超高灵敏度荧光显微成像技术对光敏剂细胞内分布的初步研究

目的:探讨应用基于ICCD的超高灵敏度荧光显微成像系统研究光敏剂细胞内分布的可行性。方法:传代培养内皮细胞、食管癌细胞和肺癌细胞,将不同浓度血卟啉单甲醚(HMME)与细胞共同孵育不同时间。采用荧光显微镜及ICCD组成的荧光显微成像系统采集不同浓度及不同孵育时间条件下HMME的荧光图像,并采用计算机图像处理技术进行图像增强、滤波后计算其细胞浆与细胞核的平均荧光强度比值。同时应用激光共聚焦显微镜图像采集进行对比。结果:HMME浓度为5μg/ml时,荧光显微镜采集到HMME的荧光图像;HMME浓度升高到160μg/ml,激光共聚焦显微镜获得HMME的荧光图像。两组图像的特点都为胞浆中荧光强度较高,细胞核区荧光较弱;细胞浆与细胞核的比值约为2～3∶1。结论:荧光显微镜和ICCD采集细胞内光敏剂的荧光图像灵敏度高,方法可靠、实用。HMME较多分布在细胞质中,细胞核吸收较少。

科学级冷却型CCD-荧光图像系统定量性能的鉴定

以荧光探针Hoechst33342（Ho3334）特异性标记大白鼠精子和肝细胞DNA，用科学级冷却型CCD显微荧光图像系统获取单个细胞的荧光图像，再以图像处理软件“Image-ProPlus”，分析测量各细胞的DNA相对含量和细胞核的相对面积．实验数据表明：鼠肝细胞的DNA相对含量分别为精子的DNA相对含量的2，4，8倍，符合生物学的规律，说明这套系统的定量结果是可靠的．