塑料切片与电镜半薄切片多色性染色方法

塑料切片与电镜半薄切片多色性染色方法郭淑华李海伦（陕西省人民医院电镜室，西安７１００６８）多年来我室用缓冲液配制异染性甲苯胺兰近沸点染色，操作方法简单快速，不同的组织表现为多色性，细胞结构细致清晰。不但弥补了超薄切片范围局限的不足；而且在科研中应用此...

提高电镜超薄切片染色效率的装置

随着电镜技术应用的普及．利用电镜观察肾小球超微结构进行临床诊断的样品日益增多。传统的超薄切片染色方法不能1次进行大批量染色操作（费时、费工，且易造成污染）。为此，笔者对传统的电镜染色法作了探索和改进，最终做出了制作简便、染色量大、染色效果稳定的电镜超薄切片染色装置。

电镜超薄切片制作过程中包埋技术的改进

组织包埋是电镜制样过程的重要环节.实践中发现,传统的包埋方法制作的电镜样品,易导致某些组织出现空洞或厚薄不均等现象,影响电镜观察.我们以LR white(芳香族交联丙烯酸)和PDAP(苯二甲酸二丙烯酯)替代常规用Epon812(环氧树脂812)包埋组织,对包埋技术进行了改进,效果很好.

透射电镜超薄切片前期载网清洗方法

在透射电镜生物样品的制备与观察中，要经过取材、固定、漂洗、脱水、修块、定位、超薄切片、染色等一系列繁复的程序，所有步骤环环相扣，缺一不可。超薄切片需被捞取在特殊的载网上才可进行透射电镜观察，而制作载网的材料一般为铜，因此也将载网称为铜网。还有其他多种特殊标记的载网，

微型振荡器在电镜超薄切片样品制备技术中的应用研究

介绍了一种全新的电子显微镜下超薄切片样品制备方法 .制样过程 (固定——浸透 )全部在微型振荡器上完成 ,制样时间仅用 4～ 6h即可 ,比常规制样时间 (1 2～ 1 5 h) ,缩短近一半 .同时 ,试剂用量只需 0 .5 ml即可 ,比常规用量 (5 ml) 。

电镜半薄切片的微波辐射快速HE染色法

微波炉是一种高频的微波辐射加热的新型仪器,有加热快速,穿透力强的特点,已被越来越广泛地用于病理实验室工作。我们将其用于电镜半薄切片的HE染色,取得了满意的效果。材料与方法 1.1 材料①微波炉(MW)WB-750型,2450MHz,功率750W,电脑控制温度和时间。②环氧树脂Epon812包埋的组织和细胞。

植物透射电镜样品制备技术的改进

应用植物透射电镜样品制备技术的改进方法对双子叶植物、单子叶植物营养器官进行电子显微镜超薄切片制备效果的实验研究,目的是找到一种比常规制备方法更简便、更经济、效果更好的制备技术。实验结果表明:通过对常规制备技术两个方面的改良,可以保存较多的微细结构而不被破坏,清晰度较高,并能保持其原有的形态;制备方法也简便、经济。

体外培养细胞原位包埋电镜样品的制作方法

目的:探讨一种快速简单的单层细胞原位包埋及电镜样品的制作方法,避免离心法等对细胞造成伤害以致影响电镜下细胞结构的观察。方法:将细胞培养在盖玻片上并进行原位包埋,通过置入液氮冷却的方式迅速彻底分离树脂与玻片上的细胞层。结果:此方法所得细胞的超微结构清晰,损伤明显减少。结论:体外培养细胞原位包埋电镜样品的制作方法快速简单,对细胞伤害少,完全可以满足科研和临床病理诊断的需要。

三维电镜在脑干耳蜗核神经元形态学研究中的应用

目的·探索利用新型三维电子显微成像的方法对小鼠耳蜗核组织开展跨尺度神经解剖学和连接组学研究的可行性。方法·成年CBA/Ca小鼠(2月龄)脑组织经固定、解剖后,获取其中完整耳蜗核组织,并对该组织行重金属块染(还原性锇酸扩增法)、梯度乙醇和无水丙酮脱水、低黏度树脂包埋。通过X射线显微成像技术对耳蜗核组织进行断层扫描成像及三维重构,并对其染色效果进行评估,再根据听神经特异性分布对其目标区域进行定位。采用扫描电镜快速获得该组织的低分辨预扫图像,并与X射线显微成像进行比对,确定目标层面后使用连续切片扫描电镜采集目标区域的图像进行三维重构,并对该目标区域丛细胞及其表面的突触等超微结构进行追踪标记和重构分析。结果·成功制备了CBA/Ca小鼠完整耳蜗核的三维电镜样品。X射线显微成像采集并重构了具有细胞分辨率的耳蜗核立体结构,实现了耳蜗核各亚区的解剖定位。连续切片扫描电镜成功采集耳蜗核目标区域丛细胞的三维电镜数据,完成了丛细胞胞体上根蕾状突触和其他非听神经来源突触的追踪、标记和重构。三维电镜的数据分析显示,投射至目标丛细胞表面的听神经根蕾状突触有5个,共形成了348个突触活跃区,而非听神经来源的突触有97个。结论·利用锇酸块染、树脂包埋等方法对成年小鼠完整耳蜗核进行三维电镜样品的制备具有可行性。X射线显微成像可用于耳蜗核组织各亚区以及目标区域的快速和精确定位,且所采集的三维电镜数据可用于耳蜗核神经元的形态学以及突触连接方式的研究。

防止超薄切片染色污染的简易方法

电镜超薄切片通常用醋酸铀和柠檬酸铅进行双重电子染色。染色常会因铅液接触空气中的二氧化碳而产生微细的碳酸铅(黑色)沉淀,直接影响超微结构的观察,导致染色失败。为避免这一缺点,我们采用防污染简易方法,取得令人满意的结果。下面介绍具体做法:选用密闭的操作箱。

外源阿魏酸对离体培养棉纤维生长发育的影响

通过建立新疆陆地棉品种‘新陆早36号’的体外胚珠培养棉纤维体系,利用图像数字化处理技术和电镜切片观察,探索体外培养条件下不同浓度外源阿魏酸(FA)对棉纤维生长发育的影响。结果表明:(1)随着培养时间的延长,培养棉胚珠的体积、棉纤维长度、纤维团生长面积和纤维细胞壁厚度均显著增加。(2)FA的影响在培养15 d后达到显著水平,25和50μmol/L外源FA对离体培养棉纤维的伸长和纤维细胞壁的增厚都具有促进作用,但不同浓度下纤维伸长和细胞壁增厚的程度不同。(3)各处理培养25 d后,25μmol/L FA处理的棉纤维长度比对照极显著增加14.2%,纤维团生长面积比对照极显著增加18%;50μmol/L FA处理的棉纤维细胞壁厚度比对照极显著增加61.7%。

绵羊肺腺瘤病毒内蒙古株的分离与观察

以内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺组织 4例和 3月龄绵羊胎肺 2例作为材料 ,对胎肺细胞进行了原代培养并接种绵羊肺腺瘤病毒悬液 ,进行了绵羊肺腺瘤病毒 (JSRV)的分离 ,同时采用电镜负染色技术和超薄切片透射电镜技术对上述样品进行了观察。结果表明 ,自然感染绵羊肺腺瘤病的 4例病肺组织中都有散在的病毒粒子 ,其直径为 10 0～ 12 5nm ,接种病毒悬液的胎肺细胞从第 2代到第 9代均出现细胞病变 ,但对绵羊胎肺培养的病毒悬液电镜负染色观察未发现典型的病毒粒子 。

潜伏

拍摄时间：2000年10月18日;样品类型：体外培养昆虫细胞; 制作方法：常规电镜超薄切片方法;仪器型号：Philips CM120 作品描述：多年前曾应用透射电镜观察按常规方法制作的体外培养细胞超薄切片样品中检出经重组Bacmid转染的昆虫细胞Sf9细胞表面有大量成簇排列密集芽生成熟的杆状病毒科（Baculoviridae）病毒粒子（左图Χ45 000）。

美洲黑石斑迟缓爱德华氏菌分离、鉴定及致病性研究

养殖美洲黑石斑(Centropristis striata)发生以“内脏白点”为主要临床症状的暴发性死亡,为明确美洲黑石斑患病原因,对患病鱼进行了病原分离、鉴定及致病性研究,以期为防治美洲黑石斑迟缓爱德华氏菌病提供参考依据。患病的美洲黑石斑的症状主要表现为鳃和内脏组织如脾脏及肾脏上布满白点。从患病鱼的病灶处分离纯化到一株优势致病菌株(ZS201807),通过对该菌株形态特征、生理生化特性和16S rDNA基因测序等综合分析,鉴定该菌为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)。人工感染实验证实此菌株可引起健康美洲黑石斑发病并表现出与自然发病相似的症状。利用组织切片和电镜超薄切片技术对患病美洲黑石斑鱼的肝脏、脾脏、鳃丝等6种组织进行组织病理学分析。组织病理结果显示,脾和肾是感染较严重的主要靶器官,脾脏组织内大量红细胞浸润,出现严重瘀血;鳃丝毛细血管扩张;肾小管管腔狭窄,肾小球肿大,上皮细胞肿胀,细胞空泡化。超微病理显示,病鱼脾脏和头肾组织有大量杆状细菌积聚。药敏试验发现该菌对环丙沙星(5μg/片)、四环素(30μg/片)、恩诺沙星(5μg/片)等14种药物敏感;对青霉素(10 U/片)、阿奇霉素(15μg/片)、丁胺卡那(30μg/片)等13种药物耐受。证实此次养殖美洲黑石斑发病死亡的病原菌为迟缓爱德华氏菌。

转基因饲料对雄性小鼠生殖系统影响的研究

目的:研究转基因饲料对雄性小鼠睾丸组织学结构的影响。方法:健康状况良好的昆明小鼠喂养30 d后将生殖器官成熟的雄性小鼠分为5组,分别为对照组两组(下面简称普I(30 d)、普Ⅱ(60 d)),实验组为转基因I、转基因Ⅱ、转基因Ⅲ(下面简称为转I(30 d)、转Ⅱ(30 d)、转Ⅲ(60 d))三组。对照组喂食非转基因饲料,实验组喂食转基因饲料。超薄切片透射电镜观察对照组和实验组内各小鼠的睾丸超微结构。结果:实验结果表明对照组超微结构基本正常,而实验组睾丸组织结构有一定程度的受损,电镜切片显示生殖细胞内的高尔基体、线粒体、内质网均呈现不同程度的损伤。

用冰冻蚀刻法研究上皮细胞的紧密连接和缝隙连接

我们对小鼠小肠、胃、肝、肾及人体肝组织进行冰冻蚀刻复型,用其复型膜进行电镜观察,并结合透射电镜超薄切片的观察进行分析。在超薄切片中我们看到的紧密连接是两相邻细胞质膜外叶层相触合而成的一条浓线,经高倍放大后,实际上能看到的是一条呈点状的不连续的虚线。