电子转移黄素蛋白脱氢酶基因突变所致的核黄素反应性脂质沉积性肌病的临床、病理和基因特征分析

目的分析电子转移黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)突变所致的核黄素反应性脂质沉积性肌病(RR-MADD)的临床特点、肌肉病理以及血、尿质谱筛查结果和基因突变特点,旨在为早期诊断和治疗提供帮助。方法回顾性分析该院2009年至2019年确诊的15例ETFDH突变所致的脂质沉积性肌病患者的各项资料。结果15例患者平均发病年龄为(32.1±13.6)岁,均以肢体无力为首发症状,其中四肢起病者占53.3%,双下肢起病者占46.7%。所有患者的肌酶水平均升高;肌电图结果提示80%呈肌源性损害,13.3%为肌源性合并神经源性损害,6.7%结果正常。血、尿质谱的阳性检出率分别为66.7%和22.2%;基因检测提示所有患者存在ETFDH基因不同位点突变,其中单一杂合突变和复合杂合突变各占40%,纯合突变占20%。结论该病以波动性肌无力伴肌酶升高为主要表现,患者应尽快行肌肉病理检查,同时联合血、尿代谢筛查和基因检测有助于RR-MADD患者早期诊断和及时治疗。

转运蛋白和乳酸脱氢酶在乳腺癌糖酵解中的作用

有氧糖酵解途径是肿瘤细胞特征性的代谢方式。多数肿瘤细胞通过提高葡萄糖摄取率、增强糖酵解活性和产生大量乳酸,来促进肿瘤细胞的生长和转移,包括乳腺癌。乳腺癌是女性最常见的肿瘤,也是最主要的肿瘤性死亡原因。乳腺癌大多具有糖酵解活性,其中葡萄糖转运蛋白(GLUT)、单羧酸转运蛋白(MCT)和乳酸脱氢酶(LDH)等糖酵解关键酶表达水平影响乳腺癌的进展,这为改善患者的预后和肿瘤的靶向治疗提供参考。

多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的研究进展

多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MADD)又称戊二酸尿症Ⅱ型或戊二酸血症Ⅱ型,主要由电子转运黄素蛋白A(ETFA)、电子转运黄素蛋白B(ETFB)或电子转运黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)基因突变所致。患者多有不明原因慢性疲劳、肌肉无力、肌酶升高、体质量减轻、不明原因肝酶增高、肝大、恶心、呕吐、心慌、胸闷、心肌酶谱异常等症状,完善相关检查并排除其他系统疾病后行高通量基因测序可确诊该病。核黄素是治疗该病的主要药物。核黄素无效时,可选用苯扎贝特或D、L-3-羟基丁酸进行治疗。本文对MADD的遗传学背景、发病机制、临床表现、实验室检查及治疗进行综述,以期对MADD有更进一步的认识。

多酰基辅酶A脱氢缺陷症研究进展

多酰基辅酶A脱氢缺陷(multiple acyl coenzyme A dehydrogenation deficiency,MADD)是一种影响脂肪酸、氨基酸及胆碱代谢的常染色体隐性遗传病,主要由电子转运黄素蛋白(ETF)或电子转运黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)的基因突变所致。MADD主要临床表现为波动性肌无力和运动不能耐受,以肢体近端肌和颈伸肌无力为特征。由于MADD临床表型的异质性,使其早期很容易被误诊为多发性肌炎、重症肌无力、线粒体肌病等。肌肉活检和血尿生化检测有助于MADD的早期诊断,对阴性患者可进行MADD相关的基因检测。核黄素是目前MADD最有效的治疗药物。

冷活性琥珀酸脱氢酶的特性

用常规酶学方法从嗜冷酵母 (Y18)中分离纯化有催化活性的琥珀酸脱氢酶 (succinatedehydrogenase,SDH) .该酶的最适反应温度为 2 0 ℃ ,0℃仍然保持酶活性的 2 0 % ,4 0℃处理 30min酶活性损失 90 .4 % ,不同温度处理后酶在 2 80nm的紫外吸收明显改变 ,随温度升高在 2 80nm紫外吸收值增大 .这些结果表明所分离到的SDH是对温度敏感的冷活性酶 .纯化的SDH经PAGE电泳分析显示单一条带 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)测出相对分子质量为 6 0× 10 3 和 32× 10 3 的 2条带 ,分别为黄素蛋白 (flavoprotein ,FP)大亚基和铁蛋白 (iron protein ,IP)小亚基 .通过对FP的 14 91个碱基的DNA序列分析表明 (酿酒酵母FP基因全序列由 192 3个碱基组成 ) ,菌株Y18与酿酒酵母具有很高的DNA序列同源性 ;Y18与酿酒酵母FP一级结构包括酶的活性中心基本一致 ,但Y18的FP中 3个位置的氨基酸变为R基较小的氨基酸 ,并有 3个位置的氨基酸被在β 转角处出现频率较高的氨基酸所取代 (丝氨酸、天冬氨酸和苏氨酸 ) .这些结构特性可能使Y18SDH的空间结构更具柔韧性 (flexibility) ,有利于在低温条件下发挥催化功能 .

浙江省新生儿多酰基辅酶A脱氢酶缺乏症筛查及随访分析

目的:了解浙江省新生儿多酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MADD)的发病率、临床特征及基因突变特点。方法:采用串联质谱法对2009年1月至2020年12月浙江省新生儿疾病筛查中心3896789名新生儿进行遗传代谢病筛查,结合尿有机酸分析及电子转移黄素蛋白(ETF)或电子转移黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)基因检测确诊。确诊患儿进行饮食和生活管理,补充左卡尼汀、核黄素、辅酶Q10治疗,长期随访并评估患儿的生长和智力发育情况。结果:确诊MADD患儿13例,除1例为Ⅱ型,其余均为Ⅲ型(迟发型),发病率为1/299753。13例患儿中,1例死亡,4例因感染诱发以低血糖为主要表现的急性代谢失调,1例出现肌张力降低,其余患儿随访发育良好(随访时间3~45个月)。患儿初筛血C4~C18:1不同程度升高。13例患儿进行基因检测,其中ETFA基因复合杂合突变1例,ETFA基因纯合突变1例,ETFB基因复合杂合突变1例,ETFDH基因复合杂合突变8例,ETFDH基因纯合突变1例,仅检测出一个ETFDH基因突变位点1例。c.250G>A为热点突变。结论:MADD临床表现高度异质,新生儿期发病较为严重,迟发型常无明显临床症状,初筛血C4~C18:1不同程度升高,最常见基因突变为c.250G>A。

琥珀酸脱氢酶组织化学染色效果的体会

琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)是一种黄素蛋白,SDH除含黄素辅基外,还含有金属铁离子。一般含铁的酶同时还含有硫,因此SDH属铁硫黄素蛋白。是三羧酸循环中一个很重要的酶。此酶存在于所有氧呼吸的细胞,其中以骨骼肌、心肌、胃壁、肠上皮、肾曲管上皮等含量最丰富;胆囊上皮,膀胱上皮,输尿管上皮、肝等含量也较丰富。它与腺粒体内膜牢固结合,定位准确。

乙酰辅酶A合成酶/一氧化碳脱氢酶的EPR研究

来源于厌氧微生物的乙酰辅酶A合成酶/一氧化碳脱氢酶(ACS/CODH)含有金属Ni和Fe所组成的多达7个金属簇中心,能够催化CO和CO2的可逆氧化还原,并利用CO/CO2和H2作为碳源和能源合成乙酰辅酶A.近年来,随着全球能源危机和温室效应等环境问题的加重,这类金属蛋白酶的研究日益成为人们关注的热点.电子顺磁共振光谱(EPR)作为一种研究金属价态和配位结构的有效技术,从20世纪80年代开始便被广泛地应用到该酶的研究中.该文将从ACS/CODH的各个金属簇中心入手,介绍每个金属中心的结构、功能和EPR研究.

核黄素反应性脂质沉积性肌病20个家系的电子转移黄素蛋白脱氢酶基因存在热点突变

目的报道20个核黄素反应性脂质沉积性肌病（RR-LSM）患者的电子转移黄素蛋白脱氢酶（ETFDH）基因检查结果。方法对2003年1月至2010年5月我院神经科收治的24例RR—LSM患者（来自20个我国大陆北方地区RR—LSM家系，其中16个家系各有1例患者，其余4个家系各有2例发病者）的临床特点进行分析。对24例患者、11名无症状家系成员以及100名健康人行ETFDH基因检查。结果24例患者发病年龄为（27．9±9．9）岁，主要症状为四肢无力（21例，87．5％）、咀嚼困难（15例，62．5％）、颈肌无力（14例，58．3％）和肌痛（14例，58．3％）等。18例患者的血代谢筛查均提示脂酰肉碱升高，17例患者中有15例存在戊二酸尿症。我们发现19个家系存在17种ETFDH基因点突变，包括13种错义突变、2种剪切突变和2种无义突变。其中患者的C．998A〉G、c．1450T〉C、c．1703T〉C、c．1717C〉T、c．821G〉A、12．643G〉A、c．251C〉T、c．1763A〉T、c．IVS7＋2T〉C、c．IVS6＋1G〉A没有出现在100名健康人中。有9个家系存在c．770A〉G（p．Y257C）突变；5个家系存在c．1227A〉C（p．IA09F）突变。结论诸多ETFDH基因新突变提示国人RR-LSM可能存在特殊的基因突变谱，其中p．Y257C与p．L409F突变可能为我国大陆北方地区的热点突变。

脂质沉积性肌病35例的临床特点及电子转移黄素蛋白脱氢酶基因突变分析

目的探讨脂质沉积性肌病（LSM）的临床特点及电子传递黄素蛋白脱氢酶（ETFDH）基因突变所致的多种脂酰辅酶A脱氢酶缺乏症在该病中所占比例。方法收集35例经病理明确诊断的LSM患者的临床资料，并对所有患者的ETFDH基因的全部13个外显子进行PCR扩增，产物纯化后直接测序。同时对来自50名健康对照的100条染色体进行检测，以验证发现的ETFDH新突变。结果35例患者均存在不同程度的肌肉无力，包括10例存在咀嚼吞咽无力，28例存在抬头无力。在随访的32例患者中，29例患者经维生素B2及辅酶Q10治疗后症状明显改善。30例（86％）存在不同形式的ETFDH基因突变：8例为纯合突变，20例为复合杂合突变，2例患者仅存在1个杂合突变。本组患者共发现14个新突变：9个错义突变（c．3G〉C、c．152G〉A、c．191G〉A、c．349G〉C、c．433G〉C、c．949C〉A、c．1454C〉G、c．1744A〉T和c．1763A〉G），1个无义突变（c．172G〉T），2个缺失突变（c．1282_1283del和c．1773_1774del）和2个剪切位点突变（c．405＋1G〉T和c．1691-3C〉G）。所有患者中，9例存在c．250G〉A突变，6例存在c．770A〉G突变。结论LSM可表现近端肌受累为主的肢体无力。基因分析发现本组LSM患者以ETFDH突变引起的多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏为主。c．250G〉A和c．770A〉G是其最常见的突变位点。

中国南方晚发型多种酰基辅酶A脱氢酶缺陷的电子转移黄素蛋白脱氢酶基因存在高频热点突变c．250G〉A

多种酰基辅酶A脱氢酶缺陷（multiple acyl—CoA dehydrogenase deficiency，MADD；又称戊二酸尿症2型）是一种影响脂肪酸、氨基酸和胆碱代谢的常染色体隐性遗传病，是引起脂质沉积性肌病（lipid storage myopathy，LSM）的重要分子病因。MADD致病基因包括电子转移黄素蛋白A（electron transfer flavoproteinA，ETFA）、ETFB和电子转移黄素蛋白脱氢酶（electron transfer flavoprotein dehydrogenase，ETFDH）基因。

二氢吡啶对产蛋鸡脂肪转运的影响

以300日龄产蛋种用仙居鸡为试验对象,研究了不同水平的二氢吡啶对产蛋鸡脂肪转运的影响。试验结果表明饲喂添加150、300mg/kg二氢吡啶的玉米-豆粕型日粮,在90d的试验期内,使蛋鸡血清乳酸脱氢酶(LDH)活性分别降低26.40%(P<0.05)、54.76%(P<0.01);血清T3水平分别升高15.34%(P<0.05)、11.88%(P<0.05);血清中胰岛素水平分别下降40.44%(P<0.01)、54.37%(P<0.01),血清钙含量分别提高18.88%(P<0.01)、22.64%(P<0.01);蛋鸡卵黄膜上卵黄生成素受体(VTGR)含量分别提高24.45%(P>0.05)、21.53%(P>0.05)。添加150mg/kg二氢吡啶使肝脏中载脂蛋白B(apoB)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高53.96%(P<0.05)、69.61%(P<0.01),而300mg/kg二氢吡啶对肝脏中apoB含量和SOD的活性无明显变化。上述结果提示,二氢吡啶能促进蛋鸡体内脂肪动员和分解,减少脂肪在鸡体内的沉积,并有减少自由基对肝脏损害的功能。

G6PD缺乏红细胞膜Band3蛋白阴离子转运功能的改变

目的 :探讨葡萄糖 - 6 -磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏红细胞膜Band3蛋白阴离子转运功能的改变及影响因素 .方法 :利用测定细胞在等渗氯化铵溶液中的溶血t1/2 来揭示正常与异常红细胞阴离子转运功能的改变及巯基还原剂的修复 .结果 :G6PD缺乏红细胞 ,Band3蛋白阴离子转运活性较正常对照明显减弱 ,而DTT或巯基乙醇可恢复其阴离子转运活性 .结论 :氧化通过修饰G6PD缺乏红细胞膜蛋白巯基来降低阴离子转运活性 ,这可能成为红细胞溶血的一个重要机制 。

电子转移黄素蛋白脱氢酶基因新型复合杂合突变的晚发型Ⅱ型戊二酸血症1例

本文报道了一例以晚发型Ⅱ型戊二酸血症(GAⅡ)为特征的进行性肌无力为早期症状的中国青少年患者的电子转移黄素蛋白脱氢酶(EFTDH)基因的新型复合杂合突变。患者19岁开始出现进行性肌无力和肌肉萎缩,从双下肢开始,逐渐进展到上肢。曾有间歇性恶心症状,嗜睡症状不明显。血肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶均高于正常水平;肌电图提示肌源性损害。基因突变分析显示EFDTH基因的新型复合杂合突变,遂确诊为戊二酸血症。患者对核黄素和泛醌(辅酶Q10)治疗表现出良好的反应。

核黄素反应性脂质沉积性肌病20个家系的电子转移黄素蛋白脱氢酶基因存在热点争议

多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症为常染色体隐性遗传，分为3个亚型，I型与Ⅱ型均为新生儿期起病，第Ⅲ型为青少年和成年起病，常表现为核黄素反应性脂质沉积性肌病（RR～LSM）。致病基因包括电子转移黄素蛋白A基因、电子转移黄素蛋白B基因和电子转移黄素蛋白脱氢酶（ETFDH）基因。其中ETFDH基因是RR—LSM的主要致病基因。

脂质沉积性肌病35例的临床特点及电子转移黄素蛋白脱氢酶基因突变分析

为探讨脂质沉积性肌病（LSM）的临床特点及电子传递黄素蛋白脱氢酶（ETFDH）基因突变所致的多种脂酰辅酶A脱氢酶缺乏症在该病中所占比例，奚剑英（复旦大学附属华山医院神经内科）等收集35例经病理明确诊断的LSM患者的临床资料，并对所有患者的ETFDH基因的全部13个外显子进行PCR扩增，产物纯化后直接测序。

以横纹肌溶解症为首发表现的迟发型多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例

患儿男,16岁,以进行性肌无力、疼痛、活动耐力下降及茶色尿为主要表现,尿检异常,血清转氨酶、肌酸激酶和血氨等增高。串联质谱法检测血液多种酰基肉碱增高;气相色谱法检测尿液戊二酸等增高。全外显子组测序提示ETFDH基因5号外显子c.524G>A(p.R175H)和3号外显子c.250G>A(p.A84T)复合杂合突变,最终诊断多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症。予水化、碱化、核黄素、辅酶Q10及左卡尼汀等治疗,患儿肌力及各项生化指标恢复正常。对反复或进展性肌病,横纹肌溶解、急性代谢紊乱、血清肌酸激酶增高的患者,应警惕迟发型代谢性肌病,早期诊断和治疗是改善预后的关键。

乙醛脱氢酶1和ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中乙醛脱氢酶1(ALDH1)和ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取山东省泰山医院2016年1月至2018年11月行手术治疗的82例NSCLC患者的组织标本,采用免疫组织化学法检测术后新鲜癌组织及癌旁组织中ALDH1、ABCG2的表达水平。采用χ^2检验分析ALDH1、ABCG2表达与患者临床病理特征的关系,使用Pearson法分析ALDH1和ABCG2的相关性,应用Kaplan-Meier和log-rank检验分析ALDH1、ABCG2表达与患者总生存(OS)的关系,采用Cox比例风险模型分析OS的影响因素。结果NSCLC组织中ALDH1、ABCG2阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义[60.98%(50/82)比12.19%(10/82),51.22%(42/82)比3.66%(3/82),χ^2值分别为42.051、46.582,均P<0.01]。NSCLC组织中ALDH1与ABCG2表达呈正相关(r=0.451,P=0.014)。TNM分期Ⅱ~Ⅲ期患者ALDH1、ABCG2阳性表达率均高于Ⅰ期患者[70.00%(35/50)比46.88%(15/32),60.00%(30/50)比37.50%(12/32),均P<0.05],淋巴结转移患者ALDH1、ABCG2阳性表达率均高于未转移患者[75.00%(27/36)比50.00%(23/46),66.67%(24/36)比39.13%(18/46),P<0.05]。中位随访时间22.5个月,共2例患者失访,中位OS时间25.4个月,ALDH1阳性患者OS较阴性患者差(χ^2=5.124,P=0.031),ABCG2阳性患者OS较阴性患者差(χ^2=6.969,P=0.008)。多因素Cox分析显示,年龄(OR=1.241,95%CI 1.021~2.535,P=0.045)、淋巴结转移(OR=1.521,95%CI 1.102~4.281,P=0.012)、TNM分期(OR=2.104,95%CI 1.289~6.150,P=0.018)、ALDH1(OR=2.435,95%CI 1.214~8.654,P=0.001)、ABCG2(OR=1.503,95%CI 1.148~5.696,P=0.021)是NSCLC患者OS的独立影响因素。结论NSCLC组织中ALDH1、ABCG2表达水平增高,且与淋巴结转移、TNM分期相关,ALDH1、ABCG2阳性者OS率较低,二者可能成为NSCLC的预后标志物。

NADH脱氢酶（泛醌）黄素蛋白2基因突变相关白质脑病一家系报道

目的分析NADH脱氢酶（泛醌）黄素蛋白2（NDUFV2）基因突变所致白质脑病一家系兄弟2例患儿的临床及影像学特点，以提高临床医师对本病的认识及对此病的早期识别。方法收集并分析先证者及其家系成员的临床资料，分析其临床症状和头颅磁共振成像（MRI）特点，并对2例患儿进行长期随访。先后采用Saner测序、靶向捕获二代测序、全外显子组基因测序技术对该家系2例患儿及其父母进行遗传学分析。结果1．临床特点及随访：2例患儿分别于出生后4个月和1岁起病，表现为运动功能快速倒退、肌张力增高、病理征阳性，随访过程中病情相对稳定静止或逐渐好转，鸡尾酒疗法后病情有好转。2．头颅MRI特点：以深部白质受累为主，均为脑室周围长T1、长T2、液体衰减反转恢复序列（FLAIR）高信号，病灶呈团块状对称分布，病灶内信号不均匀，均伴囊性改变，弥散加权像（DWI）病灶呈团块状高信号。随访发现急性期后病灶多逐渐好转，但仍保留囊性改变，DWI呈线状或点状高信号，范围较前缩小。3．基因突变分析：先证者及其弟弟NDUFV2基因均存在复合杂合突变：c．467T〉A和c．404G〉C，其中前者遗传自父亲，后者遗传自母亲，均为国际上未报道的新突变。结论本研究报道的2例患儿与国际上已报道的12例患儿肥厚性心肌病合并脑病及Leigh综合征2种表型截然不同，以亚急性起病之后相对静止的白质脑病为临床表型，扩大了NDUF~基因的临床表型谱。明确了该白质脑病家系中的致病基因为NDUFV2基因突变，为该家庭进行准确的遗传咨询提供了可能。

核黄素反应性脂质沉积性肌病伴感觉共济失调性神经病3例报告

目的研究核黄素反应性脂质沉积性肌病伴感觉共济失调性神经病的临床、电生理、病理和基因改变特点。方法 3例男性患者来自2个家系,其中2例为兄弟,发病年龄41～43岁,主要症状是四肢肌无力,伴随双足麻木和行走不稳。查体发现四肢近端肌力下降、末梢性感觉丧失和Romberg征阳性。3例患者的血尿代谢筛查均提示存在血多种脂酰肉碱水平升高和尿戊二酸水平增高。3例患者均进行了神经电生理、肌肉活检以及电子转移黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)基因检查,2例进行腓肠神经活检。结果 3例患者的肌电图分别出现肌源性损害、可疑神经源性损害和无异常。3例患者的四肢感觉神经传导速度显著减慢或不能引出,运动神经传导速度仅在1例出现轻度减慢。3例患者的骨骼肌均可见肌纤维内脂肪滴显著增多,2例有个别破碎红纤维,2例出现小角状肌纤维。2例患者的腓肠神经均可见有髓神经纤维中-重度减少,伴随有髓神经纤维轴索变性和再生。3例患者均携带ETFDH基因的复合杂合突变,其中2兄弟为c.65A>G和c.242T>C,另1例为c.770A>G和c.1450 T>C。结论 ETFDH基因突变导致的核黄素反应性脂质沉积性肌病可以伴随感觉共济失调性神经病。