甾体药物化学的新进展——甾体受体的研究近况

从近代分子水平研究的基础上，对甾体受体的基本结构与键合区域、甾体受体拮抗剂与激动剂及其作用机制等甾体药物化学方面的进展进行了综述。并介绍了开环甾体维生素Ｄ的结构与活性，以及用于某些肿瘤检测、能与雌激素受体键合的显影剂。

甾体激素受体超家族的基因调控机制

甾体激素受体超家族是一类基因反式作用因子，对ＲＮＡ聚合酶Ⅱ转录的某些蛋白质基因和ＲＮＡ聚合酶Ⅰ转录的核糖体ＲＮＡ基因均有正或负的转录调节作用．超家族对ＲＮＡｐｏｌⅡ转录的基因调控的机理包括受体激活，相关蛋白解离，磷酸化，同源／异源二聚化，核转位，与正／负激素应答元件及相应转录蛋白作用，最终激活或抑制特异靶基因的转录．甾体激素对ＲＮＡｐｏｌⅠ转录的基因的调节作用以及超家族中的经典受体和孤儿受体非配合的激活机制是目前研究的热点．

甾体激素受体功能特异性的结构基础

甾体激素受体家族包括雌激素受体、雄激素受体等五个亚家族 ,在机体组织细胞的生长分化、发育生殖、内环境稳定等几乎所有生理过程中都起着重要的作用。研究甾体激素受体亚家族的特异性可以加深对该家族功能的理解 ,并且具有潜在的临床应用价值。采用进化踪迹方法对该家族的配体结合域 (LBD)进行分析 ,探讨了决定亚家族功能特异性的结构基础。结果表明 ,甾体激素受体的各亚家族可能同相应的内源性配体存在着共进化关系 ;配体结合处的踪迹残基决定了受体-配体间的氢键作用和疏水相互作用模式并导致了亚家族的配体结合特异性。上述结论可用于甾体激素受体的配体结合特异性的改造以及新型组织选择性配体 (如选择性雌激素受体调节剂 ,SERM)

甾体激素受体辅激活子-2对子宫内膜异位症患者孕酮抵抗的作用研究

目的 通过检测子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）患者异位内膜和正常子宫内膜中孕酮受体（progesterone receptor,PR）和甾体激素受体辅激活子-2（steroid receptor coactivator-2,SRC-2）的表达,探讨SRC-2对EMs患者孕酮抵抗的作用.方法 随机选取2013年6月～ 2014年5月间在山东省交通医院妇产科行腹腔镜或开腹手术的EMs患者45例（异位内膜组）和35例因子宫肌瘤行子宫切除术患者非瘤区对照子宫内膜组织（对照内膜组）.采用反转录PCR（reverse transcription-PCR,RT-PCR）和免疫组化检测异位内膜组和对照内膜组中PR和SRC-2的表达,并进行比较.结果 PR和SRC-2在异位内膜组中的表达显著低于对照内膜组（P＜0.05）;对照内膜组中PR和SRC-2的表达在增生期增强,并随着分泌期逐渐减弱,在整个月经周期中存在周期性变化,有统计学差异（P＜0.05）;异位内膜组中PR和SRC-2的表达在增殖期和分泌期比较,无周期性变化,差异无统计学意义.结论 SRC-2可以调控PR基因的转录反应,促进靶基因的转录和蛋白表达,其表达下降可导致子宫内膜PR的表达改变,从而显著消减子宫PR对孕酮的反应性.

多囊卵巢综合征子宫内膜甾体激素受体表达与临床特征研究

目的检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜雌激素α、β受体(ERα、β)、孕激素受体(PR)、雄激素受体(AR)的表达,探讨其与PCOS患者性激素、血脂、胰岛素抵抗指数(HOMA)、体重指数(BMI)等临床特征的关系。方法选取PCOS患者31例作为实验组,输卵管性不孕患者20例作为对照组。对比PCOS患者与对照组年龄、BMI、血脂、性激素、HOMA和子宫内膜甾体激素受体表达情况。且PCOS患者按照肥胖与否、胰岛素抵抗正常与否和睾酮高低分组。采用免疫组化方法检测各组子宫内膜ERα、ERβ、PR、AR表达。通过相关性分析PCOS组子宫内膜ERα、ERβ、PR、AR与血清雌激素水平的关系。结果 PCOS组和对照组年龄、BMI、血脂差异无统计学意义;PCOS组睾酮、雌激素、HOMA-IR高于对照组。PCOS组子宫内膜腺体及间质的ERα、ERβ、PR、AR表达均高于对照组;但两组的ERα/ERβ表达差异无统计学意义。PCOS高睾酮组与正常睾酮组除AR外其余各甾体激素受体在子宫内膜腺体和间质的表达均差异无统计学意义;PCOS高睾酮组腺体AR表达高于正常睾酮组。高睾酮组ERα、ERβ、PR、AR表达高于对照组;正常睾酮组ERα、PR、AR在腺体和间质的表达及腺体ERβ表达高于对照组。PCOS肥胖组和非肥胖组ERα、ERβ、PR、AR在子宫内膜腺体及间质中的表达均高于对照组。但肥胖组与非肥胖组ERα、ERβ、ERα/ERβ、PR、AR表达差异无统计学意义。PCOS胰岛素抵抗组与非胰岛素抵抗组ERα、ERβ、ERα/ERβ、PR、AR表达差异无统计学意义。胰岛素抵抗组ERα、ERβ、PR、AR、腺体ERα/ERβ表达高于对照组。非胰岛素抵抗ERα、PR、AR、腺体ERβ表达高于对照组。相关性分析发现PCOS组子宫内膜间质ERα、PR、ERα/ERβ表达与血清雌激素水平呈正相关;腺体ERα/ERβ、AR、PR表达与血清雌激素水平呈正相关。腺体ERβ的表达与血清雌激素水平呈负相关。腺体AR表达与血脂中的胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白B(APO-B)水平呈正相关。结论 PCOS患者子宫内膜甾体激素受体表达高于正常妇女,除ERβ外其他甾体激素受体表达与PCOS血清雌激素水平呈正相关,ERβ与雌激素水平呈负相关。高雄激素血症、高脂血症可以增强PCOS患者子宫内膜AR表达。

甾体类激素受体在乳腺癌发生与发展中的变化

甾体类激素如雌激素和孕激素是调节正常乳腺组织发育的重要内分泌因素 ,同时也在诱导乳腺癌变中发挥重要作用。甾体类激素通过相应受体的介导对其靶细胞进行作用 ,这些甾体类激素受体在乳腺癌的发生和进展过程中发生了一系列有意义的变化 ;另外近年还发现了新的雌激素受体 (ER)亚型ER β。这些发现为研究乳腺癌发生和内分泌治疗耐药机制提供了新的线索。

子宫内膜甾体激素受体在不孕症发病机制中的作用

甾体激素受体主要为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及雄激素受体(AR)。三者在子宫内膜的表达存在一定的特点,并受激素及其他生长因子调节。近年来研究发现子宫内膜甾体激素受体的表达异常可能是导致不孕症的重要原因之一。其中,黄体功能不全ER、PR低表达;多囊卵巢综合征ER、PR、AR高表达;子宫内膜异位症(EMs)ER高表达,PR-B/PR-A比率降低。

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的:研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1(steroid receptorcoactivator-1,SRC-1)和核受体辅抑制因子(nuclear receptor corepressor,NcoR)表达的调节作用及其机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞于含2%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的α最低必须培养基(α-minimal essential medium,α-MEM)中,给予不同浓度大豆苷原或10^(-8)mol/L的雌二醇作用3 d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182780(Faslodex,ICI,10^(-7) mol/L)和雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)特异性拮抗剂(methyl-piperidino-pyrazole,MPP,10^(-6) mol/L)干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果:大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^(-7)mol/L和10^(-5)mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2.5倍(P<0.05)和2倍(P<0.05)。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35%(P<0.05)。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^(-7)mol/L和10^(-5) mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1.8倍(P<0.05)和2.4倍(P<0.05)。结论:大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1/NcoR比值。ERβ参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1/NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。

甾体激素与甾体受体在胶质瘤中的研究进展

甾体激素在神经系统发挥重要作用,参与神经系统的发育、应激反应、节律、睡眠、学习等过程。并发现其可能通过作用于甾体激素受体在神经胶质瘤的增殖、细胞周期及凋亡中起到重要作用。

甾体激素受体测定与乳腺癌的预后

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,临床流行病学结果及内分泌治疗的良好效果提示(ER)雌激素受体,(PR)孕激素受体水平对乳腺癌的预后有重要意义.我院通过1995～1999年间124例女性乳腺癌患者的回顾分析,以探讨ER、PR水平对乳腺癌预后的影响.

过氧化物酶体增殖物激活受体与糖脂循环

1990年Issemalln和Greent^[1]首次发现并从小鼠肝脏克隆了一种新的甾体激素受体，当时因其结构与糖皮质激素受体等核受体家族类似，且未能证实其配体，称之为孤儿受体。后来研究证明一些能导致过氧化物酶体增殖物激活受体增多的化学物质能将其激活，

PPARγ受体在胃肠恶性肿瘤中的研究进展

1990年Issemann等首先发现了一种能被一类脂肪酸样化合物氧化物酶体增殖剂激活的甾体激素受体，被命名为过氧化物酶体增殖蛋白激活受体（pemxisome proliferator activated receptor，PPAR）。PPARs通过与配体结合活化，再与视黄酸受体（retinoic X receptor．RXR）形成二异聚体，与目的基因上游的PPRE（pemxisome prolifemtor responsive element结合，形成受体一共调节因子-DNA或蛋白质-DNA复合体，促进目的基因的转录。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ与急性胰腺炎关系研究进展

1990年英国科学家Issemann和Green首先从小鼠肝脏克隆出一种新的甾体激素受体，因能被过氧化物酶体增殖剂（peroxisome-proliferators，PP）激活，被命名为PP激活受体（peroxisome-proliferators—activated receptors，PPARs）。因PPAR还能被内源性脂肪酸及其代谢产物激活故又称为脂肪酸受体（fattyacid receptor）。随着研究的不断深入，目前已明确PPARs参与糖脂代谢平衡、

四株肺癌细胞系的维甲酸受体表达的研究

目的 :观察来源于不同组织学类型的人肺癌细胞系 (肺巨细胞癌细胞系PLA - 80 1,肺鳞状上皮细胞癌细胞系C - 57,个旧肺腺癌细胞系GLC - 82和肺腺癌细胞系PC - 84 0 4 5)的维甲酸受体的含量和分布特征 方法 :作ELISA和免疫组化显色计算机图象分析方法 ,对 4株具有不同侵袭潜能 ,不同组织学类型的肺癌细胞系的维甲酸受体 (RARs、RAR和RXRs)进行检测 结果 :4株细胞系的RARβ的表达极少 ,甚至缺如 ;RARs主要分布在癌细胞胞浆中 ,但RXRs主要位于细胞核内 ,表达水平较高 ;RARs和RXRs在PLA - 80 1细胞中表达最低 结论 :肺癌中普遍存在着RAR的表达分布异常 ,这些改变可能与肺癌的异常分化有关 ,亦可能是肺癌细胞对维甲酸诱导分化不敏感的重要原因 RXRs较高水平的表达且主要位于核内 ,提示用

人雄激素受体部分N端区cDNA片段在大肠杆菌中的克隆及表达

N端区是甾体激素受体氨基酸序列差别最大的区域,决定了甾体激素受体抗原的特异性,是制备特异性抗甾体激素受体抗体的首选部位。以前,由于雄激素受体(hAR)纯化的困难,hAR抗体主要是从部分患前列腺癌病人血液中存在的hAR自身抗体纯化获得,利用这种方法制备的hAR抗体不但量少,而且来源也非常有限。 hAR cDNA克隆成功后。

基于网络药理学与分子对接探究当归芍药散作用甾体激素受体治疗糖尿病认知障碍

目的:运用网络药理学与分子对接技术,探究当归芍药散(danggui-shaoyao-san,DSS)作用甾体激素受体来治疗糖尿病(diabetes mellitus,DM)认知障碍。方法:以DSS中的当归、白芍、白术、川芎、茯苓、泽泻为研究对象,应用TCMSP数据库筛选出6味中药主要化学成分和相应靶点;在OMIM数据库、GeneCards数据库检索获取DM认知障碍的相关基因靶点。通过文献和NCBI数据库中检索甾体激素受体与DSS治疗DM认知障碍潜在靶点一起输入STRING平台得到蛋白网络互作图。从PubChem数据库获得化合物的3D结构,PDB数据库获得甾体激素受体的3D结构,用AutoDock4.2.6软件进行分子对接,获取DSS有效成分与甾体激素受体的结合能。结果:获得DSS 47个有效成分,161个作用靶点;DM认知障碍8018个疾病靶点;DSS治疗DM认知障碍潜在靶点138个;甾体激素受体11种。对核心靶点蛋白网络互作图分析,筛选出激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、雄激素受体(androgen receptor,AR)、孕酮受体(progesterone receptor,PR)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)等甾体激素受体是DSS治疗DM认知障碍的重要靶点,最后进行分子对接。结论:基于网络药理学与分子对接的研究方法,结果筛选出DSS中主要是儿茶素、薯蓣皂苷元、柚皮素、槲皮素、紫杉叶素、山柰酚等活性成分,作用ERα、GR、AR、PR、ERβ等甾体激素受体来防治DM认知障碍。

共表达PXRLBD和SRC88以及PXR配体筛选的平衡透析模型的建立

The aim of this study was to obtain the soluble protein of human pregnane X receptor ligand binding domain(PXRLBD) through the coexpression of PXRLBD and 88 amino acids of steroid receptor coactivator-1(SRC88) and apply the protein to constructing a new model of screening PXR ligands.Expression plasmid of pETDuet-1-SRC88-PXRLBD was constructed and transformed into Escherichia coli Rosetta(DE3) to coexpress PXRLBD and SRC88 via induction by IPTG at low temperature.Then an equilibrium dialysis model was constructed to study the interaction between PXRLBD and drugs including clotrimazole and dexamethasone,using HPLC as the analysis method.The results showed that the soluble protein of PXRLBD was obtained and the HPLC data indicated that clotrimazole bound to PXRLBD,while dexamethasone did not bind to PXRLBD,which indicated the successful establishment of a new method for studying the interaction between PXR and drugs.The new method may be useful in the screening of PXR ligands in vitro.

泛素-蛋白酶体通路在生殖领域的研究进展

泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)是真核细胞除溶酶体途径外的蛋白质主要降解途径。UPP除为人熟知的细胞内蛋白质的水解作用外,还是十分重要的细胞功能调节因素。近来有关UPP在生殖领域的研究也取得很大进展。研究发现UPP参与正常月经周期子宫内膜的组织重塑、卵母细胞减数分裂成熟和早期胚胎发育、甾体激素受体的代谢等雌性生殖系统的生理活动,而且也与精子发生、成熟和受精等雄性生殖系统生理活动密切相关。

藤黄酸调节肺腺癌A549细胞甾体类受体共激活因子3表达的意义

目的观察藤黄酸对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响，及其对甾体类受体共激活因子3（SRC-3）表达的调控作用。方法以不同浓度的藤黄酸处理人肺腺癌A549细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖活性，Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变，共聚焦显微镜观察A549细胞中SRC-3蛋白的分布情况，Western blot和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测藤黄酸对A549细胞中SRC-3 mRNA和蛋白表达的影响。结果藤黄酸能明显抑制A549细胞的增殖，其抑制作用呈时间和浓度依赖性，24和48h的半数抑制浓度（IC90）分别为（3．17±0．13）μmol／L和（1．85±0．08）μmol／L。藤黄酸能使A549细胞出现典型的细胞凋亡形态改变。空白对照组的A549细胞中，SRC-3 mRNA和蛋白均呈高表达，且主要分布于细胞核；经藤黄酸处理后，A549细胞中SRC-3 mRNA和蛋白的表达水平均明显下降。结论藤黄酸能明显抑制人肺腺癌细胞A549的增殖，并可能通过下调SRC-3 mRNA和蛋白的表达量而诱导A549细胞产生凋亡。藤黄酸有望成为治疗肺癌的新型靶点药物。