番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒在云南的发生分布研究初报

应用电子显微镜观察形态学及细胞病理特征,间接酶联免疫吸附测定(I-ELISA)和双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA),部分样品经番茄斑萎病毒(TSWV)核壳体蛋白基因(N-gene)的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,以及部分样品的生物学回接测定的方法,对采自云南不同地区20种寄主植物上204份疑似Tospovirus侵染的病株样品进行了检测。结果表明,共有20种寄主作物139份样品中含有Tospovirus分离物,从检出样品的分布看,云南全省均有分布,但在海拔2400m以上的地区其症状表现不明显。Tospovirus云南分离物在血清型、细胞病理特征以及寄主范围方面与国内外报道的同属病毒有共同的特征,同时也有较明显的差异,即云南存在有Tospovirus新的株系或种类。

2014年云南番茄、辣椒上番茄斑萎病毒属病毒与传毒蓟马的发生特点

【目的】了解云南地区番茄、辣椒上番茄斑萎病毒属病毒(Tospoviruses)与传毒蓟马的发生特点,为有效监测与防控Tospoviruses引起的斑萎病及传毒蓟马的发生流行提供理论指导和技术支撑。【方法】采用定点调查法,对云南Tospoviruses常发重灾区泸西和晋宁地区番茄、辣椒上的Tospoviruses及传毒蓟马的发生特点进行调查。【结果】2014年,泸西番茄、辣椒上斑萎病发病率和传毒蓟马种群数量均于7月7日达最高值,分别为16%、66%和1418、822头/100株。晋宁地区番茄、辣椒斑萎病发病较重,7月12日发病率达最高,分别为76%和80%,番茄上传毒蓟马种群数量在6月21日达最高峰,百株虫量为896头,辣椒在7月12日达最高峰,百株虫量为696头。经室内ELISA及分子检测,Tospoviruses种类鉴定为TSWV、TZSV;传毒蓟马种类鉴定为西花蓟马、花蓟马及棕榈蓟马,西花蓟马为绝对优势种。【结论】2014年云南泸西、晋宁等地番茄、辣椒上Tospoviruses引起的斑萎病及传毒蓟马危害严重,选择抗性品种是有效控制Tospoviruses发生流行的方法之一。针对Tospoviruses及传毒蓟马的发生特点,合理采用农业、生物、物理、化学防治等综合技术措施,才能保证蔬菜产业的健康发展。

植物源天然产物AHO对番茄斑萎病毒属病毒病的田间防效

【目的】评价植物源天然产物3-丙酮基-3-羟基羟吲哚(3-acetonyl-3-hydroxyoxindole,AHO)对田间番茄斑萎病毒属病毒病的防控效果,为AHO开发成为新的抗病毒剂提供科学依据。【方法】选取5%AHO水剂和生产中常用的7种抗病毒剂(超敏蛋白、氨基寡糖素、盐酸吗啉胍、吗呱乙酸铜、宁南霉素、啸克、苯并噻二唑)在烟株移栽还苗后进行叶面喷施3次,药后调查烟株病毒病发生情况。【结果】供试药剂中除啸克外对大田烟株番茄斑萎病毒属病毒病均有很好的防控效果,连续施用3次后可较好地控制烟田番茄斑萎病毒属病毒病的发生和发展,其中,AHO对番茄斑萎病毒属病毒病的相对防效为79.86%,略低于宁南霉素的相对防效(80.60%);苯并噻二唑的相对防效最高,达83.75%;氨基寡糖素和吗呱乙酸铜的相对防效相当,分别为71.72%和72.67%;超敏蛋白和盐酸吗啉胍的相对防效稍低,分别为68.55%和67.82%;啸克的相对防效最低,仅为44.78%。【结论】AHO对大田烟株番茄斑萎病毒属病毒病有很好的防控效果,其对番茄斑萎病毒属病毒病的效果优于部分市售药剂,具有开发成为防控番茄斑萎病毒属病毒病抗病毒剂的潜力。

番茄斑萎病毒属病毒的多样性

番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae),是一类世界性分布的具有重要经济价值的植物病毒。到目前为止,该属已报道了至少28个Tospovirus病毒种或分离物,但少数分离物之间关系不清楚,甚至同种病毒的不同分离物被命名为两种不同的病毒。本文从种类、血清学、寄主范围、地理分布、传播介体以及核壳体蛋白基因(N)核甘酸序列及其推导的氨基酸序列的相似性等方面分析了所有分离物之间的关系,并通过N基因推导的氨基酸序列分析了Tospovirus病毒的遗传多样性,最后推测Tospovirus病毒起源于南亚及东南亚地区。

番茄斑萎病毒属ssRNA-M序列比对分析

番茄斑萎病毒属(Tospovirus)是布尼亚病毒科唯一的植物病毒属,在热带、亚热带以及温带地区引起许多作物和花卉严重病害的发生.该研究利用DNAstar、DNAman等软件对其RNA-M编码G1G2蛋白和NSm非结构蛋白的核酸和蛋白质序列进行分析,发现Tospovirus属病毒的G1G2蛋白和NSm非结构蛋白序列的长度和GC含量在不同病毒种间变异不大,同时得出序列比对图和一致性(Identity)的值、同源性(Homolog tree)的值和系统进化树(Phylogenetic tree)的值,并发现根据NSm蛋白质序列划分的2个相似性组与前人划分的血清组非常接近.

云南省烟草正番茄斑萎病毒属病毒的调查和鉴定

【背景和目的】烟草是云南省支柱产业,近年来烟草斑萎类病害发生严重。了解烟草斑萎类病害在云南的病原种类、病害发生、流行和分布势在必行。【方法】2012以来,本课题组从云南省10个地州市共采集疑似Orthotospovirus属病毒侵染的烟草样品38份,采用症状学观察、酶联免疫吸附反应以及RT-PCR鉴定。【结果】结果显示有20份烟草样品感染Orthotospovirus属病毒,其中番茄斑萎病毒单独侵染样品11份、朱顶红褪绿环斑病毒单独侵染样品4份、番茄环纹斑点病毒单独侵染样品2份、马蹄莲褪绿斑病毒单独侵染样品2份、番茄斑萎病毒和朱顶红褪绿环斑病毒复合侵染1份。【结论】本研究首次报道朱顶红褪绿环斑病毒侵染烟草,同时发现番茄斑萎病毒和朱顶红褪绿环斑病毒复合侵染烟草,鉴定结果对于科学制定烟草斑萎病害综合防治措施,保障云南省烟草种植业的持续健康发展具有重要意义。

番茄斑萎病毒属病毒SRNA序列比对

从生物信息数据库NCBI中搜索并下载最新有关番茄萎斑病毒属Tospovirus各种间SRNA片段全长序列以及该片段上NSs、N的核酸和蛋白质序列着手,运用DNAstar和DNAMAN以及NPSA等生物信息软件对其进行比对分析,结果发现,以NSs蛋白序列建立的系统进化树显示CCSV和TZSV之间的同源性为85.8%,IYSV和TYRV之间的同源性达90%,MYSV和PSMV间的同源性为97.5%;通过N蛋白序列分析显示,Tospovirus属中有7组同源性较高的种;在Tospovirus属病毒中非极性氨基酸含量最高,极性酸性氨基酸最少,比较TSWV中抗性破坏RB株系与普通株系在NSs、N核酸、蛋白质序列、氨基酸含量和蛋白质二级结构之间的差异,发现差异不显著.

番茄斑萎病毒属病毒检测技术研究进展

番茄斑萎病毒属病毒属于布尼亚病毒科,是一类世界性分布、寄主范围很广的植物病毒,可引起许多重要的园艺植物和农作物的严重病害,造成严重的经济损失。而高效的病毒鉴定或检测技术是防治病毒病害的关键基础之一。因此,本文就近年来番茄斑萎病毒属病毒鉴定与检测技术的研究进展作一综述,介绍生物学技术、电镜技术、血清学技术以及分子生物学技术在番茄斑萎病毒属病毒检测方法上的特点、发展应用方向等。

棕榈蓟马传播番茄斑萎病毒属病毒研究进展

棕榈蓟马是一种世界性的重要害虫,不仅直接取食为害作物,而且可以持久性地传播番茄斑萎病毒属病毒,对经济作物构成威胁。本文综述了棕榈蓟马传播的番茄斑萎病毒属病毒的种类、病原特征以及棕榈蓟马传毒特性等方面的研究进展。

番茄斑萎病毒属病毒非结构蛋白NSs的生物信息学分析

番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒编码的非结构蛋白NSs,可能在病毒复制、转录、抑制RNA沉默中起重要作用,本文利用生物信息方法对21个Tospovirus病毒成员的NSs序列进行分析,为进一步研究NSs的功能提供参考信息。从GenBank数据库中下载NSs基因序列,用DNAMAN5.0做NSs相似性矩阵分析,发现一些Tospovirus病毒成员之间的NSs氨基酸序列相似性很低,最低仅为7.1%;用ClustalX2.1进行NSs的氨基酸多序列比对分析,发现Tospovirus病毒成员的NSs相对保守区主要位于NSs的C端的位置,高度保守的氨基酸位点共有9个;PROSITE对NSs进行模体预测分析,结果显示Tospovirus病毒NSs共有的蛋白修饰:C蛋白激酶磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和N-酰基化。此外,不同种的Tospovirus病毒NSs模体也表现出了多样性的特点。预测结果为下一步研究NSs功能奠定了基础。

2014年云南蔬菜番茄斑萎病毒属病毒发生动态及防治现状

采用定点调查方法,跟踪研究2014年云南Tospoviruses常发重灾区泸西和晋宁地区番茄、辣椒等蔬菜上Tospoviruses及传毒蓟马的发生动态,并对其综合防控策略进行介绍,以期为控制Tospoviruses及传毒介体蓟马的发生流行提供理论依据。

云南辣椒正番茄斑萎病毒属病毒的分子鉴定

辣椒是云南省主要经济作物之一,近年来病毒病尤其是正番茄斑萎病毒属病毒发病严重,影响了辣椒产量和品质。利用RT-PCR技术对从云南辣椒主产区采集的疑似感染正番茄斑萎病毒属病毒的25份辣椒样品进行分子鉴定,结果显示,12份样品检测出正番茄斑萎病毒属病毒,检出率为48.0%,其中6份是番茄斑萎病毒tomato spotted wilt orthotospovirus(TSWV),检出率为24.0%;5份是番茄环纹斑点病毒tomato zonate spot orthotospovirus(TZSV),检出率为20.0%;有1份是TSWV和TZSV复合侵染,检出率为4.0%,这是在云南辣椒生产上首次发现TSWV和TZSV的复合侵染。通过鉴定,初步了解正番茄斑萎病毒属病毒在云南辣椒生产中的发生情况和种类,为制定云南地区该属病毒的防治策略提供理论依据。

南农大揭开番茄斑萎病毒属感染原理

近年来,番茄斑萎病毒在我国茄科、葫芦科和豆科蔬菜上均有逐渐扩大发生的趋势。对此,南京农业大学植保学院植物病毒实验室开展了深入系统的防治研究。据介绍,植物病毒基因组仅编码少数几个蛋白,它们必须依赖于寄主植物才能完成自身的侵染和增殖。

侵染水鬼蕉和花朱顶红的番茄斑萎病毒属病毒的电镜和DAS-ELISA诊断

从昆明市郊区采集到呈同心圆褪绿环斑、褐色枯斑症状的水鬼蕉[Hymenocallis littoraris(Jacq.)Salisb.]和花朱顶红[Hippeastrum vittatum(L’Hér.)Herb.]植株,采用电子显微镜技术和DAS-ELISA进行检测,在水鬼蕉和花朱顶红病叶分离物SGJ-KM和ZDH-KM的粗汁液和超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒粒体存在,该病毒粒子为球形,直径80～85nm;病叶汁液与Tospovirus中的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mottle virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosis virus,GBNV)的复合抗血清呈阳性反应。通过形态学及血清学方法检测表明,侵染水鬼蕉和花朱顶红的病毒分离物SGJ-KM和ZDH-KM为Tospovirus的病毒分离物。

从云南蝴蝶兰上检测到番茄斑萎病毒属病毒

应用电镜观察、DAS-ELISA以及RT-PCR检测,从症状表现黄化、环斑的云南蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)病样中分离得到的一个病毒分离物Tospo-Pha。该分离物粒子近球形、具包膜、直径约90nm,与番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mosaic virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosis virus,GBNV)复合抗血清呈强阳性反应,分子检测发现该分离物SRNA5′末端序列与CaCV大岩桐分离物(CaCV-Gloxinia)同源性最高(91.0%),在系统进化树中与CaCV聚于同一分支。上述结果表明,从云南蝴蝶兰中分离到的Tospo-Pha属于Tospovirus病毒。

云南澳洲坚果苗木感染番茄斑萎病毒属病毒初报

在云南省临沧市永德县海拔约800m的澳洲坚果(Macadamia sp.)种苗繁育基地发现叶片褪绿、黄化、叶脉间呈现近似圆形或不规则褐色枯斑的植株。为了确认植株病因,采集典型病株,应用电子显微镜负染色法、超薄切片和DAS-ELISA进行检测,在澳洲坚果苗木病叶分离物Maca-LC的粗汁液和病叶超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒粒体。该病毒粒子为球形,直径80～85nm。进一步应用DAS-ELISA方法鉴定,病叶与Tospovirus的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mottle virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosisvirus,GBNV)复合抗血清呈阳性反应。通过病症典型症状、病毒形态学观察及血清学方法检测表明,侵染云南澳洲坚果种苗的病毒分离物Maca-LC为番茄斑萎病毒属Tospovirus病毒。

云南烟草上出现番茄斑萎病毒(Tospovirus)属病毒

2004-2007年间对云南省烤烟种植区进行调查，在云南省楚雄和文山2个地区，获得3份疑似Tospovirus属病毒的样本。通过Tospovirus组引物（Tospovirus Group Primer）进行RT-PCR扩增、克隆和测序，获得500nts核酸片段，通过NCBI BLAST网络数据库比对，确定这3份样品为Tospovirus属的病毒；通过DNAman软件比对分析所得到的核酸序列和已经公布的Tospovirus属病毒RNA L同位点序列，从得到的系统进化图可以看出，云南3个样品明显分为2簇，即YN-1和YN-2，分别与血清组I和Ⅵ的Tospovirus属病毒聚为一簇。

云南省红河地区传播番茄斑萎病毒属病毒的蓟马及其寄主植物种类调查

2011年7月至2012年8月对云南省红河州传播番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒的蓟马种类及其寄主植物进行了系统调查。明确了西花蓟马、花蓟马、烟蓟马和棕榈蓟马4种为传毒蓟马。其寄主植物主要有辣子草、粉花月见草、茴茴蒜等30种以上田间杂草和白菜、蚕豆、番茄等超过20种作物。

云南省主要烟区正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒的调查和检测

2014年2月至2018年7月间从云南文山、昭通、楚雄、曲靖、玉溪、昆明、红河、大理和保山等州市烟区的烟株及烟田周边作物和田间杂草采集疑似感染正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒的566个样品。通过ELISA血清学检测、分子生物学检测等方法,对该566个样品进行了系统检测检测结果发现Orthotospovirus属病毒已在云南烟区广泛分布,但危害以番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)为主,检出率为43.88%,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)为辅,检出率为27.87%。结果同时表明云南烟区马铃薯、辣椒、番茄、鸢尾、鬼针草等为烟草TSWV和TZSV的重要中间寄主。该研究阐明了云南烟草斑萎病的危害和分布特点,为下一步制定针对该属病毒的防治措施奠定了良好基础。

番茄斑萎病毒属6种病毒的多重RT-PCR检测

根据番茄斑萎病毒属(Tospovirus)中6种病毒S RNA上的N基因序列设计特异性引物,建立可同时检测这6种Tospovirus病毒的多重PCR体系。多重PCR扩增结果显示,番茄环纹斑点病毒(776 bp)、甜瓜黄斑病毒(505 bp)、鸢尾黄斑病毒(296 bp)、凤仙花坏死斑病毒(221 bp)、番茄斑萎病毒(175 bp)和番茄褪绿斑病毒(110 bp)均出现清晰的目标条带,各病毒的特异性引物不会对其他病毒产生非特异性扩增。本研究建立的6种Tospovirus病毒的多重PCR检测方法,有助于提高目标病毒的检测效率。