白首乌甾苷复合酶法提取工艺优化及保肝活性分析

目的:为开发白首乌保肝高值化产品提供依据。方法:以多年生白首乌为原料,采用单因素试验及响应面法,考察酶解时间、酶解温度、复合酶用量和酶解pH对白首乌甾苷得率的影响;通过乙醇诱导HepG2肝细胞损伤模型研究谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)及谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的含量和细胞形态变化。结果:在酶解时间100 min、温度46℃、酶用量1.30%和pH 5.0的条件下,实际得率为(2.80±0.04)%。与模型组相比,白首乌可明显抑制肝损伤细胞中ALT、LDH含量,显著提高细胞内的GSH水平,恢复细胞损伤。结论:复合酶法可有效提取白首乌甾苷;白首乌甾苷具有保肝作用。

麦角甾苷治疗帕金森病的作用机制研究进展

麦角甾苷(acteoside,AS;verbascoside,VER)是一种苯乙烷糖苷类化合物,具有多种的药理功能,其广泛存在于多种植物中。近年来,研究者在实验性帕金森病(Parkinson disease,PD)模型中,发现麦角甾苷具有神经保护作用,可以通过抗氧化应激、抑制乙酰胆碱酯酶活性、抗神经系统炎症、抑制α-突触核蛋白聚集、诱导自噬和抗凋亡在PD治疗中发挥重要作用。本文对麦角甾苷在PD中的作用机制进行了归纳和总结,以期对PD的药物治疗提供新的依据。

RP－HPLC法测定不同寄主和不同产地肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷的含量

目的：测定不同寄主和不同产地肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷含量。方法：采用反相高效液相色谱法，SUPELCOSIL LC-18色谱柱(250mm×4．6mm，5μm)。测定松果菊苷用流动相A：乙腈-水-冰醋酸(13：86：1)；测定麦角甾苷用流动相B：甲醇-水-冰醋酸(32：67：1)。流速：1．0mL·min^-1，检测波长分别为335nm、334nm。柱温：40℃。结果：松果菊苷和麦角甾苷分别在0．04-0．28μg(r=0．9998)和0．04-0．40μg(r=0．9992)内呈良好线性关系，平均加样回收率分别为97．6％和99．1％，RSD均为1．2％。结论：方法准确可靠，重现性好，可用于肉苁蓉的质量评价。

HPLC测定地黄中麦角甾苷的含量

目的：建立用高效液相色谱法测定生地黄和熟地黄中麦角甾苷含量的方法。方法：采用C18柱，以乙腈-0．1％醋酸为流动相，梯度洗脱，检测波长334nm，流速1．0mL·min^-1。结果：麦角甾苷在10～500μg·mL^-1时，呈良好的线性关系（r=0．9990），平均回收率为100．1％，RSD 3．7％。结论：本法可作为地黄质量控制方法。

肉苁蓉生品及不同炮制品麦角甾苷含量比较研究

目的：对肉苁蓉生品及不同炮制品中麦角甾苷的含量进行比较研究。方法：采用高效液相色谱法测定麦角甾苷含量，使用ＹＷＧ－Ｃ１８色谱柱，甲醇－１０ｍｌ／Ｌ乙酸（３５６５）为流动相，ＵＶ检测波长为３３２ｎｍ，麦角甾苷在０．１～０．８μｇ范围内与峰面积呈良好的线性关系（回归方程Ｙ＝２９９４９２Ｘ＋１１６５，ｒ＝０．９９９９，平均回收率为９８．８３％，ＲＳＤ为１．６８％）。结果：生品含量高于炮制品，为０．３３７８％，高压酒炖品含量最低，为０．０５９６％，炮制品中炮制的温度越高，时间愈长，含量愈低。结论：以助阳活性成分麦角甾苷为考察指标时，肉苁蓉药材不宜高温、高压长时间炮制。本法操作简便，结果准确，可作为评价肉苁蓉质量的方法。

江苏地产白首乌C_(21)甾苷对D-半乳糖衰老模型小鼠的作用研究

目的:研究江苏地产白首乌C21甾苷(CSG)对D-半乳糖(D-gal)衰老模型小鼠的影响。方法:小鼠分为正常组,模型组,CSG低、中、高剂量组(10,20,40 mg.kg-1.d-1)和维生素E(Vit E)对照组(100 mg.kg-1.d-1),除正常组外均采用D-gal 10 mg.kg-1颈背部皮下注射,试验期为56 d。检测小鼠血清、心、肝、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及端粒酶活性。结果:与正常组相比,模型组小鼠血清、心、肝、脑组织SOD活性降低,含量增加,血清、心、肝端粒酶活性降低(P<0.01);与模型组比较,3个CSG组及Vit E组小鼠血清、心、肝、脑SOD活性升高,MDA含量减少(P<0.01);低剂量CSG组及Vit E组小鼠血清端粒酶活性有升高的趋势,但差异不显著,中、高剂量CSG组小鼠血清端粒酶活性升高(P<0.01);3个CSG组及Vit E组均能升高小鼠心脏端粒酶活性(P<0.01);3个CSG组及Vit E组小鼠肝及脑组织端粒酶活性无明显变化。结论:CSG能拮抗自由基损伤,提高D-gal衰老模型小鼠血清、心、肝、脑组织SOD活性,减少MDA含量,提高血清、心组织端粒酶活性。

江苏地产白首乌C_(21)甾苷抗炎作用及其机制研究

目的:研究白首乌C21甾苷(CSG)的抗炎作用及其机制。方法:以阿司匹林、英太青、环磷酰胺作阳性对照药,观察CSG对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高、二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型的抗炎作用;测定AA大鼠血清IL-6、TNF-α含量,关节NO、PGE2含量,探讨CSG抗炎作用机制。结果:CSG对急慢性、免疫性炎症反应有明显抑制作用,对AA大鼠血清IL-6、TNF-α、关节组织中NO、PGE2的生成有抑制作用。结论:CSG具有较强的抗炎作用,抗炎机制与抑制细胞因子TNF-α、IL-6和炎症因子NO、PGE2的生成有关。

江苏地产白首乌C_(21)甾苷抗衰老作用研究

目的研究江苏地产白首乌C21甾苷(C21 steroidal glycoside,CSG)抗氧化、耐缺氧、抗疲劳等抗衰老作用。方法以维生素E[VE,100mg/(kg.d)]为对照,观察CSG低、中、高剂量组[10mg/(kg.d)、20mg/(kg.d)、40mg/(kg.d),即CL、CM、CH组]对小鼠常压耐缺氧试验,负重游泳试验和D-半乳糖(D-gal)亚急性衰老模型小鼠的影响。测定小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间,取血清、心、肝、脑组织,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测端粒酶活性。结果与正常对照组相比,CSG和VE能够延长健康小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间,提高D-gal模型小鼠血清、心、肝、脑SOD活性,降低MDA含量;中、高剂量CSG组小鼠血清端粒酶活性升高;CSG低、中、高剂量组及VE组小鼠心脏端粒酶活性均升高(P<0.01);CSG及VE对小鼠肝及脑组织端粒酶活性无影响。结论CSG能拮抗自由基损伤,提高健康小鼠常压耐缺氧和负重游泳时间,提高D-gal衰老模型小鼠血清、心、肝、脑组织SOD活性,减少MDA含量,提高心脏组织中端粒酶活性。具有抗氧化、延缓衰老、抗疲劳作用。

HPLC法测定金龙蛇口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、麦角甾苷和甘草苷的含量

目的建立同时测定金龙蛇口服液中5种主要有效成分的HPLC法。方法色谱柱为SunFireTM C18柱（4.6mm×250mm,5μm）,以乙腈（B）-0.2%甲酸（A）为流动相进行梯度洗脱（0-10min,10%-19%B;10-32min,19%B）,流速为1.0mL/min,柱温40℃,进样量10μL,检测波长为285nm。结果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、麦角甾苷和甘草苷的质量浓度分别在2.00-60.00、2.12-63.60、1.68-50.40、2.00-60.00和2.00-60.00μg/mL范围内呈良好的线性关系（r≥0.999 9）。5种成分的日内精密度和日间精密度RSD分别小于2.30%和3.82%,24h内稳定性RSD〈4.47%;平均加样回收率分别为95.11%、93.73%、96.39%、98.02%和95.12%;RSD分别为2.08%、4.05%、4.02%、6.01%和4.56%。结论该方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,适用于金龙蛇口服液的质量控制和评价。

麦角甾苷调节HIPK2-P53通路对人大肠癌裸鼠移植瘤的治疗作用

目的:研究肉苁蓉提取物麦角甾苷对人大肠癌裸鼠移植瘤模型肿瘤生长的作用,及对人大肠癌细胞HIPK2-P53通路的影响,探讨麦角甾苷抑制人大肠癌的作用机制.方法:通过腋下接种人结肠癌HCT-116细胞,建立人大肠癌裸鼠移植瘤模型,随机分为:模型组(生理盐水)、麦角甾苷低[20mg/(kg·d)]、中[40 mg/(kg·d)]、高[80 mg/(kg·d)]剂量组和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组[1 mg/(kg·d)],经腹腔分别给药0.2mL,连续给药2 wk.2 wk后处死裸鼠,分别检测裸鼠瘤体体积、瘤质量,采用免疫组织化学法检测瘤组织中凋亡相关蛋白同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinase 2,HIPK2)、P53、Bax和Bcl-2的表达情况.结果:麦角甾苷低、中、高剂量及5-F U对裸鼠瘤体大小抑制率分别为:48.41%、61.04%、63.75%和75.14%,瘤体质量抑制率分别为:42.79%、53.90%、60.99%、66.19%.免疫组织化学结果显示,裸鼠大肠癌肿瘤组织中麦角甾苷低、中、高剂量及5-FU组HIPK2的表达量分别为:4.83±0.62、8.46±0.99、11.90±1.21、13.50±0.94;P53的表达量分别为:14.59±0.90、17.60±1.40、23.10±2.10、22.44±2.05;B a x表达量分别为14.41±0.38、15.84±0.54、26.28±0.55、26.34±2.33;Bcl-2的表达量分别为14.08±1.04、11.93±0.93、7.48±0.86、5.46±0.67.结论:麦角甾苷能够抑制人大肠癌裸鼠移植瘤生长,上调凋亡相关蛋白HIPK2、P53、Bax的表达,下调Bcl-2表达,其抑制大肠癌的作用与促进肿瘤细胞凋亡密切相关.

麦角甾苷及松果菊苷对体外培养大鼠成骨细胞BMP2基因表达的影响

为了观察麦角甾苷和松果菊苷对体外培养大鼠成骨细胞BMP2基因表达的影响。本试验采用酶消化法分离得到大鼠颅骨成骨细胞,在第3代成骨细胞中分别加入含有不同浓度麦角甾苷和松果菊苷的培养液进行培养,在培养的不同时间收集细胞、提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR方法观察对成骨细胞BMP2基因表达的影响。结果表明,麦角甾苷和松果菊苷均能促进大鼠成骨细胞BMP2基因的表达。

苦瓜中胡萝卜甾苷的高效薄层色谱分析方法研究

以硅胶G60为固定相、氯仿-乙醚-丙酮-冰醋酸-水-吡啶为流动相,建立了苦瓜胡萝卜甾苷的高效薄层色谱分析方法。苦瓜胡萝卜甾苷标样和醇提液上展开5cm,其Rf值为0.70。苦瓜胡萝卜甾苷的检测量在200～1000ng范围,其斑点的面积与苦瓜甾苷的检测量具有良好的线性关系,相关系数为0.9953。胡萝卜甾苷的平均回收率达100.64%,方法的精密度良好(RSD<1.5%),该方法快速、准确,可用于苦瓜甾苷的定性定量分析。

高效液相色谱法测定毛泡桐花中麦角甾苷(毛蕊花糖苷)的含量

目的:建立毛泡桐花中麦角甾苷(毛蕊花糖苷)的高效液相色谱分析方法。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-1%冰醋酸溶液(20:80)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长331mm,在10 min内分离检测该化合物。结果:麦角甾苷在0.006-10μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),最低检出限0.002μg(S/N=3);日内和日间精密度RSD分别为0.6%和2.9%(n=5);加样回收率为95.8%-103.1%。结论:所建立的方法简便、快速、准确,可用于毛泡桐花的质量控制,并为泡桐属其它植物中苯丙素苷类化合物的分离分析提供一定的参考。

蔓生白薇中的C_(21)甾苷类成分

目的:研究蔓生白薇Cynanchumversicolor Bunge中C21甾苷类化学成分。方法:利用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱的方法分离和纯化化合物,根据理化性质和波谱方法鉴定化合物结构。结果:从蔓生白薇90%乙醇提取物的氯仿萃取部分中分离得到了12个C21甾苷类化合物,分别鉴定为蔓生白薇苷G(cynanversi-coside G,1)、白前苷元C3-O-β-D-黄花夹竹桃吡喃糖苷(glaucogenin C3-O-β-D-thevetopyranoside,2)、atratoglauco-side A(3)、白前苷C(glaucosideC,4)、蔓生白薇苷A(cynanversicoside A,5)、cynanosidesⅠ(6)、蔓生白薇苷D(cynanversicosideD,7)、蔓生白薇苷E(cynanversicoside E,8)、蔓生白薇苷C(cynanversicoside C,9)、白前苷D(glaucoside D,10)、蔓生白薇苷B(cynanversicoside B,11)、白前苷H(glaucosideH,12)。结论:1为新化合物;2、3、4、6和10为首次从该植物中分离得到。

磺基醋酸汞试剂法用于C_(21)甾苷定量检测的可行性研究

经实验确定了甾苷定量测定的官能团反应方法。用定量测定3-羟基族化合物的最特效的方法磺基醋酸汞试剂法直接测定C21甾苷元的C3-OH,从而间接测定C21甾苷,实验证明该方法是可行的。

C_(21)甾苷提取方法的研究

为建立萝摩科植物及相应的保健产品中C21甾苷的定量方法,本文首先进行各种提取方法的探讨。将用于强心苷薄层层析定量显色的2—去氧糖反应进行了改进,作为进行各种提取方法C21甾苷相对含量比较的方法。根据C21甾苷的结构,选用了11种萃取剂进行了提取实验,并探讨了原料粉碎度、提取时间等其它条件对提取效果的影响,最终确定了C21甾苷的提取方法。

高效液相色谱法测定蜜桶花颗粒及其原植物来江藤中的麦角甾苷

建立了用高效液相色谱法测定蜜桶花颗粒及其原植物来江藤中麦角甾苷含量的方法。实验采用C18柱,以甲醇 0 5%醋酸水(体积比为42∶58)为流动相,在334nm检测波长处检测。结果表明:麦角甾苷的进样量为0 029～2 038μg时,进样量与色谱峰面积有良好的线性关系(r=0 9998);回收率为90 2%～93 8%;方法的精密度好,相对标准偏差(RSD)为0 34%(n=5)。方法快速、简便、准确,所测结果稳定、重现性好,可作为蜜桶花颗粒质量控制的一个检测方法。

麦角甾苷眼用固体脂质纳米粒制备及其体外释药的研究

[目的]研究麦角甾苷眼用固体脂质纳米粒的制备方法及其体外释放的情况。[方法]采用乳化蒸发-低温固化法制备麦角甾苷固体脂质纳米粒,超滤离心法测其包封率,并对其粒径、电位、进行进一步考察,用差示扫描量热仪(DSC)表征其性质,采用透析法考察固体脂质纳米粒中麦角甾苷的体外释放行为。[结果]麦角甾苷固体脂质纳米粒的平均粒径为85.56 nm,Zeta电位约为-20.97 m V,药物平均包封率为88.31%,DSC表明其理化性质稳定可靠,体外12 h累计释放率62.46%。[结论]制备的麦角甾苷固体脂质纳米粒包封率较高,粒径小且分布均匀,有良好的缓释作用。

熟地黄麦角甾苷对小鼠肾毒血清肾炎治疗作用的研究

目的:观察麦角甾苷对小鼠肾毒血清肾炎的作用,以期将麦角甾苷开发成治疗肾炎的新药。方法:采用小鼠肾毒血清肾炎模型,给予麦角甾苷10、30、90mg／kg口服,给药5天和10天后作肾功能及肾组织学检测。结果:给药5天和10天后,麦角甾苷三个剂量都能明显降低尿蛋白、尿素氮、总胆固醇(p值分别<0．05,<0．01,<0．001);明显升高白蛋白(p值分别<0．05,<0．01,<0．001)。肾组织学检测发现三个给药组肾小球基底膜增厚程度均轻于模型组,肾小管蛋白管型亦比模型组轻。结论:麦角甾苷对小鼠肾毒血清肾炎有良好的治疗作用,提示麦角甾苷对于人类免疫性肾炎可能具有一定的临床意义和应用前景。

中药萝藦中C21甾苷的含量测定

[目的]测定萝藦中C21甾苷的含量。[方法]以孕甾烯醇酮为标准物,采用磺基醋酸汞试剂法于510 nm波长处测定C21甾苷的吸光度值,并计算其含量。[结果]萝藦中C21甾苷含量为0.003 3 mg/ml,与相关文献中萝藦科植物中甾苷的含量接近。[结论]该方法准确率、重现性、线性关系等都满足科研和生产要求,可以用于萝藦中C21甾苷的含量测定。