一种用于大小麦诱变研究的脉冲电激仪

研制了一种适用于大小麦诱变研究的脉冲电激仪 ,用于对大小麦拔节、孕穗期进行电激处理 .在细胞检查、后代植株调查中均发现变异类型 .介绍了该脉冲电激仪的组成原理、特点及使用效果 .

应用电激法在大肠杆菌中导入外源性DNA

本文报道用国产基因导入脉冲仪(LN-101型),采用高压脉冲电场,将质粒DNA和噬菌体DNA成功地转化或转导入大肠杆菌。该电场单次电压脉冲范围1.0kV—2.5kV(初电场强度2.8kV/cm—16kV/cm)、电容范围5—20μF,用质粒pUC18和受体菌株DH5α,获得10~9—10^(10)转化子/μgDNA。电场强度、电容及脉冲时间等不同的因素影响转化效率。转化率与DNA的强度呈线性关系,与受体细胞密度成正比。DNA和受体菌混合物在电激前、后的孵育时间,对转化效率影响不明显。用噬菌体M13mp 19 RF及受体菌株JM109,同样可获得较高的转化效率。

利用电激法转化小麦幼胚的研究

利用我们实验室自制的脉冲放电式电激仪HPES－3，我们将合bar基因即PAT酶（phosphinothricinacetyltransferase）基因的pDM302质粒DNA导入了一个春小麦品种（TriticumaestivumL．）“T2003”的幼胚中。经过在含有ppt（phosphinothricin）的选择培养基上筛选，得到了抗ppt的愈伤组织和再生小苗。PCR检测与DNA点杂交结果显示，外源bar基因已整合进了转基因的小麦植株中。

人参皂苷对电激痉挛所致小鼠神经失调的改善作用的研究

目的 :研究人参皂苷对电激痉挛所致小鼠神经失调的改善作用。方法 :采用电激痉挛对小鼠自发运动量和戊巴比妥钠诱发的睡眠时间的影响及人参根和茎叶皂苷对其改善作用 ,并观察两者的治疗效果。结果 :电刺激可导致小鼠自发运动量增加 (t=2 .2 8,P<0 .0 5 ) ,戊巴比妥钠诱发的睡眠时间缩短 (t=3.2 5 ,P<0 .0 1) ;人参根皂苷 (10 0 mg/ kg)可降低电激痉挛所致小鼠的自发运动量增加 (t=2 .18,P<0 .0 5 ) ,改善电激痉挛所致小鼠戊巴比妥钠诱发的睡眠 (t=4 .0 5 1,P<0 .0 1) ;人参根皂苷 (5 0 mg/ kg) ,人参茎叶皂苷均无此明显效应。结论 :人参根皂苷高剂量组有较好的中枢镇静作用 ,改善电激痉挛所致的小鼠神经失调症状。

利用电激共转化法转化橡胶树悬浮细胞的初步研究

利用电激转化法对橡胶树悬浮细胞系进行转化,初步确定卡那霉素的筛选浓度、共转化的实验条件。通过电激共转化法将NPTII、GUS、EGFP和Hb CBF1基因成功导入到橡胶树悬浮细胞并整合到基因组中。通过卡那霉素抗性筛选、GFP荧光观察和PCR验证等方法,确定外源DNA片段转化成功。共筛选得到95个抗性愈伤组织,其中9个愈伤组织经过PCR验证确定整合有外源DNA片段,1个愈伤组织共转化有NPTII和GUS基因。此结果表明电激共转化法可成功应用于橡胶树悬浮细胞转化操作。

根癌农杆菌的高效电激转化

利用电激法将双元载体质粒ＰＢＩ１２１导入根癌农杆菌ＡＧＬ－１并获得较高转化效率．探讨了不同电激条件对转化效率的影响，并检测了ＣａＭＶ３５Ｓ启动子启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中的表达．结果表明：根癌农杆菌电激转化的最适电激条件为１１ｋＶ／ｃｍ，２１．５μＦ，电场强度是影响转化效率的关键因素．当质粒ＤＮＡ浓度从０．２ｍｇ／Ｌ增加至０．６ｍｇ／Ｌ时，转化效率呈线性增加．细菌密度对转化效率也有一定影响．最高转化效率为每μｇ质粒ＤＮＡ１．７×１０５转化子．组织化学反应证实ＣａＭＶ３５Ｓ能启动ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中表达．

小麦原生质体的电激介导基因转移

从小麦品种“Ｂｏｄａｌｉｎ”胚性悬浮细胞分离出原生质体，通过电激将质粒ＰＢＣ１ＤＮＡ（携带β－葡萄糖苷酸酶（ＧＵＳ）标记基因和潮霉素抗性基因ｈｐｈ）导入原生质体。采用ＢＴＸ电激系统和ＡＳＰ电激缓冲液，最佳电激条件为３００Ｖ（７５０Ｖ／ｃｍ）和５０ｍｓ（约１０００μＦ），转化的原生质体内ＧＵＳ的活性最高；质粒ＤＮＡ的有效使用浓度为２５μｇ／ｍｌ。电激处理后，原生质体培养２～３天，ＧＵＳ基因表达最强，宜于检测其瞬时表达；牛胸腺ＤＮＡ可协助提高ＧＵＳ基因的导入效果。质粒ＰＢＣ１ＤＮＡ处理的原生质体培养于添加潮霉素的ＫＭＰ培养基。经４个月抗性筛选。

电激法介导作物种子基因转移的研究与进展

电穿孔技术是利用脉冲电场改变细胞膜的状态和通透性,达到将DNA(desoxyribose nucleic acid)导入细胞以及促使细胞发生融合的目的。该技术目前应用于细菌、真菌、植物、昆虫和哺乳动物细胞的基因转移。本文综述了电激法转基因基本原理、机制、对作物种子的效应及在作物转基因上的应用和影响因素,并对电激法进行了客观的评价与展望。

烟草脱外壁花粉的电激基因转移

以 β-葡糖苷酸酶 GUS 基因作为报告基因 ,通过瞬间表达的检测 ,比较了烟草 Nicotianatabacum L . 脱外壁花粉、未萌发与萌发花粉的电激导入效果 ,探讨了不同电激条件及启动子对外源基因瞬间表达的影响 .结果表明 :当脉冲时间常数为 13 ms时 ,导致脱外壁花粉和萌发花粉生活力下降约50 %的电场强度分别为 750 V/ cm和 12 50 V/ cm,在此条件下电激 ,二者的导入效果最好 .脱外壁花粉的GUS基因表达水平约为萌发花粉的 5倍、花粉粒的 30倍 .玉米花粉特异启动子 Zm13- 2 60 能启动 GUS基因在脱外壁花粉和萌发花粉中高效表达 ,而 Ca MV

水稻原生质体电激基因转移研究

随着禾谷类植物原生质体再生植株技术的突破,加上多种转化手段的培日趋成熟,利用基因工程将人工构建的目的基因(抗虫、抗病等基因)导入植物细胞,以较快地培育出新品种的新途径已初露曙光。电激法(Electroporation)目前是最常用,最为有效的植物基因转移技术之一。在适当的高压电脉冲作用下,原生质体细胞膜形成可修复的微孔。

烟草脱外壁花粉与完整花粉电激导入效果的比较研究

利用膜不通透的荧光染料钙黄素作为指示剂，比较了烟草脱外壁花粉与完整的未萌发花粉和萌发花粉电激导入的效果．研究了电激过程中的电场强度、脉冲持续时间、电激液的介质成分和浓度对三者的导入率及电激后花粉萌发率的影响．结果表明，从未萌发花粉、萌发花粉到脱外壁花粉，导入率逐渐升高，证实了脱外壁花粉由于摆脱了外壁的阻碍而有利于外源物质的电激导入．但电激后花粉萌发率的变化规律相反．荧光指示剂的应用便于优化选择适宜电激参数，为外源基因的导入实验提供了参考依据．

电激仪研制及高效快速电激转化大肠杆菌

高效快速进行转化实验是基因重组的一个重要环节,而电转化已成为目前转化真核及原核细胞的一种通用方法川.电转化又称电激,指活细胞受快速变化的高强度电场作用的过程.电激使得E.‘011细胞外膜产生瞬间穿孔,该电激孔可以足够大并维持一定时间使外源质粒DNA分子、蛋白质分子或其它分子进入细胞.

猪精子电激法转移基因研究初报 Ⅰ不同电激条件对猪精子活力和死亡的影响

电激法(electroporation),也有译名电脉冲刺激、电场转移基因法等。其基本原理是,生物细胞在外界的高电压,短脉冲电场作用下,细胞膜结构发生变化,使膜产生可逆性的电穿孔。此时若在细胞膜周围放置一定浓度和大小的 DNA 分子,DNA 能在细胞膜产生瞬间电穿孔的时候进入细胞,从而达到向生物细胞导入外源基因的目的。

用电激法转化一种烟草根系链霉菌试验初报

用电激法转化一种烟草根系链霉菌试验初报陈京，林沧（福建省农科院土肥所３５００１３）链霉菌及其近缘生物在生物工程学方面具有特殊的重要性，它们产生了绝大多数已知的抗生素和其它有用的代谢产物。因此，近年来人们对链霉菌分子生物学和遗传学的兴趣有增无减。链霉菌...

产黄青霉简单高效遗传转化法——电激转化法

目的研究产黄青霉(P.chrysogenum)电激转化方法,建立产黄青霉快速、高效的遗传转化方法。方法应用美国Bio-Rad电转仪,将外源DNA转化入产黄青霉菌丝中,研究了菌丝培养时间、电场强度、DNA类型等对遗传转化的影响。结果菌丝培养24h,处于旺盛生长阶段,电场强度为6000V/cm,电阻200Ω,电容20μF,环状质粒DNA较线状能获得转化效率稍高,1μg DNA获得的克隆数可达500个。结论应用电激转化方法对产黄青霉进行遗传转化属首次报道,特别是可直接将目的片段与T-DNA相融合,转化入产黄青霉中,该方法操作简单,快速高效。

应用电激法将外源基因导入小麦的研究

建立了以小麦成熟胚为外植体的组织培养系统。应用电激仪HPES-3,摸索了适合小麦种胚外源基因转化的电激条件,并以含有潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因的质粒 pLCN_(1055)DNA 直接对萌动的小麦种胚进行电激转化,在含有潮霉素(Hm)的小麦愈伤组织培养基中培养,获得了假定的转基因愈伤组织。Southern 杂交初步证明 HPT 基因已整合至小麦愈伤组织的基因组中。将这些转基因愈伤组织培养成苗还在试验之中。

一种适合于少量幼胚材料的电激转化方法

设计制作了一种适合于对少量植物细胞材料进行电激转化的装置。用该装置对小麦受精后 4～ 7d的幼胚进行电激转化获得成功。当电容为 2 0 μF、电场强度为5 0 0V·cm- 1 时 ,由Act1启动子驱动的GUS基因的瞬时表达频率为 34 .2 %,而CaMV 35S启动子控制的GFP基因的瞬时表达频率为 7.9%。

紫罗兰与桂竹香原生质体培养及电激细胞融合的研究

采用电激细胞融合的方法 ,对紫罗兰MatthiolaincanaR Br与桂竹香CheiranthuscheiriL 原生质体培养及电激细胞融合效率导入最适条件作了探讨。紫罗兰的子叶原生质体分裂初期培养最适条件 :培养基为 1 2MS。培养基组成中 ,蔗糖质量分数为 4%、甘露糖醇浓度为 0 6mol L。加入谷酰胺酶无机态氮源时 ,效果明显。次之 ,加入植物生长调节物质 1mg LBA也达到高分裂率。再者 ,添加玉米素时效果也甚好。根据原生质分离前的子叶在 5℃预处理分裂率最高 ,培养温度 2 4～ 30℃为宜。电激细胞融合 (singlepairs)产生效率高的条件为 :紫罗兰原生质体密度 1× 10个 mL ,高周波电强度 1MHz ,15 0V cm ,脉冲幅 70 μs;桂竹香原生质体密度 1× 10个 mL高周波电强度 1MHz,10 0V cm ,脉冲幅 30 μs。

盐生杜氏藻RNAi应用中的电激转化条件

采用了两种电激模式-高电场强度低电容模式下3～7kV／cm和低电场强度高电容模式下300-500V／cm转化质粒pBl221-cat；PCR扩增检测cat基因部分序列及组织化学染色法GUS检测也同时证明质粒pBl221-cat在盐生杜氏藻中瞬时表达。在此基础之上，插入pds基因的正反向重复序列，构建RNAi表达载体pBIRNAI-Dsa，电激方法转入杜氏盐藻细胞，荧光定量PCR结果表明，转入干涉载体pBIRNAI-Dsa的实验组的pds基因表达显著下降，最低达对照组的28％，表明表达受到抑制。