酯化酶甾醇O-酰基转移酶1在恶性肿瘤中作用的研究进展

甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)是一种位于内质网内的酯化酶,催化细胞内游离胆固醇转化为脂滴。SOAT1被发现在多种恶性肿瘤内高表达,并与恶性肿瘤增殖、侵袭迁移紧密相关。这表明SOAT1有潜力成为恶性肿瘤早期诊断的生物标志物和治疗新靶点。本文就SOAT1的结构、功能及其在恶性肿瘤中作用的相关研究进展进行综述。

纳米二氧化钛对小鼠卵巢组织中甾醇O-酰基转移酶1与类固醇合成急性调节蛋白表达的影响

目的研究纳米二氧化钛染毒对小鼠卵巢组织中甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)与类固醇合成急性调节蛋白(STAR)表达的影响。方法将48只40日龄清洁级ICR雌性小鼠随机分为4组,分别为对照(0.5%羧甲基纤维素)组和25、50、100 mg/kg纳米二氧化钛染毒组,每组12只。通过灌胃方式进行染毒,染毒容积为10 ml/kg,每天1次,连续染毒60 d。采用基因芯片检测100 mg/kg纳米二氧化钛染毒60 d小鼠卵巢组织中类固醇代谢相关基因表达的影响。采用实时定量PCR法检测100 mg/kg纳米二氧化钛染毒60 d后卵巢组织SOAT1与STAR基因表达的水平。使用ELISA法检测各剂量纳米二氧化钛染毒15、30、60 d后卵巢组织SOAT1与STAR蛋白水平。结果与对照组比较,以差异值≥13分或≤-13分为筛选标准,在100 mg/kg纳米二氧化钛染毒60 d小鼠卵巢中已知功能为类固醇代谢的差异表达基因中,Soat1、Star、Cyp17a1和Cyp11a1表达上调,Cyp2b1、Akr1c19和Cyp2a5表达下调。与对照组比较,100 mg/kg纳米二氧化钛染毒60 d小鼠卵巢中SOAT1与STAR基因实时定量PCR法的检测结果上调(P<0.01),与芯片结果一致。与对照组比较,50 mg/kg纳米二氧化钛染毒60 d和100 mg/kg纳米二氧化钛染毒30、60 d小鼠卵巢组织中STAR与STAR的蛋白水平上升,差异均有统计意义(P<0.05);且随着纳米二氧化钛染毒剂量的升高和染毒时间的延长,小鼠卵巢组织中SOAT1与STAR的水平呈现上升趋势。结论纳米二氧化钛暴露通过促进小鼠卵巢组织中SOAT1与STAR的表达,干扰卵巢类固醇代谢。

缺血性脑血管病患者血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性与其脂质代谢(英文)

背景:脂质代谢异常是缺血性脑血管病的危险因素之一。很多研究提出其与体内卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性变化有关。目的:观察缺血性脑血管病患者血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性与红细胞膜脂质成分含量变化的关系。设计:病例对照(实验组对照,标准对照)。单位:一所大学医学院附属医院的检验科、急诊室及神经内科。对象:2002-03/2003-12青岛大学医学院附属医院急诊神经门诊就诊及住院的脑血管病患者105例,均符合第二届全国脑血管病会议的诊断标准,选择脑动脉硬化患者42例和脑梗死63例构成两个患者组,其中男67例,女38例。同期选择在本院健康查体者65例构成对照组,男36例,女29例。方法:采集参与者空腹血8mL,采用酶学方法检测血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性和血清高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1和载脂蛋白B水平,采用邻苯二甲醛-醋酸硫酸方法测定红细胞膜胆固醇含量,采用化学定量法测定红细胞膜磷脂含量。主要观察指标:患者组与对照组卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性变化及红细胞膜脂质成分含量的变化。结果:按意向分析处理,105例患者组和65例对照组全部进入结果分析。①卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性:脑动脉硬化组和脑梗死组活性变化均明显低于对照组犤(2.14±0.72)kat/L,(2.06±0.80)

肿瘤坏死因子α对乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶1基因表达的影响

目的研究泡沫细胞形成过程中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)基因的影响。方法体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其分化为巨噬细胞,再由乙酰化低密度脂蛋白作用转变为泡沫细胞。TNF-α分别作用于上述三种细胞24 h,用W estern b lot法检测ACAT1蛋白表达,RT-PCR法检测ACAT1 mRNA水平。结果在单核细胞分化为巨噬细胞及转变为泡沫细胞的过程中,ACAT1蛋白及mRNA均增加(P均<0.05);TNF-α可上调三种细胞ACAT1蛋白表达及mRNA水平(P均<0.05)。结论单核细胞分化为巨噬细胞及转变为泡沫细胞的过程中,ACAT1基因表达明显增加,TNF-α可明显促进ACAT1基因表达。

葡萄糖对HepG2细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2表达的影响

目的探讨葡萄糖对HepG2细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(acyl-CoA:cholesterol acyltransferase-2,ACAT2)表达的调节作用及可能机制。方法用不同浓度的葡萄糖(5.5、12.5、25.0 mmol/L)作用HepG2细胞12 h,RT-PCR检测ACAT2和人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor 1α,HNF1α)mRNA的表达水平。将HNF1α的真核表达质粒瞬时转染HepG2,利用RT-PCR和Western blot检测高表达HNF1α对ACAT2表达的影响。利用凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察葡萄糖对HNF1α结合于ACAT2上游调控序列活性的影响。结果 25.0 mmol/L葡萄糖可上调HepG2细胞HNF1α和ACAT2的转录水平;HepG2细胞内过表达HNF1α可增强ACAT2的表达;高糖组HNF1α与ACAT2上游调控序列的结合活性明显增高。结论高糖可上调ACAT2的表达,其机制可能与高糖增强了HNF1α与ACAT2上游调控区域的结合活性有关。

脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸降低乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶活性

目的:已经发现随着细胞内胆固醇酯的积聚,脂肪分化相关蛋白的表达明显增加。本文进一步探讨脂肪分化相关蛋白干预细胞内胆固醇代谢的作用位点。方法:Ox-LDL组为80mg/L氧化低密度脂蛋白与C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,Ox-LDL+antisense组另加1mmol/L脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸,在不同的时点取样,共观察4d。使用荧光分光光度计观察细胞内胆固醇酯的改变;使用脂肪分化相关蛋白抗体间标法结合流式细胞术,观察脂肪分化相关蛋白表达量的变化;使用Ox-r[CL-3H]LDL和液体闪烁计数器观察细胞对氧化低密度脂蛋白摄入量的变化,并同时测定乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性。结果:72h后,Ox-LDL+antisense组细胞内胆固醇酯(19.9±1.9)mg/gprotein显著低于Ox-LDL组(46.6±3.4)mg/gprotein。4d观察期间,脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量两组细胞都增加,从12h时点开始,Ox-LDL组大于Ox-LDL+antisense组,在4d时点,Ox-LDL组明显高于Ox-LDL+antisense组。两组细胞摄入Ox-r[CL-3H]LDL的量逐渐增加,但是,Ox-LDL+antisense组摄入量从1d后明显低于Ox-LDL组,在2d和4d时点,两组差别仍有显著性。乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性从6h到2d表现为增加,在2d时点,两组比较差别显著,Ox-LDL+antisense组的活性明显低于Ox-LDL组。但从2d到4d,乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性稳定。ACAT的活性与脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量相关分析表明,Ox-LDL组R2=0.6176(P<0.05),Ox-LDL+antisense组R2=0.8212(P<0.05)。结论:抑制脂肪分化相关蛋白表达能引起细胞摄入外源性脂蛋白减少和乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性降低,提示脂肪分化相关蛋白与脂滴的代谢功能密切相关,且乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶有可能是其潜在的位点。

靶向胆固醇稳态小分子药物治疗胶质瘤的研究进展

胶质母细胞瘤(GBM)是成人中最具有侵袭性的恶性脑肿瘤。胆固醇是细胞的必要组分,胆固醇的合成、转运和代谢异常在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要作用。胆固醇代谢稳态相关调控因子如尼曼-匹克样C型蛋白(NPC1)、甾醇O-酰基转移酶(SO⁃AT1)已成为肿瘤治疗中潜在的新药物干预靶点。该研究阐述了部分靶向胆固醇稳态的小分子药物可能对GBM的治疗作用。

去泛素化酶OTUD3调控胆固醇酯化酶SOAT1蛋白稳定性的机制

目的鉴定胆固醇酯化酶甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)的去泛素化酶(DUB),探讨维持SOAT1蛋白稳定性的分子机制。方法采用Western blot方法检测多种肝癌细胞系中SOAT1的表达,在SOAT1表达较低的肝癌细胞系HCCLM3中加入蛋白酶体抑制剂MG132后检测SOAT1蛋白水平的变化,筛选人源卵巢肿瘤相关蛋白酶(OTU)家族中与SOAT1相互作用的DUB分子,通过泛素化实验检测其对SOAT1的去泛素化效应。结果SOAT1蛋白稳定性受到泛素-蛋白酶体系统的调控,对人源OTU家族进行无偏性筛选,显示OTUD3可以与SOAT1特异性结合,通过去除SOAT1的多聚泛素化,维持SOAT1的蛋白稳定性。结论在肝癌细胞中OTUD3是SOAT1的一个DUB,参与调控SOAT1蛋白稳定性。

肺炎衣原体通过上调酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1诱导人单核细胞株THP-1源性泡沫细胞形成的实验研究

目的观察酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1（ACAT1）在肺炎衣原体（C.pn）诱导泡沫细胞形成中的作用，初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的机制。方法人单核细胞株（THP-1）给予160nmol／L佛波酯（PMA）孵育48h，诱导分化为巨噬细胞后随机分为4组：阴性对照组、阳性对照组、C.pn感染组和ACAT抑制剂58-035＋C.pn感染组。分别运用RT-PCR和Western blot检测各组ACAT1 mRNA和蛋白表达。运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化，用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。结果C.pn感染呈浓度和时间依赖性地上调ACAT1 mRNA和蛋白表达。高浓度的C.pn（5×10^5和1×10^6 IFU）感染THP-1源性巨噬细胞48h后，细胞浆内脂滴明显增多，胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加（〉50％）。ACAT抑制剂58-035可以抑制C.pn诱导的细胞浆内脂滴的增多。随着58-035浓度的增加，逐渐抑制C.pn诱导的细胞内胆固醇酯含量的增加。结论ACAT1表达上调是C.pn诱导泡沫细胞形成的机制之一，这可能为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。

卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因608C／T和511C／T多态性与湖南地区汉族人卒中的关系

目的探讨卯磷脂胆固醇酰基转移酶（lecithincholesterolacyltransferase，LCAT）基因608C／T和511C／T多态性与中国湖南地区汉族人群卒中发病的关系。方法选择150例脑梗死、150例脑出血患者以及122名年龄和性别相匹配的对照者，应用聚合酶链反应、单链构象多态性技术和限制性片段长度多态性技术检测LCAT基因608C／T和511Cff多态性。结果脑梗死组LCAT基因608C／TCT基因型频率（14．0％）和T等位基因频率（7．0％）均显著高于对照组（P均〈0．01），而脑出血组CT基因型频率（7．3％）和T等位基因频率（3．7％）与对照组无显著差异（P〉0．05）；脑梗死组I．CAT基因511C／TCT基因型频率（10．0％）和T等位基因频率（5．0％）均显著高于对照组（P均〈0．01），而脑出血组CT基因型频率（3．3％）和T等位基因频率（1．7％）与对照组无显著差异（P〉0．05）。结论LCAT基因608C／T和511C／T多态性可能与中国湖南地区汉族人群动脉粥样硬化性脑梗死发病有关，可能为该人群动脉粥样硬化性脑梗死的易感因素，而与脑出血发病无关。

葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响

研究葡萄糖对人THP-1单核分化巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达的影响。发现高糖作用下,巨噬细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达增加。

同型半胱氨酸对高密度脂蛋白逆转运和抗氧化功能的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对HDL逆转运和抗炎抗氧化功能的影响。方法选择顺德第一人民医院住院患者120例,根据血Hcy水平,将患者分为正常对照组60例和高Hcy组60例,记录患者的人口学特点和检测血液生化指标,同时测定患者血卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)和胆固醇酯转运蛋白(CETP)水平,患者HDL颗粒中的对氧磷酶1(PON1)、髓过氧化物酶(MPO)活性以及脂质过氧化物(LPO)含量。结果与正常对照组比较,高Hcy组患者血LCAT[(925.6±127.0)U/mg vs(1015.3±131.1)U/mg,P=0.000]、CETP[(26.3±4.1)μg/mg vs(34.6±5.0)μg/mg,P=0.000]和PON1[(213.4±71.4)U/ml vs(416.5±85.1)U/ml,P=0.000]活性显著降低,MPO[(4.8±1.9)U/L vs(3.3±1.5)U/L,P=0.000]活性和LPO[(0.93±0.08)U/L vs(0.83±0.09)U/L,P=0.000]含量显著升高。结论高Hcy通过降低血LCAT、CETP浓度,降低HDL胆固醇逆转运功能,并通过降低HDL颗粒中PON1活性,升高HDL颗粒中MPO活性,导致HDL颗粒中LPO含量升高,从而降低HDL的抗炎抗氧化功能。

SOAT1在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)在肝细胞癌(HCC)组织及癌旁组织中的表达,探索其与患者预后及临床病理特征之间的相关性。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集HCC数据集,下载SOAT1 mRNA表达谱及预后资料,比较SOAT1 mRNA在50例正常肝组织与374例HCC组织中的表达,分析表达量与患者预后相关性。收集53例HCC患者石蜡组织标本,采用免疫组织化学方法检测癌和癌旁组织中SOAT1的蛋白表达水平,并分析其与临床病理特征之间的相关性。结果:TCGA数据库数据分析显示,与癌旁正常组织比较,SOAT1在HCC中表达显著升高(P<0.01)。预后生存分析发现SOAT1高表达患者的5年生存率较低(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,与癌旁组织相比,HCC组织中SOAT1蛋白表达量显著升高(P<0.05)。癌组织中SOAT1蛋白表达量与肿瘤临床分期及微血管癌栓形成相关(P<0.05)。结论:SOAT1在HCC组织中表达增高,并与HCC癌患者的临床病理特征密切相关,其表达与肿瘤恶性程度高度相关。

胰岛素对高糖诱导HepG2细胞ACAT2表达的影响

目的探讨胰岛素对高糖诱导人肝癌组织(HepG2)细胞中酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(ACAT2)表达的影响。方法将培养好的HepG2细胞以0.7×106L-1密度接种于6孔培养板内过夜培养,加入无血清培养基继续培养24 h后分别用正常培养基(对照组)、含终浓度为25 mmol/L甘露醇溶液(甘露醇组)和25 mmol/L葡萄糖溶液(高糖组)培养基分别与细胞孵育12 h;胰岛素组用含总浓度25 mmol/L葡萄糖培养基与细胞孵育4 h后,加入终浓度为30 mU/L胰岛素再孵育8 h。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测ACAT2的表达水平。结果高糖组HepG2细胞ACAT2表达明显高于对照组(P<0.01),胰岛素组ACAT2表达显著低于高糖组(P<0.01)。结论胰岛素可下调高糖诱导的ACAT2的表达。

阿伐麦布通过SOAT1重塑胆固醇代谢抑制肾透明细胞癌增殖的研究

目的筛选有效抑制肾透明细胞癌(ccRCC)增殖的小分子抑制剂,探讨阿伐麦布通过其作用靶标甾醇O-酰基转移酶1(SOAT1)对ccRCC的抑制作用。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK8)法筛选脂代谢化合物库中能够显著抑制ccRCC细胞活力的小分子抑制剂,测定对照组、敲低/过表达SOAT1组ccRCC细胞活力变化。总胆固醇和胆固醇酯荧光测定试剂盒检测对照组、阿伐麦布组及敲低SOAT1组ccRCC细胞内胆固醇酯含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测SOAT1 mRNA表达量变化;蛋白质印迹法检测SOAT1表达量;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成变化。2组比较采用独立样本t检验。结果在2轮药物筛选中,与对照组相比(1.00),阿伐麦布组769-P(第1轮:0.01±0.02,t=75.50,P<0.001;第2轮:0.02±0.00,t=348.67,P<0.001)与Caki-1(第1轮:0.53±0.01,t=62.28,P<0.001;第2轮:0.02±0.00,t=440.25,P<0.001)细胞活力均降低。阿伐麦布在ccRCC中的半数抑制浓度(IC_(50))测定结果显示,769-P(IC_(50)为43.94μmol/L)、Caki-1(IC_(50)为48.01μmol/L)较HK-2(IC_(50)为49.65μmol/L)、ACHN(IC_(50)为55.36μmol/L)、786-O(IC_(50)为56.29μmol/L)和A498(IC_(50)为61.75μmol/L)细胞对阿伐麦布更敏感,P<0.001。与对照组相比,阿伐麦布组中769-P[(855.27±17.49)μmol/L vs(798.97±15.49)μmol/L,t=4.17,P=0.014]和Caki-1[(825.77±10.10)μmol/L vs(665.88±32.40)μmol/L,t=8.16,P=0.001]细胞内胆固醇酯含量均减少。与对照组(1.00±0.05)相比,敲低SOAT1显著抑制SOAT1 mRNA在769-P(0.46±0.02)和Caki-1(0.33±0.02)细胞中的表达,差异有统计学意义,t值分别为17.15和20.39,均P<0.001;与对照组(1.00±0.00)相比,SOAT1蛋白表达量在769-P(0.38±0.14)和Caki-1(0.41±0.07)中均降低,差异有统计学意义,t值分别为7.95和15.26,P值分别为0.001和<0.001。敲低SOAT1后,与对照组(1.00)相比,769-P(0.63±0.06)和Caki-1(0.58±0.07)细胞增殖能力降低,差异有统计学意义,t值分别为10.54和10.95,均P<0.001;克隆形成能力(769-P:178.00±4.00 vs 85.33±4.16;Caki-1:235.67±6.81 vs 140.67±6.43)降低,差异有统计学意义,t值分别为27.80和17.54,均P<0.001;细胞内胆固醇酯含量[769-P:(1047.45±20.16)μmol/L vs(885.88±14.07)μmol/L;Caki-1:(1273.24±29.51)μmol/L vs(1102.49±36.17)μmol/L]均减少,差异有统计学意义,t值分别为11.38和6.34,P值分别为<0.001和0.003。过表达SOAT1769-P(0.69±0.03 vs 0.44±0.03)细胞活力升高,t=9.89,P<0.001。结论阿伐麦布通过SOAT1重塑胆固醇代谢抑制ccRCC增殖,SOAT1可能是治疗ccRCC的新靶点。