脉冲电泳不同参数对介导GFP基因转化玉米种胚效果的研究

利用脉冲电泳介导绿色荧光蛋白(GFP)基因导入玉米种胚;以GFP基因在种胚中瞬时表达作为外源基因导入种胚细胞的标记,分析了外源DNA浓度、电泳时间、电压、电流转换时间等脉冲电泳转化参数对种胚发芽率和外源基因导入率的影响。结果表明:脉冲电泳时间对种胚发芽率和外源GFP基因导入率影响最大;通过脉冲电泳可将外源基因导入胚芽细胞,其GFP基因导入种子的频率与各电泳参数均呈二次曲线关系,300μg ml外源DNA浓度、120min电泳时间、5V电压、2s电流转换时间可作为脉冲电泳介导玉米种胚转化较适宜的参数。

电泳芯片结构和芯片电泳分离操作参数的模拟、优化和实验验证

选择了L-精氨酸和L-苯丙氨酸为分离样品体系,根据电泳实验提出样品基本参数,通过模拟计算考察了进样管道宽度和进样时间对进样方差的贡献;根据分离度与分离长度拟合曲线确定电泳芯片的有效分离长度;对化学发光柱后衍生管道施加的夹流电压进行了模拟优化,得出氨基酸体系分离分析的电泳芯片设计方案和操作参数为：进样管道宽度为分离管道宽度的1/2,简单进样充样时间应大于5 s,分离管道有效分离长度为30 mm,衍生夹流比1.0～1.6.根据模拟优化结果提出了电泳芯片设计方案,采用整体浇注法制作带有柱后衍生反应器的PDMS电泳芯片,按照模拟计算提出的电压操作参数实现了精氨酸和苯丙氨酸样品体系的准确进样、芯片电泳分离和柱后衍生化学发光检测.电泳过程模拟结果和实验结果相结合,考察了柱后衍生对样品谱带展宽的影响,简单进样过程样品泄露引起的谱峰拖尾现象,并讨论了夹流进样法对减小进样方差和抑制样品泄露的贡献.

高效毛细管电泳分离检测5种喹诺酮类抗生素

采用高效毛细管电泳分离检测加替沙星、洛美沙星、依诺沙星、环丙沙星和氧氟沙星等5种喹诺酮类抗生素，探讨了电泳参数对分离结果的影响。在检测波长为268nm时，确定最佳实验条件为：电泳缓冲液为pH值为8．8的15mmol／L Na2B4O7—15mmol／LKH2PO4溶液，分离电压为8kV，高差为10cm，进样时间为20s。在最佳分离条件下，5种抗生素在9min内实现基线分离，样品浓度在2×10^-6-4×10^-6mmol／L之间。同时，在最佳分离条件下检测市售洛美沙星片中洛美沙星的质量分数为36％，回收率为109．4%。

丙烯酸阳极电泳涂料制备及电泳涂装工艺

制备了一种新型水溶性丙烯酸阳极电泳涂料,研究了45#碳钢磷化膜、电泳涂装工艺对漆膜性能的影响,结果表明:涂料黏稠透明,易溶于水,漆膜质量好,外观平整光亮。磷化膜能增加漆膜的附着力、厚度和硬度,最佳中温磷化时间为6 m in。电泳涂装最佳工艺参数为:电泳电压30 V,电泳温度25℃,电泳时间90 s,极间距为4 cm。

阴极电泳涂料更新周期的设定研究

对超出半年更新周期的阴极电泳涂料进行针对性的改善,从实际生产投槽中进行分析和印证,从根本上解决超长阴极电泳涂料更新周期的维护管理难度,解决电泳涂层外观及涂层性能方面的质量问题。

浅谈涂装电泳问题过程保障措施

对涂装前处理、电泳工艺生产过程中实际发生的问题进行梳理,着重对这些影响防腐质量的问题,分模块制定相应保障措施与解决方案。

老年大鼠心肌线粒体的蛋白质组学研究及差异蛋白的功能分析

目的建立并优化心肌线粒体蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术平台;筛查心肌线粒体中与衰老相关的蛋白质。为保证差异蛋白初筛结果的可信及下游分析的确定性,对差异蛋白进行再验证,并探讨其生物学功能。方法清洁级雄性SD大鼠随机分为新生组(2d)、成年组(10周)、老年组(12月),提取心肌线粒体,抽提全蛋白质行2-DE,对样品制备、上样量、电泳参数、不同固定方式、不同染色方法、不同离液剂等相关技术进行了优化。应用MALDI-TOF-MS鉴定图像分析出的差异蛋白点,同时进行了心肌组织ATP含量的检测。应用Western blot,RT-PCR检测不同发育阶段心肌线粒体中差异蛋白在蛋白、mRNA水平的表达情况。通过构建腺病毒载体,使用含有差异基因的腺病毒液将差异基因导入MRC-5细胞中,并获得表达,通过检测衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色、ROS和细胞周期等指标观察差异蛋白对MRC-5细胞衰老的影响。结果45％乙醇、5％乙酸的固定液对蛋白质固定效果最好;胶体考染和快速银染都是较理想的染色方法;含9M尿素的离液剂所得蛋白点最多;构建了心肌线粒体高分辨率和重复性的双向凝胶电泳图谱。图像分析示凝胶有1100个蛋白点,84个心肌线粒体蛋白表达发生改变,质谱鉴定了43个差异点。其中乙醛脱氢酶2(ALDH2)在老年组大鼠心肌线粒体中表达较成年组下调。差异蛋白多和呼吸链功能,能量代谢,物质运输和应激反应有关。新生组心肌组织ATP含量最低(15．49±1．33)μg ATP／g心肌,老年组心肌组织ATP含量较成年组下降((41．48±2．99)比(59．64±2．68)μg ATP／g心肌, (P<0．01)。能量代谢的生化检测进一步证实了蛋白质组学的结果。Western blot,RT-PCR证实ALDH2在老年组大鼠心肌线粒体中低表达。与对照组细胞相比, ALDH2基因导入后,MRC-5细胞的SA-β-gal染色阳性率下降,ROS水平较对照组下降。细胞周期未见明显改变。结论建立SD大鼠心肌线粒体蛋白质组的2-DE分析技术。鉴定SD大鼠心肌线粒体中在老年组差异表达的蛋白质,该差异蛋白为深入理解衰老的分子机制提供了有益的线索。功能学分析发现,ALDH2能延缓MRC-5细胞衰老的进程。