溴氰菊酯对大鼠卵巢甾体激素合成的影响

目的探讨溴氰菊酯(Deltamethrin,DLT)对大鼠卵巢甾体激素合成的影响及相关的分子机制。方法不同剂量DLT暴露处理大鼠和原代颗粒细胞;取DLT暴露后的大鼠血清和培养上清液,电化学发光法测定雌二醇和孕酮的水平;Western Blot法检测DLT暴露后大鼠卵巢组织及原代培养颗粒细胞中甾体激素合成关键酶:甾体激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、芳香化酶的表达量,同时检测组蛋白去乙酰化酶Sirt1的蛋白表达。结果体、内外实验中,DLT各处理组大鼠血清、原代颗粒细胞培养上清液中雌二醇水平均显著升高(体内实验P<0.05,体外实验P<0.001);体内实验中DLT各处理组大鼠血清孕酮水平均显著降低(P<0.05),而体外实验中DLT各处理组原代颗粒细胞培养上清液孕酮水平无显著变化(P>0.05);体、内外实验中DLT各处理组大鼠卵巢组织、原代培养颗粒细胞中StAR、P450scc、芳香化酶以及Sirt1的表达量均显著升高(P<0.01)。结论 DLT能影响大鼠卵巢雌二醇和孕酮的合成,其机制可能与其关键酶表达的变化有关。

五氯硝基苯亚急性暴露对卵巢甾体激素合成的影响

目的探究五氯硝基苯(PCNB)亚急性暴露对SD大鼠卵巢甾体激素合成的影响。方法将30只3周龄雌性SD大鼠随机分为3组:给予50 mg·kg^(-1)·d^(-1)PCNB灌胃给药的为低剂量组,给予100 mg·kg^(-1)·d^(-1)PCNB灌胃给药的为高剂量组,给与等体积玉米油灌胃给药的为对照组,每组10只,连续灌胃28 d。用电化学发光法检测各组大鼠血清孕酮和E2水平;用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠卵巢组织中3种甾体激素合成关键酶:类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)及芳香化酶(Aromatase)的表达情况。结果PCNB亚急性暴露期间,两实验组大鼠的体重变化、卵巢系数与对照组比较均无显著差异(P>0.05);两实验组大鼠血清孕酮水平均显著高于对照组,血清E2水平均显著低于对照组(P<0.05)。Western Blot结果显示,大鼠卵巢组织中StAR的表达量低剂量组>高剂量组>对照组,各组组间无统计学差异(P>0.05);大鼠卵巢组织中P450scc表达量高剂量组>对照组>低剂量组,各组组间无显著性差异(P>0.05);低、高剂量组大鼠卵巢组织中芳香化酶表达水平均显著低于对照组(P<0.05),并呈剂量依赖性下降。结论PCNB亚急性暴露可导致大鼠血清孕酮和E2水平发生改变,其机制可能与卵巢组织中甾体激素合成关键酶的表达量改变有关。

坤宁安对围绝经期大鼠卵巢甾体激素合成酶表达的影响

目的：观察中药坤宁安对围绝经期大鼠卵巢甾体激素合成酶表达的影响,探讨坤宁安治疗围绝经期综合征的作用机制。方法：选择处于围绝经期的雌性Wistar大鼠（13~16个月龄）40只,随机分为围绝经期组、西药对照组、坤宁安高剂量组,坤宁安低剂量组,分别以生理盐水、倍美力和坤宁安高、低剂量,连续灌胃4周;另取3~5个月龄大鼠10只作为青年对照组,生理盐水连续灌胃4周。通过RT-PCR检测各组大鼠卵巢甾体激素合成酶的表达。结果：RT-PCR结果显示：坤宁安低剂量组大鼠卵巢中甾体激素合成酶Star的表达水平明显高于围绝经期组、西药对照组（P〈0.05）。坤宁安高、低剂量组大鼠卵巢中甾体激素合成酶CYP17、CYP19的表达水平显著高于围绝经期组及西药对照组（P〈0.05）;与青年对照组无明显差异（P〉0.05）。结论：坤宁安能够上调围绝经期大鼠卵巢甾体激素合成酶的表达,可能是其治疗围绝经期综合征的机制之一。

肌细胞增强因子2A介导邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯影响睾丸间质细胞甾体激素mRNA表达水平

目的探讨肌细胞增强因子2A(MEF2A)在邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)抑制睾丸间质细胞甾体激素合成的作用。方法体外培养细胞mLTC-1,取对数生长期的细胞用于实验。设DMSO溶媒对照组(0μmol/L)、MEHP处理组(200、400、800μmol/L),作用24h,加hCG0.1U/mL作用4h后收集细胞培养液用于检测孕酮;提取细胞总RNA用于检测类固醇激素合成关键酶(StAR/P450scc/3βHSD)及MEF2A的mRNA表达水平。结果MEHP作用24h后,细胞培养液中孕酮(PROG)随染毒剂量增高呈下降趋势,其中800μmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。随着MEHP染毒剂量的增高,StAR mRNA逐渐降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。P450sccmRNA和3βHSD mRNA表达水平在400μmol/L和800μmol/L组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。不同实验组MEF2A mRNA均比对照组低(P均<0.01)。结论MEHP对雄性的生殖毒性机制可能通过抑制MEF2A mRNA的表达,干扰孕酮合成关键酶,从而影响睾酮活性。

甾类激素合成灵敏调节蛋白在大鼠黄体中的表达及其受IFN_γ的调节

甾体激素合成灵敏调节蛋白（ＳｔＡＲ）是甾体激素合成的关键调节因子．甾体激素的合成需要将胆固醇从细胞质转运到位于线粒体内膜的细胞色素Ｐ４５０侧链切除复合体上，这是甾体激素合成的限速步骤．它依赖于ＳｔＡＲ的从头合成．以成年大鼠假孕模型，用原位杂交和免疫组化的方法研究了不同时期大鼠黄体中ＳｔＡＲ ｍＲＮＡ和抗原的表达及其受ＩＦＮγ调节的情形．结果表明 ＳｔＡＲ的表达与孕酮的水平相一致，ＩＦＮγ对ＳｔＡＲ表达有抑制作用．

多囊卵巢综合征卵泡膜细胞功能的研究

多囊卵巢综合征(PCOS)是女性最常见的内分泌疾病之一,影响了6%-10%的育龄期妇女。PCOS卵巢的特性是卵泡内膜过度增生。而卵泡膜细胞是PCOS患者雄激素合成过多的原始来源之一。PCOS的卵泡膜细胞中CYP11A1、CYP17、StAR、3β-HSD表达增加。PCOS卵巢雄激素过多的发病机制中存在MAPK信号通路的改变,胰岛素能调控PCOS卵泡膜细胞甾体激素的合成。因此,对于PCOS卵泡膜细胞功能的研究将有助于此疾病的病因学和治疗学的发展。

PCOS卵巢局部胰岛素信号通路异常对卵巢细胞生殖内分泌功能的影响

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期女性常见的生殖内分泌异常疾病。PCOS的临床表现除了胰岛素抵抗、糖脂代谢异常等代谢异常特征外,还表现出月经稀发、无排卵、高雄激素血症等生殖机能异常的特征。卵巢作为在女性体内合成雄激素的主要场所之一,卵巢细胞的胰岛素抵抗与PCOS高雄激素血症的发生有着密切的联系,但目前还没有找到卵巢胰岛素信号通路与甾体激素合成能力之间的直接联系。对高雄激素血症发生机制与卵巢组织中胰岛素信号通路关系的探讨对阐明PCOS发病机制、制定有针对性的治疗方案拓展临床PCOS的治疗思路有重要的临床指导意义。本文旨在探讨PCOS高雄激素血症病因的基础上,总结卵巢胰岛素抵抗对高雄激素影响的分子机制及胰岛素增敏剂调节PCOS患者雄激素水平的研究进展。

直链烷基苯磺酸钠暴露对雄性小鼠的生殖毒性

目的探讨直链烷基苯磺酸钠(LAS)对小鼠睾丸的损伤作用及其可能的机制。方法将24只3周龄ICR种雄性小鼠随机分为对照组和低、中、高剂量LAS染毒组(每组6只小鼠),4组分别给予生理盐水、LAS210mg/kg、LAS420mg/kg和LAS630mg/kg连续灌胃30d,每天1次。处死小鼠,收集血清,放射免疫法测定血清中睾酮浓度;分离睾丸和附睾组织,计数精子密度,光镜观察睾丸组织形态学变化,实时荧光定量PCR检测睾丸组织中甾体激素合成限速酶基因Star、Cyp11a1、Cyp17a1和Hsd3b2mRNA的表达。结果LAS染毒各剂量组小鼠睾丸和附睾脏器系数、精子密度均较对照组降低(F=77.619~375.293,P<0.05)。光镜观察显示,与对照组比较,LAS染毒高剂量组睾丸组织生精小管内生精细胞排列稀疏,细胞层数减少,精原细胞坏死凝集,间质细胞皱缩,支持细胞数量明显减少。LAS染毒中、高剂量组睾酮浓度较对照组下降,差异有统计学意义(F=25.574,P<0.05)。LAS染毒各剂量组睾酮合成相关限速酶基因Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b2mRNA表达水平均较对照组下降,并且与LAS剂量正相关,差异有显著性(F=5.578~15.796,P<0.05)。结论LAS能够损害小鼠睾丸形态结构,造成生精功能下降;并通过抑制Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b2等甾体激素合成限速酶基因的表达,减少睾酮的合成。

卵巢局部糖原合成酶激酶3β过表达对大鼠卵巢功能的影响及补肾化痰方干预机制

目的:探讨大鼠卵巢局部糖原合成酶激酶3β(GSK3β)基因过表达对卵巢功能的影响及补肾化痰方的干预作用。方法:将SD大鼠随机分为对照组,模型组,补肾化痰方低、中、高剂量组。对照组大鼠给予卵巢包膜内10μL 0.9%氯化钠溶液注射,其余4组动物均卵巢包膜内注射10μL Lenti-GSK3β病毒溶液。各组分别给予0.9%氯化钠溶液及相应剂量的补肾化痰方药物灌胃,治疗15d后,检测卵巢组织中细胞凋亡水平,凋亡相关因子、胰岛素信号通路因子、甾体激素合成关键酶及PPARγ-LXRα信号通路关键因子的表达水平以及血清睾酮(T)、孕酮(Prog)、雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)及促黄体生成素(LH)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠卵巢组织TUNEL染色阳性细胞核密度增加,卵巢组织甾体激素合成酶HSD3β、CYP17a1 mRNA表达水平上升及血清T水平显著上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组对卵巢组织TUNEL染色后阳性细胞核密度及胰岛素信号通路关键因子的表达水平差异无统计学意义,但能以剂量依赖的方式激活PPARγ-LXRα信号通路,降低CYP17a1、HSD3βmRNA的表达水平(除补肾化痰方低剂量组CYP17a1)及血清T水平(除补肾化痰方低剂量组外)(P<0.05,P<0.01)。结论:卵巢GSK3β基因表达水平的上升可能是卵巢胰岛素信号通路异常所体现出的结果,而非造成PCOS患者卵巢病理变化的直接原因;补肾化痰方可能激活PPARγ-LXRα信号通路调节PCOS患者异常的生殖内分泌临床表型。