P<0.05),Tb.Sp增大(P<0.05),Tb.N的变化无统计学意义;皮质骨的T.Ar、Ct.Ar和%Ct.Ar均减小(P<0.05),%Ma.Ar增大(P<0.05),Ma.Ar的变化无统计学意义。结论:ClC-3过表达导致小鼠的皮质骨和松质骨骨量减少,骨结构变差,提示ClC-3可能参与了骨形成和/或骨吸收。

耐药肿瘤细胞中ClC-3、P-gp的表达变化及相关性

目的观察电压门控氯通道3(Cl C-3)、P-糖蛋白(P-gp)在耐药肿瘤细胞中的表达变化,并探讨其相关性。方法提取人肝癌细胞株BEL-7402及其氟尿嘧啶耐药株BEL-7402/FU、人结肠癌细胞株HCT-8及其紫杉醇耐药株HCT-8/T的总RNA和蛋白,用荧光定量PCR法检测细胞Cl C-3和多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达,Western blotting法检测细胞Cl C-3蛋白和P-gp的表达,采用线性相关分析Cl C-3蛋白和P-gp表达的相关性。结果耐药细胞BEL-7402/FU和HCT-8/T中Cl C-3、P-gp的mRNA和蛋白水平都高于相对应的非耐药细胞BEL-7402和HCT-8(P均<0.05),在耐药肿瘤细胞中,Cl C-3蛋白与P-gp表达呈正相关(r=0.98,P<0.05)。结论 Cl C-3、P-gp在耐药肿瘤细胞中呈高表达,二者表达水平呈正相关关系。

KCNC3在胃癌组织中表达的临床意义及与患者预后的关系

目的观察胃癌组织中钾电压门控通道亚家族C成员3(KCNC3)的表达状况,分析其临床意义及涉及的相关信号通路。方法应用生物信息学方法对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中胃癌的高通量测序数据进行分析,探讨KCNC3 mRNA在胃癌组织表达和预后的关系以及相关信号通路;用Western印迹法检测胃癌细胞系中KCNC3蛋白表达差异;胃癌组织芯片218例胃癌[男165例,女53例,年龄(62.8±11.2)岁]和119例对照无癌胃黏膜组织经免疫组化染色方法分析KCNC3蛋白表达与患者临床特征和预后的关系。结果KCNC3 mRNA在胃癌组织中的表达高于良性胃组织中的表达,其表达水平与胃癌临床分期成正相关。Cox回归生存分析显示,胃癌组织中KCNC3高表达(598例)的患者预后不良,与表达低和无表达组(277例)的患者比较差异有统计学意义(HR=1.69,95%CI:1.39~2.05,P<0.001)。预测通过KCNC4与MAZ基因及Notch信号通路、氧化磷酸化、γ氨基丁酸转运和电子运输链相关信号通路促进胃癌进展。KCNC3蛋白表达与mRNA水平一致,KCNC3高表达与淋巴结转移(χ^(2)=9.512,P=0.023),TNM分期(χ^(2)=12.927,P=0.024)具有相关性。多因素分析结果显示,KCNC3高表达(HR=1.911,95%CI:1.198~3.050)、TNM分期晚(HR=1.962,95%CI:1.497~2.572)、术前血癌胚抗原(CEA)水平高(HR=2.007,95%CI:1.268~3.404)是胃癌患者预后相关的风险因素(均P<0.05)。结论在胃癌发展中,KCNC3高表达可作为患者预后差的独立影响因素,可为靶向治疗提供潜在的标志物。