人腰椎小关节软骨不同染色方法的差异比较

背景:随着现代病理技术的不断创新及发展,在疾病诊断方面显著减少其误诊率,但特殊染色法依然是病理诊断的最主要手段。目的:比较不同的特殊染色方法显示人腰椎小关节结构的优缺点。方法:收集腰椎手术患者的L4/5小关节软骨标本,行苏木精-伊红染色、番红O染色、甲苯胺蓝染色、Masson染色、番红-固绿染色,观察软骨结构。结果与结论:苏木精-伊红染色、番红-固绿染色和甲苯胺蓝染色均可清晰观察到关节软骨各层结构。其中苏木精-伊红染色能较清楚显示软骨层、潮线及软骨下骨,软骨细胞核呈蓝紫色。番红-固绿染色清晰显示软骨4层结构:浅层(软骨表面),中间层(细胞圆形,着色较淡,排列规律),柱状细胞层(细胞较大,多核,排列整齐),显示软骨基质呈均匀浅红,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明。甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色。而番红O染色软骨层及软骨下骨层分界比较清晰,软骨层呈均匀深红色,细胞染色较淡,与软骨基质分界不明显。Masson染色对胶原纤维较为清晰,但只能大致显示软骨与软骨下骨结构。结果说明番红-固绿染色显示软骨各层和软骨下骨结构最佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚,Masson染色最次。

橡胶树树皮细胞木质素显示方法的比较分析

巴西橡胶树是最重要的人工栽培产胶植物,树干割胶是当前从橡胶树乳管组织中获取天然橡胶的唯一途径。割胶后的排胶特性直接决定胶乳的产量,但其排胶机理目前尚不完全清楚。橡胶树树皮的膨压是乳管排胶的主要初动力,而细胞壁的主要成分木质素含量的高低与膨压密切相关。目前关于橡胶树树干树皮细胞中木质素含量的研究较少,缺乏通过形态结构研究分析木质素含量高低的研究。以橡胶树RY8-79和PR107成龄树树皮为研究材料,制备石蜡切片,分别以Wiesner反应方法、Maule反应方法以及番红染色结合荧光显色的方法对树皮组织中的木质素进行了染色定位分析。研究结果表明:光镜明场下,Wiesner反应方法和Maule反应方法能显色薄壁细胞壁中的木质素成分,但颜色浅淡,很难区分不同品系之间的差异;番红染色后能观察到薄壁细胞中浅紫红色的木质素成分,但不同组织以及不同品系之间同样很难区分;番红显色后结合546 nm绿光激发则能观察到木质素组织明显的红色荧光,不同细胞类型和不同品系之间差异明显,RY8-79薄壁细胞中木质素荧光明显弱于PR107,表明该品系中木质素的含量低于PR107。碘-溴染色显示次生乳管的结果表明,次生乳管分布的位置和木质素显色较深尤其是荧光强的部位一致。由此推测乳管及其周围的细胞中木质素含量较高,这一现象在PR107中尤其明显。此外,Wiesner反应和Maule反应不仅需要间苯三酚、盐酸和高锰酸钾(KMnO_(4))等危险化学试剂,而且反应时间不好把控,切片容易从载玻片上脱落以及细胞壁易破损;而番红染色结合荧光观察所用试剂则是安全无毒的且细胞结构完整。综合比较不同的方法,番红染色结合荧光显色是当前最适合橡胶树树皮组织细胞中木质素显色的方法,不仅能清晰区分木质素含量的高低,而且安全、简便易操作。

马铃薯与枸杞植物组织石蜡切片双重染色技术的改进

目的找到番红-固绿染色法对不同植物组织石蜡切片染色效果最好的染液配置方法及处理时间,为后续植物组织细胞学研究提供试验基础。方法主要从染液配置方法和酒精脱色时间两个方面来探索出最适于本试验中植物组织番红-固绿的染色法。结果当脱蜡洗去番红浮色及复水透明时间达到了12 min,且番红为乙醇溶液配制时,植物组织未被染色。当脱蜡洗去番红浮色及复水透明时间为6 min左右且番红为乙醇溶液配制时,植物组织只被染为绿色。当脱蜡为6 min,洗去番红,固绿浮色时间较短,且番红为水溶液配制时,植物组织既有红色又有绿色,即染色正常。结论用蒸馏水配制番红染液,且洗去番红浮色固绿染色时间应尽量缩短,避免脱色时间过长,才能获得染色良好的植物组织切片。

Micro-CT评价铁超载影响膝骨关节炎模型小鼠软骨类组织的变化

背景:膝骨关节炎可能与铁代谢异常有关,了解铁超载对膝骨关节炎的作用非常有意义。目的:探究铁超载对膝骨关节炎发病的影响。方法:选取30只7周龄C57B/6J野生型小鼠,采用随机数表法分为正常对照组、手术对照组与手术+右旋糖酐铁组,每组10只。8周龄时,手术+右旋糖酐铁组腹腔注射右旋糖酐铁500 mg/kg,每周1次,注射至18周龄时停止;10周龄时,手术对照组与手术+右旋糖酐铁组行左后膝内侧半月板失稳手术。18周龄时处死所有小鼠,通过Micro-CT检测胫骨微结构参数,番红O-固绿染色观察关节软骨组织病理损伤程度,普鲁士蓝染色证实铁在小鼠关节中的沉积。结果与结论:①Micro-CT检测显示,与正常对照组相比,手术对照组、手术+右旋糖酐铁组骨小梁相对体积、骨小梁厚度、骨小梁数量明显减小(P<0.05),骨小梁分离度、结构模型指数增加(P<0.05);与手术+右旋糖酐铁组比较,手术对照组骨小梁相对体积、骨小梁厚度、骨小梁数量增加(P<0.05),骨小梁分离度、结构模型指数相减小(P<0.05);②番红O染色显示,与正常对照组、手术对照组相比,手术+右旋糖酐铁组小鼠软骨表面缺损、破裂严重,表层软骨细胞数量明显减少,国际骨关节炎研究学会半定量评分更高,提示其关节炎严重程度更高;③普鲁士蓝染色显示,手术+右旋糖酐铁组小鼠滑膜中可见大量被染成深蓝色的铁沉积颗粒,正常对照组与手术对照组均无明显铁沉积颗粒;④结果显示,铁超载能够加重膝骨关节炎的严重程度,并且增加软骨蛋白多糖成分的丢失和软骨下骨的骨丢失,明确了铁超载与膝骨关节炎的关系。

超声波预处理对水酶法提取扁桃仁油及水解蛋白影响的研究

以扁桃仁为原料,在水酶法提取扁桃仁油及水解蛋白前对原料进行超声波预处理。通过单因素试验与正交试验,确定最佳处理条件为:超声波功率300 W,温度40℃,时间15 min。在此条件下,扁桃仁油与水解蛋白提取率分别为80.43%和89.59%,比未经超声波预处理分别提高4.4%和5.2%。通过番红染色法观察了超声波与纤维素酶对原料细胞的破坏效果。

髓内针固定小鼠闭合性股骨骨折模型的建立

目的建立髓内针固定小鼠闭合性股骨骨折模型。方法解剖20例C57BL/6小鼠股骨,了解小鼠股骨形态结构特点。12～16周龄的C57BL/6小鼠50只,采用髓内针手术技术,在股骨髓腔内插入直径0.2mm导针后,通过制作的骨折造模架,造成闭合性股骨中段骨折,经导针插入26G(直径0.45mm)不锈钢针,通过X线及番红O-固绿染色观察骨折愈合过程。结果术后通过X线证实横行骨折32例,短斜行骨折16例,粉碎性骨折2例,X线及组织学检查表明,其骨折愈合过程为典型的软骨内骨化,建模成功率为96%,可重复性高。结论髓内针手术技术建立的小鼠闭合性股骨骨折模型,方法安全、快捷、简单;其骨折愈合为典型的软骨内骨化,可重复性高,能较好地用于骨折愈合和骨代谢的分子机制研究。

小鼠脂肪来源干细胞向成骨及软骨细胞的诱导分化

背景:脂肪干细胞常从脂肪组织中分离获取,脂肪组织在全身均有分布,极易大量获得,取材时对供区损伤小。目的:进一步验证小鼠脂肪来源干细胞的体外分离、培养方法,并在特定条件下诱导其向成骨细胞和软骨细胞分化,探讨其作为组织工程种子细胞的可行性。方法:取昆明种雄性小鼠附睾处脂肪,Ⅰ型胶原酶消化法和差速贴壁法获取、纯化脂肪干细胞并进行细胞表型鉴定。采用成骨诱导培养基诱导脂肪干细胞,进行钙钴法碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色检测细胞分化情况;采用软骨诱导培养基诱导脂肪干细胞,进行甲苯胺蓝染色,番红O染色,Ⅱ型胶原免疫组织化学检测细胞分化情况。结果与结论:脂肪干细胞呈梭形贴壁生长,原代7-9d可达90%融合,传至第3代后细胞形态趋向一致,传代的脂肪干细胞生长曲线呈"S"形。细胞特异性抗原测定CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45呈阴性表达。成骨诱导分化后细胞碱性磷酸酶染色和茜素红染色呈阳性。软骨诱导分化后细胞番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色呈阳性。证实从脂肪组织中可分离到具有分化潜能的干细胞,可在体外稳定增殖传代,经诱导后可分化为成骨细胞、软骨细胞,其具有来源广泛,取材方便等优点,可成为组织工程理想的种子细胞。

正常与退变髓核细胞形态学及Ⅱ型胶原蛋白的定量分析

背景:椎间盘退变导致椎间隙狭窄的主要变化是髓核细胞表达软骨特异性基因产物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的减少。目的:对成人的正常与退变椎间盘髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色及番红O染色进行定量观察比较。方法:取成人脊柱侧弯患者与椎间盘突出症患者自愿者术中取出的废弃髓核组织各3例,经培养后每个患者各测量26个细胞,正常组和退变组分别测量78个细胞。对正常与退变椎间盘髓核细胞进行番红"O"染色并行灰度及测定细胞内Ⅱ型胶原蛋白行免疫荧光染色定量测定。结果与结论:免疫荧光染色显示:退变椎间盘髓核细胞仅轻度染色,染色模糊,其呈类圆形,纺锤形,梭形及不规则形,其内仅有极少量荧光颗粒;Ⅱ型胶原表达较正常髓核细胞降低显著(P<0.05)。番红O染色显示:退变的髓核细胞肿胀,细胞核肿胀染色略淡,细胞突起延长,胞浆染色不匀伴有空泡,部分细胞崩解,细胞分布零散,混乱,可见成片坏死区。与正常髓核细胞图像灰度值相比差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明退变的椎间盘髓核细胞减少、部分凋亡,其细胞内Ⅱ型胶原蛋白含量较正常髓核细胞显著减少。

电针对早期膝骨关节炎兔模型关节软骨病理及黏弹性力学性能的影响

目的探索电针治疗对早期膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔模型关节软骨病理及黏弹性力学性能的影响。方法33只新西兰兔按体质量随机分为空白组(6只)及KOA造模组(27只),KOA造模组应用改良Videman法(过伸位制动)制动4周建立早期KOA兔模型,拆除固定装置后根据Lequesne评分再随机分为模型组、电针组和西药组(每组9只),均干预4周。干预结束后,兔股骨内侧髁软骨分别进行番红0/固绿染色及黏弹性力学性能(纳米压痕仪)检测。结果(1)与空白组相比,模型组Mankin评分显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组Mankin评分显著降低(P<0.01),西药组Mankin评分明显降低(P<0.05)。(2)与空白组相比,模型组股骨软骨储存模量(storage modulus,SM)平均值显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组、西药组股骨软骨SM平均值表达显著降低(P<0.01)。(3)与空白组相比,模型组软骨损失模量(loss modulus,LM)平均值显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组、西药组软骨平均LM值表达显著降低(P<0.01)。(4)与空白组相比,模型组损失因子(loss factor,LF)表达升高;干预治疗后与模型组相比,电针组和西药组LF值表达升高,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论电针干预早期KOA兔模型,具有减轻关节软骨病理损伤、改善关节软骨SM和LM的作用。

向川安瘿蜂虫瘿和无虫瘿枝条组织结构的比较

向川安瘿蜂(Andricus mukaigawae)属膜翅目(Hymenoptera)瘿蜂科(Cynipidae),在白栎(Quercus fabri)枝条上形成虫瘿。本文通过向川安瘿蜂虫瘿和无虫瘿枝条的石蜡切片,使用番红-固绿染色,比较向川安瘿蜂虫瘿与无虫瘿枝条的组织结构差异。结果表明,向川安瘿蜂虫瘿由表皮层、保护层、营养层和虫室组成。其中,保护层分为两层,外层是薄壁组织,内层分布许多散生的维管束,石细胞成群分布;营养层由具较大细胞核的营养细胞组成。无虫瘿枝条由周皮、皮层、次生韧皮部、维管形成层、次生木质部和髓组成。另外,向川安瘿蜂虫瘿和无虫瘿枝条的木质化程度存在差异,虫瘿的保护层存在大量的维管束,木质化程度较高,而无虫瘿枝条的木质化部分主要集中在次生木质部。本文为进一步研究向川安瘿蜂虫瘿次生代谢产物的分布提供了组织学基础。

Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物在软骨损伤中的应用

背景:体外实验显示,Ⅱ型胶原能诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,但有关Ⅱ型胶原水凝胶制备及其在软骨运动损伤中的修复尚缺乏报道。目的:观察Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物在软骨损伤修复中的作用。方法:取30只新西兰大白兔,建立软骨损伤模型,造模后随机分为2组,每组15只,实验组于软骨损伤处植入Ⅱ型胶原水凝胶-骨髓间充质干细胞复合物,对照组植入Ⅱ型胶原水凝胶。植入后4,8周,取材软骨损伤部位,进行苏木精-伊红染色及甲苯胺蓝染色。结果与结论:(1)实验组:植入后4周,苏木精-伊红染色结果可见炎性细胞浸润,以巨噬细胞为主,存在少量中性粒细胞;甲苯胺蓝染色未见阳性。植入后8周,苏木精-伊红染色下可见大量软骨细胞增殖,有成软骨和肌管形成,并且可见血管再生;甲苯胺蓝染色接近正常组织;(2)对照组:植入后4周,苏木精-伊红染色可见损伤周围间质水肿明显,损伤骨骼肌细胞核消失,存在大量炎性细胞浸润;甲苯胺蓝染色未见阳性。植入后8周,苏木精-伊红染色下可见少许成软骨细胞形成,纤维组织增多;甲苯胺蓝染色未见阳性;(3)结果表明:Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物修复软骨损伤具有良好的成软骨能力。

隐孢子虫病(附7例临床分析)

本文对我院发现的7例隐孢子虫病进行临床分析,并复习国内已报导的13例资料,认为番红一美蓝染色法是目前检测隐孢子虫较为实用的方法,而大蒜素是治疗隐孢子虫病的良效药物之一,值得推广。