烟草丛顶病毒云南不同分离物全基因组序列测定与分析

【目的】探明烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)云南不同分离物之间的遗传差异并完成系统进化分析。【方法】采用RT-PCR方法扩增获得云南不同地区10个TBTV分离物的全基因组序列。【结果】10个TBTV云南分离物的全基因组序列均为4 152 bp,基因组结构由4个开放阅读框(ORFs)构成,ORF2通过与ORF1发生-1位的移码(frameshift)表达融合蛋白,推测ORF1末端的GGAUUUU特征序列是确定ORF1与ORF2是否发生移码翻译的依据。各TBTV云南分离物全基因组序列的核苷酸序列同源性为84.9%~99.1%,其中来自德宏的分离物(TBTV-YDHo)变异最大。TBTV不同分离物间存在重组现象,且分离物之间亲缘关系与重组的发生有关,重组主要发生在变异较大的ORF1~ORF2区段。TBTV分离物的各区段中,ORF1和ORF1~ORF2变异最大,而ORF4和3'UTR较为保守。系统进化分析结果表明:TBTV作为幽影病毒属(Umbravirus)的成员之一,其与同属中的罂粟花叶病毒(Opium poppy mosaic virus,OPMV)亲缘关系最近,核苷酸序列同源性为61.1%~61.6%;与CMo V和CMo MV亲缘关系较远,同源性为54%~55.1%。除幽影病毒属外,TBTV与番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)其他属的病毒核苷酸序列同源性为25.1%~49.8%;Tombusviridae中Umbravirus与香石竹环斑病毒属(Dianthovirus)的RNA2亲缘关系最远,与其他病毒属成员的亲缘关系都相对较近。【结论】TBTV云南各分离物之间存在一定的分子变异,有的存在重组现象;TBTV与OPMV亲缘关系最近。

芝麻坏死花叶病毒的鉴定

自武昌芝麻坏死花叶病株得到 1个病毒分离物 ,根据该分离物生物学特性、粒体形状、血清学性质、外壳蛋白分子量和核酸组分、大小 ,明确为自然侵染芝麻的一种新病毒 ,定名为芝麻坏死花叶病毒 ( Sesame necrotic mosaic virus,SNMV)。在人工接种 7科 38种植物中 ,SNMV侵染 6科 2 3种 ;体外稳定性状 :稀释限点 10 -4～ 10 -5,致死温度 80～ 85℃ ,体外存活期限 4 0 d;病毒可通过土壤和接触传播。SNMV病毒粒体球状 ,表面有粒状突起 ,直径约 32 nm。制备病毒抗血清用琼脂双扩散方法测定效价为 1∶ 12 8。 SNMV和红三叶草坏死花叶病毒 ( RCNMV)、甜三叶草坏死花叶病毒 ( SCNMV)、黄瓜花叶病毒 ( CMV)和花生矮化病毒 ( PSV)抗血清没有反应。病毒外壳蛋白亚基分子量为 3810 0道尔顿 ;核酸 1个组分 ,大小约 4 70 0 nt,另含 RNA片段 ,大小约 60 0 nt,可能为卫星 RNA。依据上述病毒特性 ,SNMV可能归属于番茄丛矮病毒科 ( Tombusviridae)