从“骨肉不相亲”探讨牛膝活性成分β-蜕皮甾酮论治骨质疏松的研究进展

骨质疏松是骨稳态失衡的一种全身性骨代谢紊乱疾病。临床常用药物如双膦酸盐、地诺单抗及雷奈酸锶等具有胃肠道刺激、肾毒性等不良反应,亟待安全长期有效的新型药物弥补空白。中医学中骨质疏松症属于“骨痿”范畴,牛膝是中医药治疗“骨痿”的常见药物,β-蜕皮甾酮为其主要活性成分。通过β-蜕皮甾酮对于骨质疏松的治疗机制进行系统性综述,并以其对骨骼与肌肉分子调控为切入,结合牛膝中医中药理论及结合现代分子医学及生物学研究,总结出增加成骨细胞活性、促进骨髓间充质干细胞成骨分化、提高肌肉质量以及类雌激素等作用。

基于Box-Behnken响应面法优化膝痛康β-蜕皮甾酮的提取工艺

目的优化膝痛康方剂中β-蜕皮甾酮的提取工艺。方法采用Box-Behnken响应面法和单因素试验,对提取过程中的浸泡时间、提取次数、提取时间和甲醇倍量等进行优化,通过响应面模型分析与预测,得到最佳的提取工艺条件,并对最优条件进行验证。结果饮片浸泡96 min,提取100 min,反复2次,甲醇倍数为16倍,此时牛膝的提取工艺达到最佳,在此提取工艺下β-蜕皮甾酮的提取量达到最大。结论该提取方法具有设备简单、成本低、提取工艺稳定等特点,此外,该提取工艺具有较好的应用价值,以其为膝痛康的应用提供实验依据。

露水草中β-蜕皮甾酮提取工艺优化及其体外抗氧化能力研究

为探究露水草β-蜕皮甾酮的最佳提取工艺,分别考察提取方式和提取温度对β-蜕皮甾酮含量的影响;使用高效液相色谱法检测含量,利用DPPH和ABTS方法评价最佳提取工艺得到β-蜕皮甾酮的抗氧化能力。使用温浸提取和加热回流两种提取方式,分别考察了60、80、100℃下溶剂为水的提取物中β-蜕皮甾酮的含量;选择最佳提取工艺进行提取,进行方法学考察;利用DPPH和ABTS体外自由基清除实验测定其抗氧化活性。结果表明,以水为溶剂,100℃加热回流的提取方式得到的β-蜕皮甾酮的含量最高;在该液相条件下,露水草样品可快速检出并且峰型良好,分离度高。通过自由基清除实验表明其具有体外抗氧化能力并呈一定浓度依赖型。

中药牛膝中的植物甾酮类成分

目的对牛膝(Achyranthes bidentataBl.)中的植物甾酮类成分进行分离、鉴定。方法采用各种色谱分离手段,利用理化性质及NMR、MS等波谱技术对化合物进行结构鉴定。结果得到5个化合物,分别鉴定为漏芦甾酮B(rhapontisterone B,1)、旌节花甾酮D(stachysterone D,2)、红苋甾酮(rubrosterone,3)、β谷甾醇(βsitosterol,4)和胡萝卜苷(daucosterol,5)。结论化合物1、2为首次从牛膝中分离得到。

露水草植物蜕皮甾酮类化学成分及其药理作用研究进展

露水草是鸭跖草科蓝耳草属一种多年生草本植物,属于彝族药的一种,植物蜕皮甾酮是露水草的主要活性成分之一,目前已鉴定出植物蜕皮甾酮、植物甾醇、植物甾酮苷、脂肪酸、萜及挥发油等多种化学成分,其中植物蜕皮甾酮的含量最为显著。植物蜕皮甾酮具有广泛的生物活性,在抗炎、抗肿瘤、保护神经系统、降低血糖血脂、心血管、骨骼系统以及器官保护等方面作用显著。本文总结了露水草中植物蜕皮甾酮类化学成分及其生物活性,为露水草的深度开发利用提供参考。

金匮肾气丸中马钱苷、京尼平苷酸、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮含量测定方法的建立

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定金匮肾气丸中马钱苷、京尼平苷酸、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮的含量。方法将金匮肾气丸样品研细、甲醇超声提取后,用Capcell Pak UG C_(18)色谱柱分离,柱温为28℃,京尼平苷酸、β-蜕皮甾酮、马钱苷和23-乙酰泽泻醇B检测波长分别设定为254、250、240、254 nm,进样体积为10μL,流速为1.0 mL·min^(-1),以乙腈为流动相A、3 mL·L^(-1)磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,外标法定量检测。结果京尼平苷酸、β-蜕皮甾酮、马钱苷和23-乙酰泽泻醇B质量浓度分别在0.0495~4.95、0.0981~9.81、0.0197~1.97、0.0983~9.83μg·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系;重复性RSD值(n=6)分别为1.62%、1.31%、1.76%、1.24%;平均加样回收率分别为100.05%、98.33%、99.97%、99.42%。结论该方法具有前处理简单、分析时间短、检测结果准确等优点,适用于金匮肾气丸的质量控制。

牛膝中牛膝甾酮25位异构体构型的确定及其抗肿瘤活性的研究

目的牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)中牛膝甾酮 2 5位异构体的分离、鉴定、构型确定以及肿瘤抑制活性的测定。方法利用硅胶吸附柱色谱和HPLC法进行分离 ,利用理化性质和波谱分析对化合物进行鉴定 ;利用体外实验法测定其活性。结果 2个非对映异构体化合物分别鉴定为 2 5 R牛膝甾酮 (2 5 Rinokosterone ,1)和 2 5 S牛膝甾酮 (2 5 Sinokosteone ,2 )。化合物 1具有一定的肿瘤抑制活性。结论 2个化合物均为首次从牛膝中分离得到 ,首次确定了其绝对构型 ,并首次对牛膝甾酮 2个 2 5位异构体进行了1H NMR、13 C NMR数据归属。牛膝中发挥肿瘤抑制作用的成分主要应为皂苷类成分。

在线能量分辨质谱结合量子化学计算解析牛膝中甾酮类同分异构体

甾酮是牛膝的活性成分之一,其同分异构体的难以区分给牛膝化学成分的精准鉴定带来了巨大挑战。在线能量分辨质谱(online energy-resolved mass spectrometry,Online ER-MS)被证明是一种区分同分异构体的有效方法。本研究首先采用超高效液相色谱-四极杆-串联飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)技术初步鉴定牛膝中的甾酮类化合物,为了进一步区分甾酮类同分异构体,利用超高效液相色谱-四极杆线性离子阱-串联质谱(UHPLC-Q-trap-MS/MS)的多反应监测模式采集各化合物拟离子对(pseudo-ion transitions,PITs)的碰撞能量(collision energy,CE)及相对离子强度,通过逐级改变CE绘制裂解曲线,定义裂解曲线顶点为最佳碰撞能(optimal collision energy,OCE),分别计算各化合物不同离子对的OCE。同时,结合量子化学计算各候选分子化学结构断裂的键能,建立化学结构与OCE的关系。结果表明,从牛膝中共鉴定到包括3组同分异构体的12个甾酮类化合物,并通过与标准品比对验证了该方法的可行性。在线能量分辨质谱与量子化学的结合能够实现同分异构体的高效区分,为中药中同分异构体的精准鉴定提供了新思路。

没药甾酮通过调控mTOR/自噬通路增强替莫唑胺抗脑胶质瘤的作用研究

目的:探讨没药甾酮增强化疗药物替莫唑胺抗脑胶质瘤的作用及其分子机制。方法:用没药甾酮、替莫唑胺单药及其联合处理U251细胞后,采用平板克隆形成实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测各组细胞增殖能力;采用Transwell小室实验、划痕愈合实验检测各组细胞侵袭、迁移能力;采用Western Blot检测细胞中mTOR/自噬通路关键蛋白的表达水平。结果:低氧条件下(200μmol/L的CoCl2诱导48 h),没药甾酮单药(10、30、100μmol/L)和替莫唑胺单药(6.25、12.5、25μmol/L)能显著抑制U251细胞克隆形成数(P<0.001);与替莫唑胺单药组(6.25、12.5μmol/L)比较,没药甾酮(10μmol/L)联合替莫唑胺(6.25、12.5μmol/L)抑制U251细胞克隆形成的作用增强,但差异无统计学意义(P>0.05)。没药甾酮单药(10、30、100μmol/L)和替莫唑胺单药(100、200、400μmol/L)显著下调了U251细胞EdU阳性细胞率;与替莫唑胺单药组(200、400μmol/L)比较,没药甾酮(30、100μmol/L)联合替莫唑胺(200、400μmol/L)显著下调了U251细胞EdU阳性细胞率(P<0.05或P<0.01)。与替莫唑胺单药(400μmol/L)比较,联用没药甾酮(30μmol/L)显著抑制U251细胞迁移、侵袭能力(P<0.001)。与替莫唑胺单药(400μmol/L)比较,联用没药甾酮(30μmol/L)显著下调U251细胞中Phospho-mTOR(Ser2448)、Phospho-4E-BP1(Ser65)蛋白表达,显著上调MAPKAP1、p-P70(S6K)蛋白表达(P<0.05或P<0.01),对mTOR、Phospho-mTOR(Ser2481)、Rictor、Raptor、GβL表达的下调也有一定的增强作用,但差异无统计学意义。与替莫唑胺单药(400μmol/L)比较,联用没药甾酮(30μmol/L)显著上调U251细胞中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62的表达(P<0.05~P<0.001),对Atg12-5/free-Atg12也有上调作用,但差异无统计学意义。结论:没药甾酮可通过调控mTOR/自噬信号通路增强替莫唑胺抗脑胶质瘤作用。

祁州漏芦中三种蜕皮甾酮类成分的高效液相色谱法分离和含量测定

应用高效液相色谱法对祁州漏芦(Rhaponticum uniflorum)中三种蜕皮甾酮类成分蜕皮甾酮(ecdysterone,Ⅰ),漏芦甾酮(rhapontisterone,Ⅱ)和土克甾酮(turkesterone,Ⅲ)进行分离和含量测定。色谱柱 Ultrasphere ODS(4.6mm×25cm),甲醇—水(40:60)为流动相,流速1.5ml/min,检测波长242nm。用外标法定量,比较了不同产地祁州漏芦根及其地上部分茎、叶和花中三种蜕皮甾酮的含量。

牛膝甾酮25位差向异构体的分离与鉴定

目的 分离并确定苋科植物怀牛膝 (AchyranthesbidentataBlume .)中牛膝甾酮 2 5位差向异构体的结构。方法 利用色谱技术分离纯化牛膝甾酮 2 5位差向异构体 ,用波谱 (IR ,UV ,MS ,NMR)方法及化学方法确定结构。结果 从怀牛膝的乙酸乙酯部位分离得到 3个化合物 ,分别鉴定为 2 5S 牛膝甾酮 (1,2 5S inokosterone) ,2 5R 牛膝甾酮 (2 ,2 5R inokosterone) ,β 蜕皮甾酮 (3,ecdysterone)。 结论 化合物 1和 2为首次从怀牛膝中分离得到的 2 5位差向异构体 ,首次确定了 2 5位绝对构型和发表该 2 5位差向异构体的1 3CNMR数据。

HPLC法同时测定怀牛膝中3种甾酮类成分

建立怀牛膝中3种甾酮类成分含量测定方法，比较不同产地牛膝的质量差异。色谱柱为Venusil XBP C18柱，流动相为0．1％甲酸-乙腈（84：16），检测波长为250nm。在所建立的方法中，β-蜕皮甾酮、R-牛膝甾酮和S-牛膝甾酮与杂质分离良好，线性范围分别为3．07—1470．00μg/mL（r=0．9994，n=6），0．52～246．00μg/mL（r=0．9997，n=6），0．47—225．00μg/mL（r=0．9998，n=6），平均回收率分别为101．4％、101．1％和101．1％。本方法适用于同时测定怀牛膝中β-蜕皮甾酮、R-牛膝甾酮及S-牛膝甾酮的含量。

蜕皮甾酮对皮肤光老化和黑色素生成的影响

目的观察蜕皮甾酮对皮肤光老化和黑色素生成的影响。方法①实验分为正常对照组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,各组分别处理角质形成细胞(HaCaT细胞)、黑素细胞(B16F10细胞)和人真皮成纤维细胞(HDF细胞)后,MTT法检测细胞活力。②实验分为正常对照组、UVB组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,Annexin V-FITC/PI双标法检测HaCaT细胞凋亡情况,Hoechst 33258染色法检测凋亡细胞的形态,Western blot法检测HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、环氧化酶-2(COX-2)、沉默调节蛋白1(Sirt-1)表达情况。③实验分为正常对照组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,Western blot法检测HaCaT细胞中透明质酸合成酶2(HAS-2)、转谷氨酰胺酶1(TGM1)和HDF细胞中Ⅰ型胶原蛋白Iα1肽链(COL1A1)表达情况。④实验分为正常对照组、黑色细胞刺激素组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组、熊果苷组,采用分光光度仪检测B16F10细胞黑色素生成及分泌情况。⑤实验分为正常对照组、左旋多巴组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,采用分光光度仪检测各组蘑菇酪氨酸酶活性。结果不同浓度的蜕皮甾酮对HaCaT细胞、B16F10细胞、HDF细胞活力均无明显影响。蜕皮甾酮各组HaCaT细胞凋亡率及HaCaT细胞中MMP-1、MMP-9、COX-2蛋白相对表达量均明显低于UVB组(P均<0.05),HaCaT细胞中Sirt-1蛋白相对表达量均明显高于UVB组(P均<0.05)。蜕皮甾酮各组HaCaT细胞中HAS-2、TGM1蛋白相对表达量和HDF细胞中COL1A1蛋白相对表达量均明显高于正常对照组(P均<0.05)。蜕皮甾酮各组和熊果苷组B16F10细胞黑色素生成和分泌吸光度值均明显低于黑色细胞刺激素组(P均<0.05)。蜕皮甾酮各组蘑菇酪氨酸酶活性均明显低于左旋多巴组(P均<0.05)。结论蜕皮甾酮可能具有延缓皮肤光衰老、抗皱和抗黑色素生成作用。

露水草中的植物甾酮类成分

为研究露水草 (CyanotisarachnoideaC .B .Clarke)中的化学成分 ,将露水草的乙醇提取液经中性Al2 O3 柱色谱 ,制备性薄层色谱 ,高效液相色谱分离得到 3种植物甾酮类成分 ,根据理化常数和波谱数据分析进行结构鉴定 ,3个化合物分别为罗汉松甾酮C(podecdysoneC) (1) ,土克甾酮(Turkesterone) (2 ) ,β 蜕皮甾酮 (β ecdysone) (3)。其中化合物 1、2为从该植物中首次分离得到。

中药祁州漏芦中的新植物甾酮

祁州漏芦为菊科漏芦属祁州漏芦〔Ｒｈａｐｏｎｔｉｃｕｍｕｎｉｆｌｏｒｕｍ（Ｌ．）ＤＣ．〕的干燥根．具有清热解毒、舒筋通络的功效．利用大孔树脂、硅胶柱层析及ＨＰＬＣ反相柱色谱法从中分离得到两个新的植物甾酮类成分，其中一个命名为漏芦甾酮Ｒ１（ｒｈａｐｏｎｔ...

选择性醛甾酮拮抗药在高血压治疗中的应用

醛甾(固)酮与其受体结合后通过增加水钠潴留加重高血压。醛甾酮拮抗药分为选择性和非选择性2 大类。醛甾酮受体拮抗药不仅有助于降低血压,而且可减少醛甾酮对心血管系统的不利作用,减少心室肥厚和心血管事件的发生率。

漏芦总甾酮质量标准研究

目的:建立漏芦总甾酮的质量标准。方法:采用薄层色谱法对漏芦总甾酮作定性鉴别,用高效液相色谱法对漏芦总甾酮中β-蜕皮甾酮进行定量分析,用紫外可见分光光度法对漏芦总甾酮含量进行检测。结果:定性鉴别斑点整齐,分离度好,易于区别;β-蜕皮甾酮含量测定平均加样回收率为99.8%,RSD=2.6%。结论:方法简便、准确,重现性好,阴性对照无干扰,可用于漏芦总甾酮的质量控制。

醛甾酮拮抗药在心力衰竭治疗中的应用

醛甾酮(醛固酮)可损害血管内皮功能,抑制纤维蛋白溶解系统,加重血管壁的损伤和动脉粥样硬化病变的进展,诱导心肌的肥厚、纤维化和坏死。在心力衰竭治疗中应用血管紧张肽转换酶抑制药后可发生醛甾酮“逃逸”,使血管紧张肽转换酶抑制药的作用削弱。依普利酮是选择性的醛甾酮拮抗药。随机螺内酯评估研究表明在心力衰竭治疗中加用醛甾酮拮抗药可使总死亡率降低30%。

筋骨草甾酮C的谱学特征

筋骨草甾酮Ｃ是分布于植物中的植物甾酮类化合物，具有抗氧化作用，本文标定了该化合物所有的碳信号，并通过＾１３Ｃ－＾１ＨＣＯＳＹ和＾１Ｈ－＾１ＨＣＯＳＹ技术纠正了文献中氢信号归属的错误。

蜕皮甾酮对缺血缺氧致血管内皮细胞损伤的影响

目的：研究存在于活血化瘀中药的单体成分─—蜕皮甾酮是否对血管内皮细胞损伤有保护作用。方法：采用缺血缺氧的血管内皮细胞模型，观察培养的人脐静脉内皮细胞上清液的乳酸脱氢酶（LDH）、血管紧张素转换酶（ACE）的变化。结果：缺血缺氧时，内皮细胞上清液的LDH、ACE明显增多；但应用蜕皮甾酮，则上清液的LDH、ACE较单纯缺血缺氧时明显减少。结论：蜕皮甾酮可能对缺血缺氧致血管内皮细胞损伤有一定的保护作用。