Ⅱ型乳光牙家系细胞外基质磷酸化糖蛋白、骨涎蛋白基因的检测

目的通过对2个遗传性牙本质发育不全Ⅱ型家系的细胞外基质磷酸化糖蛋白(matrixextracellularphosphoglycoprotein,MEPE)、骨涎蛋白(BonesialoproteinⅡ,IBSP)进行突变检测,寻找Ⅱ型乳光牙致病基因,为临床诊断、基因治疗提供分子基础。方法在MEPE、IBSP基因内设计引物,经PCR和DNA测序对基因编码序列及其临近内含子进行突变检测。结果在MEPE基因发现c.1027G>A的碱基变化,该变化导致MEPE出现V330I的氨基酸变化,在IBSP发现c.797G>A的碱基变化,该变化导致IBSP出现G219R的氨基酸变化。两种变化在家系内与表型不存在一一对应关系。结论排除了MEPE、IBSP为两个DGI-Ⅱ型家系致病基因的可能,进一步缩小了候选基因范围,为最终的基因治疗提供基础。

hBMP-2基因转染骨髓基质细胞及效果检测

目的 通过观察转染hBMP 2基因在骨髓基质细胞生物学性状变化和检测hBMP 2基因在受体细胞中表达水平 ,探讨骨髓基质细胞作为hBMP 2基因受体细胞的可行性。方法 应用脂质体介导的方法将携带hBMP 2基因的重组载体PcDNA3 hBMP2导入体外培养的骨髓基质细胞中 ,用G4 18筛选获得阳性细胞 ,分别应用PCR技术、原位杂交技术和ELISA检测目的基因DNA、mRNA和蛋白质的存在与表达状况 ,并绘制细胞的生长曲线。结果 PCR方法显示实验组可见约 36 0bp的基因条带 ,原位杂交方法显示实验组约有 15～ 2 0 %的阳性细胞 ,ELISA方法显示培养第 1～ 4天时hBMP 2的含量为 37ng/3× 10 5细胞 ,培养第 11～14天和第 2 5～ 2 8天均约 5 4ng/3× 10 5细胞。转染后阳性细胞的倍增时间和生长时间没有因为目的基因的导入而改变 ,与正常培养的细胞相比差异不显著。结论 骨髓基质细胞可以作为hBMP 2基因的受体细胞 ,基因表达可分泌hBMP 2蛋白质 ,可作为骨组织工程学中的种子细胞。

电子阴道镜联合新柏氏膜式液基细胞学检测诊断宫颈人乳头瘤病毒亚临床感染和宫颈上皮内瘤变

目的探讨新柏氏膜式液基细胞学检测(TCT)和电子阴道镜(EC)检查对宫颈人乳头瘤病毒亚临床感染(SPI)和宫颈上皮内瘤变(CIN)的诊断价值及其与病理诊断的一致性。方法1125例妇女行TCT筛查,744例TCT检测结果异常或可疑宫颈病变者行EC检查,并对706例异常EC图像者或可疑病变者行镜下多点活检。结果TCT、EC和EC联合TCT检查诊断SPI、CIN和宫颈炎的灵敏度分别为88.74%、88.79%和90.63%;特异度分别为85.44%、80.38%和96.41%;阳性预测值分别为74.06%、68.90%和91.10%,阴性预测值分别为94.19%、93.61%和96.21%。两种方法联合应用的特异度和阳性预测值较单独采用一种检查明显增高(P<0.05)。结论TCT适合作为筛查宫颈病变的参考指标,联合EC对宫颈病变定位并镜下活检,结合组织病理学检查可提高对宫颈SPI和CIN的早期诊断率,是准确、可靠的诊断方法。

急性髓性白血病患者骨髓基质细胞ICAM-1的检测及临床意义

目的研究急性髓性白血病患者骨髓基质细胞ICAM-1水平的变化及临床意义。方法采用免疫组化法。对20例急性髓性白血病(AML)患者及正常对照组骨髓基质细胞ICAM-1水平进行检测。结果 该患者骨髓基质细胞ICAM-1水平高于正常对照组。ICAM-1高组与ICAM-1低组比较,前者疗效较差。结论ICAM-1水平的检测有助于判断患者的疗效。

原发性肝癌患者血清基质金属蛋白酶9和血管内皮细胞生长因子检测的临床意义

基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases-9,MMP-9）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）可促进肿瘤组织微血管的生成并增强肿瘤浸润能力,但其在原发性肝癌（PHC）血清中的水平及相关性少有报道。本研究通过测定PHC患者血清中MMP-9和VEGF的水平变化,以期探讨其与PHC的关系。

细胞外基质因子检测对肝纤维化早期诊断的预测价值

目的 :通过对多种细胞外基质因子的检测 ,创建出一套无创、简便易行的诊断肝纤维化的方法。方法 :以肝活检为肝纤维化诊断的金标准 ,同时检测肝纤维化和正常对照者血清中的透明质酸、层黏连蛋白、纤黏连蛋白、血清IV型胶原、血清III型前胶原氨基端肽和血清脯氨酸肽酶 ,并采用多元Logistic回归分析建立诊断方程。结果 :肝硬化组和慢性乙型肝炎 (重度 )以上各指标均无显著差别 ,慢性乙型肝炎 (重度 ) >慢性乙型肝炎 (中度、轻度 ) >正常对照。透明质酸、层黏连蛋白、血清IV型胶原、血清III型前胶原氨基端肽和血清脯氨酸肽酶各因素均进入回归方程。以回归方程预测的肝纤维化T值大于 0 .95者做判断肝纤维化的标准 ,结果该法诊断的灵敏度和特异度分别为 86 .7%和 80 .0 % ,符合率为 85 %。结论 :肝细胞基质透明质酸、层黏连蛋白、纤黏连蛋白、血清IV型胶原、血清III型前胶原氨基端肽和血清脯氨酸肽酶是诊断肝纤维化的敏感指标 。

人骨髓基质干细胞染色体核型与端粒酶活性的检测分析

目的分析人骨髓基质干细胞作为组织工程种子细胞,在长期体外扩增及大规模培养条件下,其染色体核型及端粒酶活性是否发生异常的改变。方法采用常规细胞染色体G显带处理方法及端粒酶活性PCR-ELISA检测法分析3例人骨髓基质干细胞样本。结果人骨髓基质干细胞体外培养至P10代,未发现染色体核型异常改变,相应的端粒酶活性也未出现异常增高。结论人骨髓基质干细胞在体外长期培养扩增的条件下,染色体核型及端粒酶活性未出现异常改变,符合种子细胞安全性的应用要求。

联合检测多种细胞外基质因子对肝纤维化的诊断

目的 创建出一套无创、简便易行的诊断肝纤维化的方法。方法 以肝活检为肝纤维化诊断的金标准 ,同时检测肝纤维化和正常对照者血清中的透明质酸、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、血清IV型胶原、血清III型前胶原氨基端肽和血清脯氨酸肽酶 (以下分别简称HA、LN、FN、IV -C、PⅢP和PLD) ,并采用多元Logistic回归分析建立诊断方程。 结果 肝硬化组和慢性乙型肝炎 (重度 )以上各指标差别均无显著性意义 ,慢性乙型肝炎 (重度 ) >慢性乙型肝炎 (中度、轻度 ) >正常对照。HA、、LN、PⅢP、IV -C、PLD各因素均进入回归方程。以回归方程预测的肝纤维化T值大于 0 95者做判断肝纤维化的标准 ,结果该法诊断的灵敏度和特异度分别为 86 7%和 80 0 % ,符合率为 85 %。结论 肝细胞基质HA、LN、PⅢP、IV -C、PLD是肝纤维化的诊断的敏感指标 。

两种方法联合检测基质金属蛋白酶-9在非小细胞肺癌中的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清和癌组织中表达的相关性及临床病理意义。方法:采用ELISA法和免疫组织化学Elivision法,检测82例NSCLC(肺癌组)和20例肺良性病变(对照组)患者手术前后血清MMP-9的水平,及手术切除肺组织标本中MMP-9蛋白的表达。分析血清与癌组织中MMP-9表达的相关性及与临床病理参数之间的关系。结果:(1)肺癌组术前血清MMP-9水平(754.48±133.98)ng/mL明显高于术后(90.78±42.29)ng/mL及对照组(80.43±25.36)ng/mL(P<0.05);(2)肺癌组术前血清MMP-9水平与肿瘤大小、病理类型、TNM分期、淋巴结转移关系密切(P<0.05);(3)MMP-9蛋白在癌组织中的阳性表达率为41.46%,与肿瘤的大小、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:MMP-9在肿瘤浸润和转移中起重要作用,肺癌组血清中MMP-9水平与癌组织中MMP-9蛋白的表达基本一致,血清MMP-9的检测可替代癌组织中的检测。

病毒性肝炎患者细胞外基质成分的检测及其与肝纤维化的关系

病毒性肝炎患者细胞外基质成分的检测及其与肝纤维化的关系上海市消化疾病研究所李继强，曾民德，范建高，邱德凯，李蓉蓉，杨川华，周永健，王自鸣，李恩灵，江绍基肝纤维化是各种细胞外基质成分（ＥＣＭ）在肝内异常增生和过度沉积所致，主要由肝活组织检查而确诊［１，...

结直肠癌患者外周血基质细胞衍生因子-1含量的检测及其临床意义

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，近年来，其发病率和病死率呈上升趋势，术后早期复发和远处转移是导致治疗失败的主要原因。研究结果表明，基质细胞衍生因子（SDF）-1及其特异性受体（CXCR4）在肿瘤侵袭转移中起重要作用，在结直肠癌中尤为明显。CXCR4和SDF-1在实体肿瘤的研究中越来越被重视，其参与肿瘤的生长、侵袭转移等。SDF-1与胃癌的转移密切相关，但结直肠癌患者血清中SDF-1的表达鲜见报道。本研究通过检测结直肠癌患者血清中SDF-1的表达，分析其与结直肠癌临床特征之间的关系，以期为结直肠癌的临床诊断、治疗和预后评估提供参考依据。

动物源细胞外基质中糖胺聚糖物质的检测方法

背景:作为每个组织和器官中的细胞分泌产物,细胞外基质凭借其独一无二的生物学特性成为了临床应用中一种独特的再生型生物材料。糖胺聚糖作为细胞外基质中的重要活性物质之一,具有诸多优良的生物学特性。目的:整理总结近年来国内外对细胞外基质中糖胺聚糖检测方法的研究进展,并对各方法进行了对比,为优化细胞外基质糖胺聚糖检测方法提供帮助和方法参考。方法:通过输入关键词“糖胺聚糖检测、细胞外基质、determination methods of glycosaminoglycan、Animal-derived extracellular matrix”,从PubMed、知网等文献搜索引擎共搜索出2 037篇相关文献,筛选并整理63篇文献,总结出常见的糖胺聚糖检测方法。根据阅读文献时总结的思路,提出基于现有提取检测糖胺聚糖方法的改进方案,并设计对比实验验证。结果与结论:糖胺聚糖对动物源细胞外基质生物学性能起着至关重要的作用,可赋予细胞外基质材料及产品优异的生物活性与促修复功能。检测材料中糖胺聚糖含量可指导细胞外基质材料的工艺优化,因此糖胺聚糖检测方法至关重要。目前糖胺聚糖的检测方法主要有高效液相色谱法、糖醛酸分析法、乙醣胺定量分析法与二甲基亚甲基蓝检测法,以上方法均存在一定的局限性。基于已有的研究成果,针对二甲基亚甲基蓝检测法中的样本消化、糖胺聚糖提取等步骤做了改进,大幅度提升了检测结果的准确度,为其他糖胺聚糖检测方法提供了思路和参考。

人膀胱癌组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达

背景与目的:基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)在恶性肿瘤的发生、浸润和转移中发挥关键作用,肿瘤细胞表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)司以诱导间质成纤维细胞合成MMPs,从而促进肿瘤的浸润和转移。本研究拟通过检测EMMPRIN在人膀胱癌组织和正常膀胱粘膜中的表达,探讨EMMPRIN在膀胱癌发生、浸润和转移中的作用。方法:应用免疫组化SP方法检测EMMPRIN在45例膀胱癌组织和9例正常膀胱粘膜中的表达,并与临床病理指标结合起来分析。结果;EMMPRIN蛋白定位于癌细胞的胞膜和胞浆,阳性率为73.3％,正常膀胱粘膜和肿瘤间质均为阴性表达。EMMPRIN在Ⅱ、Ⅲ级和术后复发组的阳性表达率分别为84.0％、84.6％和100％,高于Ⅰ级和无复发组(分别为14.3％和55.6％)(P<0.05);在淋巴结转移组的强阳性表达率(85.7％)高于无淋巴结转移组(23.7％)(P<0.05)。结论:EMMPRIN在人膀胱癌组织中过度表达,与膀胱癌的恶性程度有关,可作为判断膀胱 癌是否具备高侵袭转移潜能的指标。

人AGM区基质细胞系的建立及其生物学特性

【目的】建立人主动脉鄄性腺鄄中肾(AGM)区基质细胞系,研究其生长特性及表面标志的表达。【方法】取孕30～35d的人胚胎分离培养AGM区基质细胞,传代培养成系并检测其增殖能力,应用流式细胞术、免疫荧光方法检测其造血相关表面标志和细胞外基质蛋白成分。【结果】人AGM区基质细胞呈成纤维样形态,指数生长期倍增时间约为16h。流式细胞仪检测结果显示CD31、CD34、CD45在人AGM区基质细胞表面为阴性表达,而CD29、CD44、CD105、CD166均为阳性表达。免疫荧光检测结果显示AGM区基质细胞表达细胞外基质蛋白Tenascin、Fibronectin、Laminin及α鄄SMA。【结论】人AGM区基质细胞系呈现造血组织特异的相关分子表达特征,可以作为研究造血发生机理的模式细胞。

人脱细胞骨复合骨髓基质细胞成骨活性的实验研究

目的 研究人脱细胞骨(HAB)复合经诱导的骨髓基质细胞的实验效果,观察细胞的黏附和生长情况,并对其成骨活性进行检测。方法 用15％的过氧化氢和乙醚去除人髂骨块内的结缔组织和细胞成分,消毒后制备人脱细胞骨。取材活体或新鲜尸体的骨髓行骨髓基质细胞培养,细胞纯化后加入β-甘油酸钠,地塞米松和抗坏血酸等向成骨方向诱导,并进行对照培养。通过碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)检测来确定骨髓基质细胞的增殖和分化情况,将诱导的骨髓基质细胞浓缩后复合到制备好的脱细胞骨块内进行复合培养。8d后通过光镜和电镜等形态学观察以及生化指标检测来确定细胞的成骨活性。结果 人髂骨块内细胞清除干净,骨基质保存良好;诱导后的骨髓基质细胞ALP和OCN水平明显高于对照组(P<0.05);复合后的人脱细胞骨培养液中ALP和OCN检测呈阳性;骨髓基质细胞在HAB支架内附着紧密,生长良好。结论 人脱细胞骨复合经诱导的骨髓基质细胞在体外具有有效的成骨功能,是一种较为理想的骨组织工程材料。

基质辅助激光解析飞行质谱法检测空肠弯曲菌及李斯特菌

目的:通过VITEK MS微生物检测系统对养殖场及市售活鸡来源的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌进行激光解析飞行质谱鉴定,建立两种致病菌的质谱鉴定方法。方法:从样品中分离获得疑似的空肠弯曲菌和单核细胞性李斯特菌,经不同配比的基质液处理后进行质谱鉴定。通过分析检出菌特征峰及相对丰度差异来评价不同配比基质液对两种致病菌检测的影响。结果:空肠弯曲菌和李斯特菌对基质液配比要求具有明显差异,前者不需要经过甲酸裂解,而对三氟乙酸含量敏感,后者鉴定结果受到甲酸裂解制约。基质液含水量控制在体积分数30%可以有效避免特征峰缺失并提高检出率。结论:控制基质液的含水量、基质浓度和三氟乙酸含量可以增加空肠弯曲菌和李斯特菌的特征峰数量,增强相对丰度,提高致病菌检出率。基质液配比优化研究有助于增强食源性致病菌快速鉴定能力,有助于提高疾病预防和食源性风险监测的时效性。

脱细胞异种骨基质植入后受体外周血T淋巴细胞亚型的变化

目的 观察异种脱细胞去抗原骨基质植入后受体细胞免疫状态的变化。 方法 新西兰大耳白兔2 0只,随机分为4组,每组5只,制成股后肌袋模型,分别植入自体骨、异种脱细胞猪肋骨基质和酒精浸泡猪肋骨,设立假手术组作为对照。术后1、2、4和6周采集外周血,流式细胞仪检测外周血CD4 + 、CD8+ 和CD2 5 + T淋巴细胞的变化;分别于植入后2周和6周,将植入骨块连同周围组织取出,行组织学观察。 结果 同一时间点,外周血中CD4 +、CD8+ T淋巴细胞在酒精浸泡组显著增高,与其余组差异有统计学意义(P<0 .0 5 ) ,其余各组间差异无统计学意义(P>0 .0 5 ) ;CD2 5 + T淋巴细胞在酒精浸泡猪肋骨组2周后显著高于其它组,差异有统计学意义(P<0 .0 5 )。2周时局部组织中见炎性细胞浸润,以粒细胞为主;6周时自体骨及异种脱细胞骨基质组炎性细胞明显减少,代之以大量成纤维细胞及少量淋巴细胞,可见软骨岛形成。 结论 经脱细胞处理的异种骨基质植入后,近期对受体细胞免疫无明显影响。

兔骨髓基质细胞体外成骨分化鉴定及与煅烧骨复合培养的实验研究

目的研究兔骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的生物学特性及其与牛煅烧骨体外复合培养的生物相容性。方法将体外培养1周的兔骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化,于1、2、4周时提取RNA,采用RTPCR技术检测ALP和I型胶原mRNA表达,并对培养2周的细胞行VonKossa染色观察钙结节形成;另制备细胞煅烧骨复合物,继续培养1、7、14d后取出,扫描电镜观察及X射线衍射仪检测。结果体外诱导培养2、4周后,兔骨髓基质细胞成功表达ALT和I型胶原,VonKossa染色可见钙结节形成。扫描电镜及X射线衍射分析证实细胞在煅烧骨表面大量贴附成活,14d后细胞铺满支架表面,合成并分泌胶原纤维及钙盐。结论兔骨髓基质细胞体外可成功向成骨细胞诱导分化,成骨特性表达佳;与牛煅烧骨体外复合培养显示良好的生物相容性。

髓内脂肪细胞促骨髓基质细胞凋亡的实验研究

目的观察髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞凋亡的影响,拟阐明骨质疏松的可能发病机制。方法建立脂肪细胞与骨髓基质细胞的共培养体系,用TUNEL法与流式细胞仪检测凋亡。结果在各实验组中均可见到凋亡细胞,且随着脂肪细胞浓度增加,凋亡细胞数目增多。流式细胞仪上表现为AnnexinV+和PI-。结论髓内脂肪细胞能够诱导骨髓基质细胞凋亡。