电穿孔导入绿色荧光蛋白基因于绵羊胎儿成纤维细胞研究

本文应用质粒pEGFP Cl带有水母绿色荧光蛋白 (GFP)基因和新霉素抗性基因 (Neor)两种报告基因转染胎儿成纤维细胞 ,进行转染条件优化。首先 ,通过成活率确定转染脉冲时程和场强 ,发现有三种组合是最适的组合 ,它们分别为 :时程 5ms,场强 1.2 5～ 1.5kV/cm ;时程 15ms时 ,场强 1.0～ 1.2 5kV/cm ;时程 2 5ms时 ,场强 0 .75～ 1.0kV/cm。接着采用场强 1.2 5kV/cm ,时程 15ms ,研究转染的温度、电导介质、细胞状态、DNA用量和细胞密度对转染效率的影响 ,结果表明电导介质为Dhanks,DNA用量为 4 μg/mL ,对数期细胞密度为 1× 10 6～ 1× 10 7个 /mL ,电击前后在 4℃下各静置 10min时 ,能获得最佳转染效率。

电穿孔导入法在家兔精子基因转移中的应用

用假阴道法采集青紫蓝家兔精液 ,经电击缓冲液清洗、适当稀释后 ,加入质粒 DNA,利用BAERON60 0 0型基因转移仪 ,选择 9组不同的电击条件对其进行电击处理 ,电击后的精子经 DNA 酶消化后作地高辛标记探针的原位杂交检测。结果显示 :( 1 )电穿孔导入法确实能使精子细胞携带上外源基因 ;( 2 )最佳的电击条件为 ,脉冲时间 50 0 ms,电压 6k