电穿孔与脂质体转染法对悬浮与贴壁细胞转染效率的影响

目的比较电穿孔与脂质体转染法对悬浮细胞株K562与贴壁细胞株Hep G2转染率的检测效果。方法选取人髓系白血病细胞株K562及人肝癌细胞株Hep G2进行研究,分别应用电穿孔与脂质体转染法进行绿色荧光质粒(p EGFP-C1)基因转染,采用荧光显微镜对PEGFP-C1转染情况进行观察,并对不同方法的转染率及细胞转染后存活率进行计算和比较。结果电穿孔转染法转染率与细胞转染后存活率优于脂质体转染法(P<0.05)。结论相比脂质体转染法,电穿孔转染法的基因转染率更高,因此该种方式值得在科研实验中进行推广。

利用电穿孔法对狂犬病病毒SRV9 Ψ区缺失株病毒的拯救及鉴定

探讨电穿孔转染法对SRV9Ψ区缺失株重组病毒的拯救及鉴定。利用电穿孔细胞转染法,将纯化的Ψ区缺失株pcDNA-NPMG-L全长质粒和pcDNA-N、pcDNA-P、pcDNA-M、pcDNA-G和pcDNA-L辅助表达质粒共转染至BHK-21细胞中,并进行盲传,借助RT-PCR、间接免疫荧光试验、Western-blot及透射电子显微镜对重组病毒进行鉴定。结果显示,重组病毒能够产生绿色荧光,透射电子显微镜观察可见典型的弹状病毒,对重组毒株与亲本毒株G蛋白进行Western-blot验证,可获得相应目的条带。结果表明,通过电穿孔细胞转染法,能成功拯救出重组病毒SRV9Ψ区缺失株,为病毒的拯救提供新的转染方法,并能有效提高转染效率,为研发新型狂犬病疫苗提供参考。

细胞骨架肌动蛋白表达质粒转染内皮细胞不同方法的比较

目的 筛选适合于人脐静脉内皮细胞的转染方法 ,为进一步转染其他目的基因打下基础。 方法 以质粒pEGFP Actin为外源性基因 ,分别用脂质体介导的转染法、DEAE 葡聚糖转染法和电穿孔转染法转染人脐静脉血管内皮细胞 (ECV 30 4 )。比较转染后的细胞死亡率和细胞转染率。 结果 (1) 3种不同方法转染后 12h ,细胞死亡率均为 4 % ,至 6 0h时DEAE 葡聚糖转染的细胞死亡率上升至 5 0 %。 (2 ) 3种方法均能使ECV 30 4获得 95 %的转染率 ,脂质体介导的转染法荧光强度强于电穿孔转染法。 结论 脂质体转染法和电穿孔转染法用于ECV 30 4 ,有较好的稳定性和重复性 。