番泻叶苷A对糖尿病肾病大鼠足细胞自噬的影响

目的探究番泻叶苷A(sennoside A,SA)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞自噬及上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的作用机制。方法随机选择10只雄性Wistar大鼠作为正常组,剩余大鼠尾静脉注射55 mg·kg^(−1)链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导DN大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、SA低剂量组、SA高剂量组及贝那普利组,每组10只。SA低剂量组、SA高剂量组大鼠每日分别灌胃给予SA 40、80 mg·kg^(−1),贝那普利组大鼠每日灌服给予盐酸贝那普利10 mg·kg^(−1),模型组及正常组大鼠每日灌服等量生理盐水,连续给药21 d。检测24 h尿白蛋白(albumin,Alb)含量、大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血肌酐(serum creatinine,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;染色观察肾组织学变化;透射电镜观察肾脏组织自噬体形成情况;蛋白印迹法(Western blotting)检测肾组织中微管相关蛋白1轻链3(icrotubule associated protein 1 light chain 3,LC3)、Bcl-2相互作用蛋白1(Bcl-2 interacting protein 1,Beclin-1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、波形蛋白(vimentin,Vim)、沉默信息调节因子1(silencing information regulator 1,Sirt1)和肾病蛋白nephrin蛋白的相对表达水平。结果与正常组比较,其他4组大鼠24 h Alb含量、FBG及Scr、BUN水平升高,肾小球和肾小管发生病理损伤,胶原纤维及糖原明显沉积,肾小球系膜及基底膜增厚,肾组织中自噬体数量减少,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、E-cad、nephrin及Sirt1蛋白的相对表达量降低,Vim蛋白的相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组大鼠24 h Alb含量、FBG及Scr、BUN水平降低,肾小球和肾小管病理损伤情况呈不同程度减轻,胶原纤维及糖原沉积减弱,肾小球系膜及基底膜增厚情况改善,自噬体数量增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、E-cad、nephrin及Sirt1蛋白的相对表达量升高,Vim蛋白的相对表达量降低(P<0.05);SA低剂量组、SA高剂量组及贝那普利组对DN大鼠的作用效果逐渐增强(P<0.05)。结论SA可改善DN大鼠肾功能障碍,其作用机制可能与激活Sirt通路进而促进足细胞自噬并减轻EMT有关。

番泻叶苷A基于AMPK/Nox4信号通路对糖尿病肾病小鼠的作用

目的探讨番泻叶苷A(sennoside A,SA)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠糖脂代谢和肾功能的影响及作用机制。方法取80只小鼠,64只以高脂喂养联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射法建立DN模型,随机分为模型组及SA低剂量、中剂量和高剂量组,各16只,剩余16只未建立模型的小鼠作为对照组。SA低剂量、中剂量和高剂量组每天分别腹腔注射SA(15、30、60 mg·kg^(-1))3 mL,对照组和模型组注射生理盐水3 mL。连续28 d。比较各组小鼠肾脏指数、肾功能指标、糖脂代谢、形态学差异、转化生长因子-β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphatase oxidase 4,Nox4)蛋白的表达水平。结果SA各剂量组肾脏指数、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿总蛋白(24 hours urinary total protein,24 h UTP)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、胆固醇(cholesterin,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FBG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbAlc)、TGF-β_(1)、TNF-α和MDA水平及Nox4蛋白水平较模型组降低;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、SOD水平和p-AMPK蛋白水平较模型组升高;且均呈剂量依赖性(P<0.05)。结论SA可有效恢复DN小鼠肾功能,改善糖脂代谢紊乱,降低炎症反应和氧化应激损伤,其可能与调控AMPK/Nox4信号通路有关。

基于Nrf2/HMOX-1铁死亡信号通路探讨番泻叶苷A治疗糖尿病肾病的机制

目的:探究番泻叶苷A对糖尿病肾病铁死亡的作用机制。方法:6周龄雄性C57BL/6J小鼠分为正常对照组和造模组。造模成功小鼠分为番泻叶苷A(SA)组和模型组,各10只。Western Blot法检测Nrf2、HMOX-1、GPX4的蛋白变化情况;GSH和MDA试剂盒检测氧化应激水平;DAB染色法检测PTGS2阳性细胞表达。结果:模型组Nrf2、HMOX-1蛋白表达量明显升高,GPX4表达显著降低;PTGS2阳性细胞表达明显增加;MDA水平显著增加、GSH活性明显降低。番泻叶苷A组明显改善氧化应激反应,下调Nrf2、HMOX-1、PTGS2的表达,增加GPX4的表达。结论:糖尿病肾病存在铁死亡,番泻叶苷A可以抑制铁死亡水平,其机制可能与抑制Nrf2/HMOX-1信号通路有关。

番泻叶颗粒剂的研制及应用

参照《中国药典》及相关文献 ,考察了 30 %乙醇、5 0 %乙醇、70 %乙醇、95 %乙醇对活性成分番泻苷的浸出率。结果发现以 5 0 %乙醇为溶媒浸出率最高。从而确定了番泻叶颗粒剂的制剂工艺。同时制定出番泻叶颗粒剂的相关定性、定量及剂量标准。

通便灵胶囊质量标准研究

目的：建立通便灵胶囊的质量标准。方法：采用TLC法对番泻叶、当归进行定性鉴别;采用HPLC法对样品中番泻苷B进行定量测定。色谱条件：色谱柱为Agilent HC-C18,（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-7.6 mmol/L四正丁基溴化铵醋酸-醋酸钠缓冲液（p H 5.0）（33∶67）;流速为1.0 m L·min-1;检测波长：340 nm;柱温：25℃。结果：薄层定性鉴别的斑点清晰,分离效果良好;番泻苷B含量在0.001~0.144 mg/m L范围内线性关系良好（r=0.9997）,平均加样回收率为103.48%,RSD为1.25%（n=6）。结论：该方法操作简便、专属性、重复性良好,可有效控制通便灵胶囊的质量。

基于指纹图谱及多指标成分定量的通便灵胶囊质量评价

目的:建立通便灵胶囊的HPLC指纹图谱和同时测定番泻叶苷A、番泻叶苷B、毛蕊花糖苷、松果菊苷及异毛蕊花糖苷含量的方法,为通便灵胶囊的质量控制提供可靠的参考。方法:采用SHIMADZU VP-ODS(250 mm×4. 6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-甲醇(1∶1)与0. 3%冰醋酸溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0. 8 ml·min-1,柱温为30℃,切换波长270 nm及340 nm。建立通便灵胶囊指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004A版)确定共有峰,计算相似度;并对番泻叶苷A、番泻叶苷B、毛蕊花糖苷、松果菊苷及异毛蕊花糖苷的含量测定方法进行方法学验证。结果:10批通便灵胶囊指纹图谱标定了共有峰16个,通过与混合对照品比较指认其中5个指标成分分别为番泻叶苷A、番泻叶苷B、毛蕊花糖苷、松果菊苷及异毛蕊花糖苷,利用相似度软件对10批样品指纹图谱进行分析,各批样品相似度均在0. 98以上。上述5个有效成分含量测定方法经验证,线性范围分别为3. 554～88. 850μg·ml^(-1),4. 268～106. 700μg·ml^(-1),6. 751～168. 700μg·ml^(-1),8. 966～224. 100μg·ml^(-1),7. 247～181. 100μg·ml^(-1),r≥0. 999 7;平均回收率分别为99. 3%(RSD=0. 5%)、100. 2%(RSD=0. 8%)、101. 1%(RSD=1. 0%)、100. 6%(RSD=0. 7%)和98. 9%(RSD=0. 4%)(n=6)。结论:本文所建立的通便灵胶囊HPLC指纹图谱及主要成分含量测定方法,能全面反映其内在质量,可用于通便灵胶囊的质量控制。