番泻苷B通过Wnt/β-catenin通路抑制视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、凋亡和侵袭

目的探究番泻苷B对视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、凋亡、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过采用不同剂量(0、5、10、20μmol/L)番泻苷B处理HXO-Rb44细胞,将细胞随机分为4组:Control组,番泻苷B 5、10、20μmol/L组。MTT法检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell检测侵袭细胞数;细胞成球实验检测细胞成球直径和细胞成球数目;蛋白质印迹检测cleaved caspase-3、caspase-3、MMP-2、MMP-9、SOX2、OCT4、CD44、Wnt1、β-catenin蛋白表达。结果与Control组比较,番泻苷B 10、20μmol/L组细胞活力、克隆形成率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和cleaved caspase-3/caspase-3表达显著升高(P<0.05),侵袭细胞数和MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞成球直径、细胞成球数目和SOX2、OCT4、CD44蛋白表达显著降低(P<0.05),Wnt1、β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论番泻苷B可抑制视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞增殖、侵袭和干细胞样特性,诱导细胞凋亡,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。

番泻苷A对2型糖尿病小鼠动脉粥样硬化斑块形成及5-羟色胺信号分子表达的影响

目的·研究番泻苷A (sennoside A,SA)对2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)小鼠动脉粥样硬化斑块形成和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)及其受体表达的影响。方法·将载脂蛋白E基因敲除小鼠12只随机分为模型组(model组)和治疗组(model+SA组),每组6只,同遗传背景C57BL/6J小鼠6只作为对照组(control组)。Control组普通饲养,model组和model+SA组在高脂饲养基础上每日给予腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立T2DM模型。Model+SA组每日给予SA (45 mg/kg)灌胃干预8周,control组和model组给予等体积双蒸水灌胃。比较造模及治疗前后小鼠体质量、空腹血糖和餐后2 h血糖情况,采用油红O染色和苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)观察小鼠主动脉斑块面积,并用ELISA试剂盒测定小鼠血清和胸主动脉中5-HT水平,采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测小鼠胸主动脉中5-羟色胺2B受体(5-hydroxytryptamine receptor 2B,HTR2B)和5-羟色胺转运蛋白(serotonin transporter,SERT)的表达情况。结果·与control组相比,model组小鼠体质量、空腹血糖和餐后2 h血糖均升高,糖代谢紊乱;主动脉斑块形成,胸主动脉中HTR2B、SERT蛋白表达升高;胸主动脉5-HT浓度降低,血清5-HT浓度升高(均P<0.05)。给予SA治疗后,与model组相比,model+SA组小鼠体质量下降,空腹血糖和餐后2 h血糖水平明显改善;主动脉斑块面积减少,胸主动脉HTR2B、SERT蛋白表达显著降低;胸主动脉5-HT浓度升高,血清5-HT浓度降低(均P<0.05)。结论·SA可减少T2DM小鼠动脉粥样硬化斑块面积,其作用可能与降低血糖、抑制5-HT及其受体表达有关。

液质联用法定性检测熟大黄配方颗粒中的土大黄苷和番泻苷A

目的:应用液质联用法定性检测熟大黄配方颗粒中土大黄苷和番泻苷A。方法:采用HPLC-MS/MS法同时检测土大黄苷和番泻苷A,使用Welch UHPLC XB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.8μm),采用0.1%甲酸水-甲醇梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL·min^(-1),采用ESI离子源,多反应模式(MRM)模式。结果:该方法对土大黄苷和番泻苷A的检出浓度分别为:2.0 ng·mL^(-1)、8.0 ng·mL^(-1),用该方法检测了山东省内市售的8批熟大黄配方颗粒,均未检出土大黄苷和番泻苷A。结论:该方法专属性强,灵敏度好,能快速定性检查熟大黄配方颗粒中是否含有土大黄苷和番泻苷A,可用于熟大黄(药用大黄)配方颗粒的质量控制。

HPLC测定番泻总苷提取物中番泻苷A、番泻苷B的含量

目的:建立测定番泻总苷提取物中番泻苷A和番泻苷B的含量方法(高效液相法)。方法:采用ZORBAX Ec lipseXDB-C8柱,以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,340 nm为检测波长。结果:番泻苷A在0.218 8μg到1.094 0μg范围内呈良好的线性关系(r=1.000 0),番泻苷B在0.262μg到1.310μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9)。结论:采用HPLC直接测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B的含量,方法简单快捷,结果可靠,可作为番泻总苷提取物质量控制的方法。

大黄的炮制及不同炮制品番泻苷A和番泻苷B含量测定方法的建立

目的建立反相高效液相色谱法测定大黄不同炮制品中番泻苷A和番泻苷B的含量。比较其含量差异,揭示中药炮制前后物质基础的变化规律。方法建立采用HPLC法,色谱柱为Inertsil 0DS-3 C18柱(4.60 mm×250 mm, 5μm),流动相∶甲醇-0.1%磷酸(28∶72),检测波长329 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10μL,梯度洗脱。结果反相高效液相色谱法测定番泻苷A和番泻苷B,线性方程为:番泻苷A:Y=836.27X-12.551,番泻苷B:Y=668.74X-12.965,分别在0.120 5-1.205(R^2=0.999 7)、0.116-1.160(R^2=0.999 1)的线性范围内呈良好线性关系,大黄不同炮制品中番泻背A和番泻背B的含量差异显著,或增或减,说明炮制工艺对中药大黄各成分影响不同。结论:建立了高效液相色谱法测定大黄不同炮制品中番泻苷A和番泻苷B的含量,该方法可作为大黄及其不同炮制品的质量控制研究的方法。

HPLC法测定不同产地大黄中番泻苷A和番泻苷B的含量

目的采用HPLC法测定大黄中番泻苷A和番泻苷B的含量。方法色谱柱E1718897 Hypersil C18(4.6mm×250mm,25μm),流动相为四氢呋喃-水-醋酸(15∶85∶1.5),流速为0.8mL/min。结果番泻苷A的含量在0.176～1.76g/L范围内呈良好的线性关系(r=0.999 5),番泻苷B的含量在0.12～1.2g/L范围内呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均加样回收率番泻苷A为100.44%(RSD=2.44%),番泻苷B为101.37%(RSD=2.28%)。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于大黄药材中番泻苷A、B含量的测定。

HPLC法测定番泻叶中番泻苷A、番泻苷B的含量

目的建立测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B含量的方法(高效液相法)。方法采用ZORBAX Eclipse XDB-C8柱,以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,340nm为检测波长。结果番泻苷A在0.2188μg～1.0940μg范围内呈良好的线性关系(r=1.0000),番泻苷B在0.262μg～1.310μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)。结论采用HPLC直接测定番泻叶中番泻苷A和番泻苷B的含量,方法简单快捷,结果可靠,可作为番泻叶质量控制的方法。

番泻的不同部位中番泻苷A、B的含量研究

通过方法学考察,确定了简便、快速的番泻苷A、B HPLC含量检测法,其条件为Supersil-T C18柱,流动相为乙腈-0.4%磷酸水,其检测的波长为340 nm,柱温在25℃;流速为1.0 mL·min^-1;进样量是10μL。从研究我们可以发现,番泻叶以及番泻豆荚等不同部位中番泻苷A、B的含量得出,番泻豆荚中番泻苷A和B中的总含量要比番泻叶高,而且在不同部位含量也是不一样的:豆荚壳>叶片≈叶柄>果柄>种子。

高纯度番泻苷A和高纯度番泻苷B的制备研究

本次研究主要选取的是番泻苷A以及番泻苷B,两者的原材料含量均在百分之二十六以上,分离的方法主要是采用硅胶柱层析的方法对其进行分离,所用到的洗脱剂主要是乙酸乙酯,水和正丙醇,可以对洗脱液进行收集,使其能够快速结晶,从而就会得到结晶状的番泻苷A,颜色一般为亮黄色,含量在百分之九十七。将经过一次过柱所得的含量为71.88%的番泻苷B粉末为原料再进行第二次过柱,接着依次收集洗脱液,然后结晶,可以得到番泻苷B黄色针状结晶,其含量为95.42%,得率为百分之一点一二。

番泻苷对小鼠肠道运动功能的影响及相关机制研究

目的 :评价大黄提取二蒽酮类衍生物 (番泻苷 ,sennoside ,SEN)对小鼠肠道运动功能的影响 ,并探讨其相关机制。方法 :采用小鼠湿粪记数试验观察番泻苷对小鼠肠道运动功能的影响 ;采用放射免疫分析法检测小鼠小肠组织胃动素 (motilin ,MTL)、生长抑素 (somatostatin,SS)的水平 ;采用分光光度法测定小肠粘膜Na+ K+ ATP酶的活性。结果 :番泻苷各剂量均能增强小鼠的排便功能 ,与正常对照组相比有显著差异 ;番泻苷各剂量均能显著提高小鼠小肠组织胃动素的含量 ,而降低生长抑素的水平 ;番泻苷各剂量组小鼠小肠粘膜Na+ K+ ATP酶活性显著低于正常对照组。结论 :番泻苷能增强小鼠的肠道运动功能 ,具有润肠通便之功效 ,其机制可能与促进肠道胃动素释放 ,降低肠道生长抑素水平和抑制小肠粘膜Na+ K+

高效毛细管电泳法测定番泻叶中番泻苷A的含量

目的:对番泻叶中的有效成分番泻苷A进行含量测定。方法:采用毛细管胶束电动色谱,熔融石英毛细管柱(57cm×75μm,有效长度50cm),电解缓冲液:37.5mmol·L^(-1)Tris,25％乙腈,1mmol·L^(-1)SDS,稀磷酸调pH至8.9;柱温:25℃;柱上紫外检测波长:214nm。结果:回归方程为Y=-921.4+2 158 848X,r=0.9998,平均回收率为99.56％,RSD为1.2％(n=5)。结论:本方法简便、快速,重现性好。

高效液相色谱法测定番泻叶及其配方颗粒中番泻苷A的含量

目的：建立高效液相色谱法测定番泻叶及其配方颗粒中番泻苷A含量的方法.方法：色谱柱为Alltima-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为四氢呋喃-水-醋酸（15∶85∶1.5）;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为365 nm;柱温：30℃.结果：番泻苷A在0.02～0.1 g·L^-1时线性关系良好.回归方程为A=57.14X＋9.61,r=0.999 1.加样回收率为99.04%,RSD为1.27%.结论：该方法操作简便,可靠,易行.

番泻苷A对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠肾损伤和炎症反应的调节作用

目的探索番泻苷A(Sennoside A,SA)对链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠肾损伤和炎症反应的影响。方法 40只大鼠随机分为4组:对照组(Control组)、番泻苷A对照组(SA组)、糖尿病肾病模型组(STZ组)和番泻苷A处理组(STZ+SA组)。应用全自动生化分析仪检测尿蛋白、血清肌酸酐和尿素氮。蛋白印记检测Caspase-3、Caspase-9表达。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP nick labeling,TUNEL)染色检测肾脏组织细胞凋亡。酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测白细胞介素(Interleukin,IL)-1β和IL-18水平。免疫组织化学染色检测肾脏组织纤连蛋白(Fibronectin,FN)表达。结果 STZ组大鼠尿蛋白、血清肌酐、尿素氮、IL-β、IL-18水平,Caspase-3、Caspase-9、Fibronectin表达,以及大鼠肾脏组织细胞凋亡率均高于对照组、STZ+SA组(P <0.01)。结论番泻苷A可减轻STZ诱导的糖尿病肾病大鼠肾损伤和炎症反应。

不同浸泡方法对番泻叶中番泻苷A浸出率的影响比较

目的考察不同浸泡方法对番泻叶中番泻苷A浸出率的影响。方法对影响番泻苷A浸出率的温度、浸泡时间、浸泡次数等3因素进行3水平正交处理,对不同提取液采用高效液相色谱法测定其中番泻苷A含量[固定相:A lltim a-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:四氢呋喃∶水∶醋酸(15∶85∶1.5);流速:1.0 mL.m in-1;检测波长:365 nm;柱温:30℃],计算浸出率。结果温度对浸出液中番泻苷A含量影响较大,最佳条件为100℃水浸泡4次,每次30 m in。结论临床使用番泻叶时可用100℃水浸泡3或4次,每次30 m in,合并服下。

用正交试验研究番泻叶中总番泻苷的醇回流浸出方法

本文用正交试验法，建立了由番泻叶中浸出总番泻苷的醇回流提取方法。优选出最佳提取条件：乙醇浓度为55％，药物与醇的比例为1：12．5（g：ml），回流时间为第一次15min，第二次10min，浸泡时间为omin。提取效率考察证明：该法提取总番泻苷为其含量的99．64％。

肠必清肠溶颗粒剂的总番泻苷含量测定

目的 建立肠必清肠溶颗粒剂的总番泻苷含量的质量标准。方法 采用分光光度法 ,总番泻苷以番泻苷B(C4 2 H3 8O2 0 )的吸收系数 (E1%1cm)为 2 40计算。结果 该制剂总番泻苷含量不应低于 18 0mg·g-1。结论 本方法简单、准确 ,可用于该制剂质量控制。

HPLC法测定大黄药材和饮片中番泻苷A和番泻苷B的含量

目的：建立大黄药材和饮片中番泻苷A和番泻苷B高效液相（HPLC）含量测定方法，探讨炮制对大黄番泻苷成分的影响。方法：采用HPLC法，色谱柱：Kromasil ODS（4.6×250 mm，5μm）；流动相：四氢呋喃-水-醋酸（20∶80∶1.5）；流速：0.8 mL/min；检测波长：350 nm，对大黄药材和饮片进行含量测定。结果：大黄药材番泻苷总量在0.304%-1.450%之间，均值0.892%。生大黄饮片番泻苷总量在0.104%-0.841%之间，均值0.303%，酒大黄饮片番泻苷总量在0.054%-0.374%之间，均值0.186%。结论：大黄药材经过炮制番泻苷有较大损失，生大黄、酒大黄饮片含有番泻苷，熟大黄不含番泻苷。

HPLC法测定番泻叶滴丸中番泻苷B的含量

建立番泻叶滴丸中番泻苷B的含量测定方法．采用高效液相色谱法测定含量；ODS柱，流动相A为乙腈，B为醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pn值为5．0）（1：10），加入3．77g四庚基溴化氨，A与B的比例为14：86（V：V），检测波长为340nm，流速为1．0mL／min．番泻苷B的线性范围为0．4～1．4μg（r=0．9998），回收率（n=6）为98．33％（RSD=0．6％）．本方法简便准确，重现性好．