真武汤经I_(to)/Kv通路对心力衰竭心肌细胞电重构的影响

探讨真武汤通过瞬时外向钾电流(I_(to))/电压门控钾(Kv)通路来调节电重构以治疗心力衰竭的可能作用机制。取5只正常SD大鼠灌服真武汤颗粒剂制备含药血清,另取7只正常SD大鼠灌服等量蒸馏水制备空白血清,常规传代H9c2心肌细胞,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用24 h后,分别采取2%、4%、8%含药血清,辛伐他汀(simvastatin,SIM)及氯化钡(BaCl_(2))干预细胞24 h,设为对照组[N,10%空白血清+90%高糖培养基(DMEM-H)];模型组(M,AngⅡ+10%空白血清+90%DMEM-H);真武汤含药血清低剂量组(Z1,AngⅡ+真武汤2%含药血清+8%空白血清+90%DMEM-H);真武汤含药血清中剂量组(Z2,AngⅡ+真武汤4%含药血清组+6%空白血清+90%DMEM-H);真武汤含药血清高剂量组(Z3,AngⅡ+真武汤8%含药血清组+2%空白血清+90%DMEM-H);诱导剂组(YD,AngⅡ+SIM+10%空白血清+90%DMEM-H);抑制剂组(YZ,AngⅡ+BaCl_(2)+10%空白血清+90%DMEM-H)。ELISA检测各组细胞提取液中ANP水平,实时荧光定量PCR技术检测ANP、Kv1.4、Kv4.2、Kv4.3、DPP6、KChIP2的mRNA相对表达水平,采用Western blot法检测Kv1.4、Kv4.2、Kv4.3、DPP6、KChIP2蛋白表达,全细胞膜片钳技术检测I_(to)。结果显示,低、中、高剂量真武汤均能有效降低心肌细胞表面积。与M组比较,Z1、Z2、Z3、YD组ANP含量及mRNA水平显著下降,Kv4.2、Kv4.3、DPP6、KChIP2蛋白表达及mRNA水平升高,Kv1.4蛋白表达及mRNA水平降低,以真武汤高剂量组效果最显著;与N组比较,真武汤组I_(to)峰值电流、电流密度明显上升。表明真武汤可以通过改善Kv1.4、Kv4.2、Kv4.3、KChIP2、DPP6蛋白表达趋势及诱导I_(to)调控电压门控钾通道,调节心肌结构重构和电重构,这可能是其治疗心力衰竭及相关心律失常的机制之一。