慢性应激通过增加齿状回的促肾上腺皮质激素释放因子减轻阿尔茨海默病样大鼠空间学习记忆损伤

目的:观察慢性应激(CS)对阿尔茨海默病(AD)样学习记忆损伤模型大鼠海马齿状回(DG)的促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其1型受体(CRFR1)的影响,并探讨CRFR1在CS引起的AD样模型大鼠空间学习和记忆能力改变中的作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照(CON)组、AD模型(AD)组和AD给予CS(AD+CS)组,每组7只。用侧脑室单次注射链脲佐菌素联合长期腹腔注射D-半乳糖(每天1次,共6周)的方法制备AD样学习记忆损伤模型大鼠;AD+CS组大鼠在D-半乳糖注射的后4周,每天随机给予一种应激原刺激。Morris水迷宫评估大鼠的空间学习和记忆能力;免疫组织化学染色观察海马Aβ_(1-42)的表达;ELISA检测DG区CRF的水平;Western blot法观察DG区CRFR1表达。之后,AD大鼠DG区注射CRFR1阻断剂R121919,观察其对CS条件下的AD样模型大鼠空间学习和记忆能力的影响。结果:与CON组比较,AD样模型大鼠的空间学习和记忆能力显著下降,且海马区Aβ_(1-42)沉积增多;而给予CS可缓解AD样模型大鼠的空间学习记忆障碍,减少海马Aβ_(1-42)沉积。与CON组比较,AD组大鼠DG区CRF水平和CRFR1表达均显著降低(P<0.05),而AD+CS大鼠DG区的CRF水平和CRFR1表达均显著高于AD组(P<0.05)。大鼠DG区微量注射R121919显著损伤CS条件下AD大鼠的空间学习和记忆能力(P<0.05)。结论:CS增加AD样模型大鼠DG区CRF水平,后者通过激活CRFR1减轻AD样模型大鼠的空间学习和记忆功能损伤。

舒芬太尼预处理对冷水束缚应激大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放因子的影响

目的:探讨舒芬太尼预处理对冷水束缚应激(WIRS)大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的影响及其与急性胃黏膜病变(AGML)的关系。方法:成年雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组(每组10只),包括正常对照组(NC组)、冷水束缚应激对照组(WC组)、舒芬太尼预处理组(SF组)和CRF阻断剂组(CB组)。AGML模型采用经典冷水束缚应激方法,水温(20±1)℃,6h后在麻醉状态下采集腹主动脉血以测定血浆CRF,并切除全胃以测定胃液pH值和观察胃溃疡指数(UI)。结果:WIRS可引起Wistar大鼠血浆CRF水平和UI显著升高(3.15±1.28vs.12.19±6.70;54.0±5.4vs.0.0±0.0,均P<0.01),胃液pH显著下降(1.58±0.16vs.2.63±0.21,P<0.01),而舒芬太尼和CRF阻断剂预处理可使WIRS大鼠血浆CRF水平和UI明显下降(6.93±4.06or3.3±1.4vs.12.2±6.7;18.8±2.6or13.3±1.9vs.54.0±5.4,均P<0.01)、胃液pH明显升高(1.95±0.08or2.47±0.23vs.1.58±0.16,均P<0.01)。结论:CRF可能参与了WIRS后AGML的病理过程;舒芬太尼预处理可有效地阻抑WIRS后AGML损害反应,可能与有效阻抑CRF的过度释放有关。

电针对急性手术创伤大鼠下丘脑及海马促肾上腺皮质激素释放因子表达的影响

目的:观察电针对急性手术创伤大鼠术后苏醒质量和下丘脑、海马促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)表达的影响,探讨大鼠下丘脑与海马CRF表达的相关性在针刺调节急性手术创伤所导致的下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能异常中的作用。方法:雄性SD大鼠20只,随机分为正常组、模型组、假电针组和电针组。肝叶切除术建立急性创伤模型。电针组电针右侧"足三里"和"三阴交",假电针组仅针刺"足三里"和"三阴交",不接电针,于造模前24h及造模后各治疗1次。观察各组大鼠麻醉苏醒时间及翻正反射情况。应用Western blot方法检测各组动物下丘脑和海马CRF的表达。结果:电针组大鼠麻醉苏醒时间显著缩短,翻正反射迅速恢复,和模型组、假电针组相比差异有统计学意义(P<0.001,P<0.01)。苏醒时间与翻正反射有相关性(r=0.646,P<0.05)。模型组大鼠下丘脑CRF表达升高,和正常组相比差异有统计学意义(P<0.05),电针组大鼠下丘脑CRF表达降低,和模型组、假电针组相比差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠海马CRF表达降低,和正常组相比差异有统计学意义(P<0.05),电针组大鼠海马CRF表达升高,和假电针组、模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。术后大鼠下丘脑CRF表达与海马CRF表达呈负相关(P<0.001),与翻正反射呈正相关(P<0.01),即Y下丘脑=0.452-0.546X海马+0.200X翻正反射。海马CRF表达与刺激方式呈负相关(P<0.001),与电针干预呈正相关(P<0.01),该表达式为Y海马=0.773-0.129X刺激方式+0.120X电针。结论:电针可缩短手术大鼠术后苏醒时间。下丘脑和海马CRF的表达与大鼠术后苏醒时间及干预方法均呈一定相关性,提示下丘脑和海马CRF在调节机体应激反应中可能起关键作用。电针可能通过激活海马CRF神经元,抑制下丘脑CRF神经元,进而调整急性手术创伤所致的大鼠HPA轴功能异常,减轻术后应激。

蓝斑核促肾上腺皮质激素释放激素系统对肠易激综合征大鼠内脏敏感性的影响

目的研究中枢蓝斑区促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)系统在IBS中的作用,探索影响其改变的分子机制。方法采用母婴分离联合出生后复合应激构建大鼠IBS模型,后采用脑核团微取样的方法获得大鼠蓝斑区的组织样本。应用实时荧光定量PCR技术检测对照组和IBS组大鼠蓝斑核内细胞癌基因Fos(c-Fos),以及CRH和其相应受体促肾上腺皮质激素释放激素受体(CRHR)1、CRHR2的mRNA表达;同时检测DNA甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测组蛋白甲基转移酶——ASH2样蛋白(ASH2L),以及SET核癌基因和MYND域2蛋白(SMYD2)的表达。统计学分析采用t检验。结果IBS组的直肠充气压低于对照组[(69.82±5.47)mmHg比(86.86±5.98)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)],c-Fos基因的mRNA水平较对照组升高(2.11±0.44比1.00±0.19),CRH的mRNA水平较对照组升高(1.99±0.35比1.00±0.13),SMYD2的蛋白表达水平较对照组上调(1.04±0.21比0.61±0.12),差异均有统计学意义(t=6.215、2.321、2.797、4.451,P均<0.05)。IBS组大鼠CRHR1、CRHR2、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA水平以及ASH2L的表达与对照组比较(分别为0.96±0.13比1.00±0.26、1.35±0.63比1.00±0.43、1.40±0.61比1.00±0.19、1.39±0.58比1.00±0.21、1.45±0.71比1.00±0.39和0.80±0.19比1.05±0.26),差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论母婴分离联合出生后复合应激通过影响蓝斑核内Crh基因的转录进而造成CRH系统和去甲肾上腺能系统应激调控网络的激活,导致大鼠内脏敏感性增加。Crh基因转录异常可能与SMYD2介导的组蛋白H3K36的甲基化有密切关系,而与DNA的甲基化修饰无关。

柴胡疏肝散及其提取物对慢性应激大鼠下丘脑CRH含量的影响

目的:探讨柴胡疏肝散及其提取物对大鼠下丘脑CRH的影响。方法:采用慢性多相性应激模型,放免方法检测下丘脑CRH含量。结果:与正常组相比,模型组下丘脑含量显著升高;而水提醇沉液和原方高剂量组可下调下丘脑CRH含量。结论:柴胡疏肝散、水提醇沉液可能通过调节丘脑CRH含量调节HPA起抗抑郁作用。

逍遥散干预慢性应激焦虑状态概述

慢性应激焦虑状态的病理机制与肝失疏泄、气郁不畅密切相关。逍遥散是疏肝解郁的经典方,临床上多采用逍遥散原方或化裁方来改善焦虑、抑郁等情绪障碍。逍遥散的作用机制可能是通过调节海马、杏仁核、下丘脑-垂体-肾上腺轴、免疫功能紊乱来发挥疏肝解郁的功效,其中杏仁核中的促肾上腺皮质激素释放因子1(CRF1)受体及受体后信号通路介导了慢性应激损伤的作用机制,用其来探讨逍遥散的作用机制具有可行性,有助于明确逍遥散改善慢性应激焦虑状态的作用机制。

大脑中动脉栓塞后慢性不可预见性应激大鼠下丘脑肿瘤坏死因子α及其信号通路的激活

本研究旨在探讨大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)后慢性不可预见性应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)状态下,下丘脑细胞因子及其调控通路蛋白表达的变化。成年Sprague Dawley(SD)大鼠经左侧MCAO后,再经过慢性不可预见的温和应激,建立脑卒中后抑郁模型。通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测下丘脑细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factors-α,TNF-α)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing factor,CRF)及细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokines signaling 3,SOCS3)mRNA表达水平,用ELISA检测下丘脑TNF-α和CRF蛋白水平,用Western blot检测下丘脑SOCS3和磷酸化的信号转导和转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的蛋白水平。结果显示,与对照组相比,MCAO+CUMS组大鼠下丘脑CRF、TNF-α和SOCS3 mRNA水平明显升高,CRF、TNF-α、SOCS3和pSTAT3的蛋白水平显著上调。Spearman相关性分析结果显示,CRF与TNF-α、TNF-α与SOCS3及SOCS3与pSTAT3之间有相关性。以上结果提示,缺血性脑卒中合并慢性应激所导致的抑郁状态下,下丘脑-垂体-肾上腺轴活性上调,可能受到下丘脑细胞因子转导通路的调控,其中包括JAK/STAT3信号通路。

慢性应激肝郁模型大鼠蓝斑CRF、c-fos的表达及逍遥散的干预作用

目的观察慢性应激状态下大鼠一般状况,血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)浓度,蓝斑(LC)中促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、即刻早期基因c-fos的表达,以及逍遥散对其的干预效应。方法将18只SD健康雄性大鼠随机分为正常对照、模型、逍遥散治疗组,每组6只。采用束缚的方法造模,观察大鼠行为、饮食、排便的变化;造模21d后取出蓝斑,用ELISA法检测血清中CRH浓度,Real-timePCR检测蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA的表达。结果模型组大鼠行为、排便、饮食出现明显异常;与正常对照组比较,模型组大鼠血清CRH浓度升高,蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA表达均上调(P<0.01);与模型组比较,逍遥散组大鼠血清CRH浓度下降,蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA表达下调(P<0.01);逍遥散组较对照组CRH浓度升高、CRFmRNA和c-fosmRNA表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论神经递质CRF介导了慢性束缚应激中LC的激活,转录因子c-fos亦参与了其调控,而逍遥散则可以有效地进行干预,下调其过表达。

阿片肽系统对创伤应激调控作用的研究进展

创伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）是急危重症之一，病死率和致残率高。TBI即刻促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropinreleasinghormone，CRH）和去甲肾上腺素等应激相关性激素大量释放是主要病理机制之一。

电针通过抑制下丘脑细胞外调节蛋白激酶5信号通路改善手术创伤大鼠脾脏自然杀伤细胞的功能

目的:观察下丘脑内细胞外调节蛋白激酶(ERK)5信号通路在电针改善手术创伤大鼠脾脏自然杀伤(NK)细胞功能中的作用及机制。方法:SD雄性大鼠随机分为对照组、创伤组、创伤+电针组、创伤+未电针组、创伤+低剂量BIX 02188组、创伤+高剂量BIX 02188组,每组6只。采用手术创伤模型,创伤+电针组选取双侧"足三里"穴,术后立刻电针,创伤+未电针组针刺双侧"足三里"穴,但不接电针仪,均持续30min,创伤+低剂量BIX 02188组、创伤+高剂量BIX 02188组于造模前1周进行侧脑室埋管,手术创伤前30min注射BIX 02188。免疫组化法和Western blot法观察下丘脑ERK 5磷酸化水平和蛋白表达,及促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)蛋白表达,乳酸脱氢酶释放法和Real-time PCR法检测脾脏NK细胞杀伤功能及穿孔素(Perforin)和颗粒酶B(Granzyme B)的mRNA表达。结果:创伤组大鼠下丘脑内ERK 5信号通路显著激活,ERK 5磷酸化水平及蛋白表达均升高(P<0.01,P<0.05),电针及ERK 5抑制剂均可抑制ERK 5的磷酸化(P<0.05,P<0.01);手术创伤后,脾细胞Perforin及Granzyme B的mRNA明显下调,脾脏NK细胞的杀伤活力下降(P<0.01,P<0.05),电针治疗可增加Perforin及Granzyme B的基因表达,进而提高脾脏NK细胞的杀伤活力(P<0.05);下丘脑内CRF的表达在创伤后明显上升(P<0.01),给予ERK 5抑制剂或电针均可下调其表达(P<0.01)。结论:电针改善手术创伤引起的脾脏NK细胞杀伤活力降低的机制之一可能是下调下丘脑内ERK 5信号通路的激活,减少CRF的产生,从而抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴激活。

青少年期创伤性应激对大鼠成年后情绪和学习记忆的影响

目的:研究青少年期创伤性应激经历对大鼠成年后HPA轴功能、情绪和学习记忆能力的影响。方法:健康青少年雄性Wistar大鼠随机分为对照组(control group)和应激组(stress group),每组12只。采用不可回避的足底电击建立创伤性应激模型。采用旷场实验、高架十字迷宫和水迷宫评估大鼠行为学改变;地塞米松抑制试验测试HPA功能;放射免疫法测定血浆皮质酮含量;免疫组化和Western blot检测海马促肾上腺皮质激素释放激素1型受体(CRF1)表达水平。结果:与对照组相比,应激组出现明显的焦虑样行为和对环境的探索性降低,表现为在旷场实验中,中央格停留时间和直立次数均减少(P<0.05);高架十字迷宫实验中,开放臂停留时间减少和粪粒数增加(P<0.05);学习能力降低,表现为第二天水迷宫实验逃离潜伏期显著延长(P<0.05)。应激组HPA轴功能失调,血浆皮质酮水平不被地塞米松抑制。与对照组相比,应激组大鼠海马CRF1受体表达下调(P<0.05)。结论:青少年期经历的创伤性应激导致焦虑水平升高、学习与记忆功能受损,引发HPA轴功能失调。其机制之一可能与海马CRF1表达下调有关。这可能是个体成年后更易出现应激相关的情绪与认知障碍的原因。

头穴丛刺对抑郁模型大鼠下丘脑CRF表达的影响

目的:观察头穴丛刺对慢性应激刺激模型大鼠下丘脑CRF的影响。方法:将64只3月龄健康雄性Wister大鼠,随机分为正常对照组、模型组、头穴丛刺组、盐酸氟西汀组,每组16只,用慢性不可预见性轻度刺激结合孤养法造模14天,头穴丛刺组进行针刺治疗,选"百会"、"神庭"及"四神聪",留针20 min,每日1次,连续针刺14天;盐酸氟西汀组给予盐酸氟西汀1 mg/kg每日1次,连续给药14天。分别在针刺治疗前及末次治疗后对各组大鼠进行开野实验,末次治疗结束后24 h将大鼠处死,应用免疫组化法测定各组大鼠下丘脑CRF阳性细胞比,RT-PCR法检测下丘脑CRFmRNA表达。结果:治疗前模型组、头穴丛刺组、盐酸氟西汀组大鼠开野实验评分明显低于正常对照组,治疗后头穴丛刺组、盐酸氟西汀组无明显差别(P>0.05),皆明显高于模型组(P<0.05);治疗后模型组大鼠下丘脑CRF的表达明显高于对照组、头穴丛刺组、盐酸氟西汀组(P<0.05),头穴丛刺组与盐酸氟西汀组无明显差别(P>0.05)。结论:头穴丛刺疗法可以纠正慢性应激刺激模型大鼠行为学改变,抑制慢性应激刺激模型大鼠下丘脑CRF的表达,效果接近阳性对照组盐酸氟西汀治疗。

缺血性脑损伤大鼠对应激反应性的实验研究

目的探讨缺血性脑损伤大鼠对轻度束缚应激的反应性。方法通过阻断大脑中动脉(MCAO)建立缺血性脑损伤大鼠模型,术后第5周开始行2周束缚应激,应激结束后处死大鼠,脑组织HE染色明确缺血灶,免疫组化法检测大鼠脑内Fos和促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)蛋白表达水平。结果单纯MCAO组(M)和MCAO+应激组(MR)大鼠可见明确缺血灶,损伤侧大脑半球萎缩和脑室扩大,光镜观察缺血区大量核固缩,坏死灶周边神经胶质细胞增生;MR组大鼠下丘脑室旁核、杏仁核中央亚核及终纹床核Fos和CRF阳性神经元明显多于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺血性脑损伤后大鼠脑内Fos和CRF蛋白表达对应激的反应性增强,CRF通过前反馈机制持续激活下丘脑-垂体-肾上腺轴并导致抑郁可能是脑卒中后抑郁发生的主要机制之一。