亚硝酸根—番红O重氮化偶联反应机理研究

研究了在酸性介质中,亚硝酸根离子与番红O偶联反应的机理,并作为光度分析新方法应用于测定亚硝酸根离子。研究表明,在520um处,试剂空白同试液吸光度的差值与亚硝酸根离子的含量在20～500μg/L范围内成线性关系。方法用于土壤、环境水样中亚硝酸根离子的测定,结果满意。

小鼠脂肪来源干细胞向成骨及软骨细胞的诱导分化

背景:脂肪干细胞常从脂肪组织中分离获取,脂肪组织在全身均有分布,极易大量获得,取材时对供区损伤小。目的:进一步验证小鼠脂肪来源干细胞的体外分离、培养方法,并在特定条件下诱导其向成骨细胞和软骨细胞分化,探讨其作为组织工程种子细胞的可行性。方法:取昆明种雄性小鼠附睾处脂肪,Ⅰ型胶原酶消化法和差速贴壁法获取、纯化脂肪干细胞并进行细胞表型鉴定。采用成骨诱导培养基诱导脂肪干细胞,进行钙钴法碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色检测细胞分化情况;采用软骨诱导培养基诱导脂肪干细胞,进行甲苯胺蓝染色,番红O染色,Ⅱ型胶原免疫组织化学检测细胞分化情况。结果与结论:脂肪干细胞呈梭形贴壁生长,原代7-9d可达90%融合,传至第3代后细胞形态趋向一致,传代的脂肪干细胞生长曲线呈"S"形。细胞特异性抗原测定CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45呈阴性表达。成骨诱导分化后细胞碱性磷酸酶染色和茜素红染色呈阳性。软骨诱导分化后细胞番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色呈阳性。证实从脂肪组织中可分离到具有分化潜能的干细胞,可在体外稳定增殖传代,经诱导后可分化为成骨细胞、软骨细胞,其具有来源广泛,取材方便等优点,可成为组织工程理想的种子细胞。

人腰椎小关节软骨不同染色方法的差异比较

背景:随着现代病理技术的不断创新及发展,在疾病诊断方面显著减少其误诊率,但特殊染色法依然是病理诊断的最主要手段。目的:比较不同的特殊染色方法显示人腰椎小关节结构的优缺点。方法:收集腰椎手术患者的L4/5小关节软骨标本,行苏木精-伊红染色、番红O染色、甲苯胺蓝染色、Masson染色、番红-固绿染色,观察软骨结构。结果与结论:苏木精-伊红染色、番红-固绿染色和甲苯胺蓝染色均可清晰观察到关节软骨各层结构。其中苏木精-伊红染色能较清楚显示软骨层、潮线及软骨下骨,软骨细胞核呈蓝紫色。番红-固绿染色清晰显示软骨4层结构:浅层(软骨表面),中间层(细胞圆形,着色较淡,排列规律),柱状细胞层(细胞较大,多核,排列整齐),显示软骨基质呈均匀浅红,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明。甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色。而番红O染色软骨层及软骨下骨层分界比较清晰,软骨层呈均匀深红色,细胞染色较淡,与软骨基质分界不明显。Masson染色对胶原纤维较为清晰,但只能大致显示软骨与软骨下骨结构。结果说明番红-固绿染色显示软骨各层和软骨下骨结构最佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚,Masson染色最次。

正常与退变髓核细胞形态学及Ⅱ型胶原蛋白的定量分析

背景:椎间盘退变导致椎间隙狭窄的主要变化是髓核细胞表达软骨特异性基因产物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的减少。目的:对成人的正常与退变椎间盘髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色及番红O染色进行定量观察比较。方法:取成人脊柱侧弯患者与椎间盘突出症患者自愿者术中取出的废弃髓核组织各3例,经培养后每个患者各测量26个细胞,正常组和退变组分别测量78个细胞。对正常与退变椎间盘髓核细胞进行番红"O"染色并行灰度及测定细胞内Ⅱ型胶原蛋白行免疫荧光染色定量测定。结果与结论:免疫荧光染色显示:退变椎间盘髓核细胞仅轻度染色,染色模糊,其呈类圆形,纺锤形,梭形及不规则形,其内仅有极少量荧光颗粒;Ⅱ型胶原表达较正常髓核细胞降低显著(P<0.05)。番红O染色显示:退变的髓核细胞肿胀,细胞核肿胀染色略淡,细胞突起延长,胞浆染色不匀伴有空泡,部分细胞崩解,细胞分布零散,混乱,可见成片坏死区。与正常髓核细胞图像灰度值相比差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明退变的椎间盘髓核细胞减少、部分凋亡,其细胞内Ⅱ型胶原蛋白含量较正常髓核细胞显著减少。

电针对早期膝骨关节炎兔模型关节软骨病理及黏弹性力学性能的影响

目的探索电针治疗对早期膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔模型关节软骨病理及黏弹性力学性能的影响。方法33只新西兰兔按体质量随机分为空白组(6只)及KOA造模组(27只),KOA造模组应用改良Videman法(过伸位制动)制动4周建立早期KOA兔模型,拆除固定装置后根据Lequesne评分再随机分为模型组、电针组和西药组(每组9只),均干预4周。干预结束后,兔股骨内侧髁软骨分别进行番红0/固绿染色及黏弹性力学性能(纳米压痕仪)检测。结果(1)与空白组相比,模型组Mankin评分显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组Mankin评分显著降低(P<0.01),西药组Mankin评分明显降低(P<0.05)。(2)与空白组相比,模型组股骨软骨储存模量(storage modulus,SM)平均值显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组、西药组股骨软骨SM平均值表达显著降低(P<0.01)。(3)与空白组相比,模型组软骨损失模量(loss modulus,LM)平均值显著升高(P<0.01);干预治疗后与模型组相比,电针组、西药组软骨平均LM值表达显著降低(P<0.01)。(4)与空白组相比,模型组损失因子(loss factor,LF)表达升高;干预治疗后与模型组相比,电针组和西药组LF值表达升高,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论电针干预早期KOA兔模型,具有减轻关节软骨病理损伤、改善关节软骨SM和LM的作用。

Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物在软骨损伤中的应用

背景:体外实验显示,Ⅱ型胶原能诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,但有关Ⅱ型胶原水凝胶制备及其在软骨运动损伤中的修复尚缺乏报道。目的:观察Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物在软骨损伤修复中的作用。方法:取30只新西兰大白兔,建立软骨损伤模型,造模后随机分为2组,每组15只,实验组于软骨损伤处植入Ⅱ型胶原水凝胶-骨髓间充质干细胞复合物,对照组植入Ⅱ型胶原水凝胶。植入后4,8周,取材软骨损伤部位,进行苏木精-伊红染色及甲苯胺蓝染色。结果与结论:(1)实验组:植入后4周,苏木精-伊红染色结果可见炎性细胞浸润,以巨噬细胞为主,存在少量中性粒细胞;甲苯胺蓝染色未见阳性。植入后8周,苏木精-伊红染色下可见大量软骨细胞增殖,有成软骨和肌管形成,并且可见血管再生;甲苯胺蓝染色接近正常组织;(2)对照组:植入后4周,苏木精-伊红染色可见损伤周围间质水肿明显,损伤骨骼肌细胞核消失,存在大量炎性细胞浸润;甲苯胺蓝染色未见阳性。植入后8周,苏木精-伊红染色下可见少许成软骨细胞形成,纤维组织增多;甲苯胺蓝染色未见阳性;(3)结果表明:Ⅱ型胶原水凝胶-细胞复合物修复软骨损伤具有良好的成软骨能力。