芽胞杆菌JZB30-1的鉴定及其对番茄灰霉病的生防作用

为获得对番茄灰霉病具有良好防效的生防芽胞杆菌,采用对峙培养、双层平板以及生防相关特性检测等方法筛选高活性拮抗菌株,根据形态学、生理生化特性及多基因测序进行菌株种类鉴定,通过离体果实和盆栽试验明确供试菌株的防病促生效果。结果表明,芽胞杆菌JZB30-1对番茄灰霉病菌等10余种植物病原真菌和细菌具有广谱抑菌活性;该菌株具有合成蛋白酶、纤维素酶、脂肽类物质,分泌铁载体、生长激素及溶磷等特性,经鉴定其为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens;菌株JZB30-1无菌发酵滤液50倍液喷施处理,对番茄果实灰霉病防效为95.0%,发酵液10倍稀释液灌根,番茄株高、鲜重分别较对照增加25.7%和28.4%。相关结果为利用解淀粉芽胞杆菌JZB30-1进行番茄灰霉病生物防治提供理论依据。

河南省番茄灰霉病病原菌鉴定、生物学特性分析及杀菌剂筛选

番茄灰霉病是番茄生产上的重要病害之一。本试验以河南商丘市蔬菜大棚内疑似患灰霉病番茄植株叶片为试材,采用组织分离法纯化获得3株病原菌菌株,其形态特征一致,选择一株代表性菌株命名为SQBC1。对该菌株rDNA-ITS序列、CHS-1、tubA基因进行测序、比对和系统进化分析,结合菌株培养性状、显微形态学观察、致病性分析,将河南商丘番茄灰霉病致病病原菌确定为灰葡萄孢菌Botryotinia cinerea。生物学特性研究表明28℃为最适生长温度,12 h光照12 h黑暗为最适光照条件,6.0为最适pH值,乳糖为最适碳源,蛋白胨为最适氮源。测试了7种杀菌剂对灰霉菌菌丝生长的抑菌效果,其中嘧菌酯和吡唑醚菌酯的抑菌效果最好。该研究为番茄灰霉病的有效防治提供一定的参考依据。

啶酰菌胺和咯菌腈对番茄灰霉病联合毒力及田间防效

为筛选出啶酰菌胺和咯菌腈最佳配比,对番茄灰霉病的防治能达到最优程度,本文采用离体叶盘法测定啶酰菌胺与咯菌腈单剂及9个复配组合对番茄灰霉的毒力,从中选出最佳组合,进行田间药效试验。结果为啶酰菌胺与咯菌腈对番茄灰霉的EC50值分别为0.7481、0.397μg/mL,啶酰菌胺与咯菌腈5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3配比下表现为增效作用,其中啶酰菌胺:咯菌腈配比为2∶1时增效作用最明显,SR值为1.91。田间药效试验结果显示,30%啶酰菌胺·咯菌腈悬浮剂1500倍液,50%腐霉利可湿性粉剂600倍液和50%异菌脲可湿性粉剂600倍液,对番茄灰霉病的防效分别为87.32%、74.35%和78.43%,啶酰菌胺·咯菌腈和异菌脲防效差异不显著,但显著高于腐霉利。因此,本文推荐30%啶酰菌胺·咯菌腈悬浮剂在番茄灰霉上使用。

哈茨木霉对番茄灰霉病菌的拮抗作探析

木霉菌Trichoderma spp. 属于半知菌类常见的土壤丝孢菌,至少对18个属29种病原真菌表现出拮抗作用。采用平板对峙培养与室内防效相结合的方法,研究木霉菌株TM对番茄灰霉病的防治效果。结果如下:TM菌株对灰霉病菌有明显的抑制作用,TM菌株在与病原菌的对峙中,形成对抗局面。TM菌株对番茄灰霉病的抑菌率在第6天为62.05%,拮抗系数表现为Ⅰ~Ⅱ级。木霉菌对番茄灰霉病的防治效果明显,对接种灰霉病孢子悬浮液和菌饼的防效分别达33.66%和69.44%。

新型抗菌肽对番茄灰霉病的防治效果与机理的研究

以番茄、抗菌肽和番茄灰霉菌为试验材料,采用平板试验和番茄盆栽植株试验,研究了抗菌肽CB和D20I-39对灰霉菌(Botrytis cinerea)的抑菌效果及抑菌机制、抗菌肽对番茄灰霉病防效及对番茄叶片的抗病、抗氧化指标的影响,以期为抗菌肽防治番茄灰霉病提供参考依据。结果表明:CB和D20I-39均能抑制灰霉菌菌丝的生长和孢子萌发且具剂量依赖效应,并造成灰霉菌胞内核酸和蛋白质的泄露;CB和D20I-39处理后灰霉菌菌丝呈扁平状、皱缩变细,且随浓度增大菌丝皱褶越发严重甚至出现破裂。番茄盆栽试验显示,预防试验的CB和D20I-39防治效果分别为96.37%±0.13%和83.41%±0.17%;治疗试验的CB和D20I-39的防治效果则分别为14.86%±0.35%和59.74%±0.23%。外源喷施抗菌肽能够提高苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和游离脯氨酸(Pro)含量,降低丙二醛(MDA)含量。新型抗菌肽CB和D20I-39通过破坏细胞膜抑制灰霉菌,降低番茄灰霉病发病率和病情指数。抗菌肽CB和D20I-39对番茄灰霉病具有良好的防治效果。

番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)对3种杀菌剂的抗性监测及交互抗药性研究

采用菌丝生长速率法,测定了采自江苏和河南的158株番茄灰霉病菌对嘧菌酯、啶酰菌胺、啶菌噁唑等3种药剂的敏感性,并研究了部分抗性菌株的交互抗性情况。结果显示,供试菌株对嘧菌酯、啶酰菌胺、啶菌噁唑的EC50值分别在0.0045~90.5、0.0576~36.8、0.0169~2.64μg/mL,并分别出现了19.0%、11.4%、0.6%的抗性菌株频率。整体上,江苏菌株的抗性水平高于河南地区。番茄灰霉病菌对嘧菌酯、醚菌酯、肟菌酯和吡唑醚菌酯之间存在交互抗性;对啶酰菌胺与萎锈灵和噻呋酰胺之间存在交互抗性;但与氟吡菌酰胺、之间不存在交互抗性。病原菌群体中已存在多药抗性问题,1株病原菌对嘧菌酯、啶酰菌胺、啶菌噁唑等3种药剂同时产生可抗性,17株病菌对嘧菌酯和啶酰菌胺同时产生了抗性。

枯草芽孢杆菌WR菌株对番茄灰霉病的生防潜力

为评估WR菌株对番茄灰霉病的生防潜力,测定了WR对番茄灰霉病菌的离体和活体活性。平板对峙培养和发酵液带毒培养试验表明,WR对番茄灰霉菌落生长的拮抗率达98.2%,WR发酵上清液的30倍稀释液对灰霉菌落生长的抑制率达94.5%。喷施带菌发酵液及其50倍稀释液,对采后番茄果实灰霉病发生的保护作用和治疗作用均达100%,果面光洁;而对照果实上灰霉菌生长旺盛,菌落平均直径1.10~1.13 cm,病害周围果实软化,碰触有臭味汁液流出。WR发酵上清液经11种不同性质的树脂吸附后的残液抑菌活性在2.2%~70.7%,表明发酵液抑菌活性成分丰富,D201和001×7均可作为活性成分富集树脂。经16S rDNA核苷酸序列鉴定,WR为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),具有防治番茄灰霉病的潜力。

设施番茄灰霉病病原菌的分离与鉴定

【目的】明确设施番茄灰霉病的病原菌种类。【方法】对采自内蒙古呼和浩特市和乌兰察布市3个设施番茄种植地块的疑似灰霉病病样进行分离,利用形态学、分子生物学方法对分离菌株进行鉴定,在离体茎秆和果实上依照柯赫氏法则进行病原菌致病性回接测定和再分离。【结果】从病茎和病果上共分离到7株病原菌,ITS rDNA序列与灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的同源性为99.60%~100%(GenBank的序列登录号为KP151610、KX426964、ON566787),说明7株菌均属于灰葡萄孢菌。挑选其中2株菌G4和JW1接种到健康的设施番茄茎秆和果实上,灰霉病的发病率为100%。【结论】引起设施番茄灰霉病的病原菌为灰葡萄孢菌。

番茄灰霉病菌拮抗菌的筛选和应用

1番茄简介及主要病害1.1番茄简介番茄人工种植历史长,是中国重要果蔬。番茄含有丰富的维他命和抗氧化成分,中国番茄年产量为1.21亿t。中国蔬菜生产面积较大,种类较多,番茄产量占全国蔬菜总产量的34.7%。番茄含有大量维生素,其中蕃茄红素抗氧化性较好,可以降低罹患前列腺癌的风险。1.2番茄灰霉病菌番茄灰霉病是灰葡萄孢菌侵袭植物所引起的一类疾病,主要危害蔬菜、果树和花卉。

蜡样芽孢杆菌CGMCC4348菌株防治番茄灰霉病的效果及机理研究

试验研究蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC4348菌株对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的生物防治效果,并初步探讨其抑菌机理,以寻找防治番茄灰霉病的新方法。试验从定量生物测定、室内离体抑菌试验和盆栽试验3个方面考察其抑菌作用效果,并以硫酸铵分级沉淀法提取拮抗蛋白进行检测。结果表明,室内抑菌试验的EC50为6.19 mg/L;盆栽试验中处理3对番茄灰霉病的平均防效达75.80%,与50 mg/L嘧霉胺处理的防效相当。试验证明蜡样芽孢杆菌CGMCC4348对番茄灰霉病菌有较好防治效果。

番茄灰霉病菌对嘧霉胺抗药性的试验

从辽宁省不同地区保护地采集番茄灰霉病菌 ,经单孢分离获得代表性菌株35株。采用菌丝生长速率法测定各菌株对嘧霉胺的敏感性。结果表明 ,番茄灰霉病菌已对嘧霉胺产生中等水平抗药性 ,抗性频率为22.9%;不同地区存在差异 ,嘧霉胺使用较多的锦州和瓦房店地区抗药性频率较高。在离体条件下 ,抗药性菌株具有良好的遗传稳定性、与敏感菌株相似适应能力。

番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性检测及生物学性状研究

采用区分剂量法,检测了来自福建省、上海市、辽宁省和内蒙古自治区不同采样点的番茄灰霉病菌Botrytis cinerea对腐霉利的抗性频率;选取未施药地区的敏感菌株,建立了灰霉病菌对腐霉利的敏感基线;比较了常年施药地区与未施药地区灰霉病菌的抗性频率差异,测定了施药10年以上地区番茄灰霉病菌的抗性指数;研究比较了抗、感菌株的生物学性状。结果表明:腐霉利对127株敏感菌株的平均EC50值为(0.31±0.08)μg/mL;供试4省市灰霉病菌对腐霉利均表现出了很高的抗性频率,其中内蒙古自治区和辽宁省采样点的抗性菌株频率高于90%;在施药历史超过10年的215株田间菌株中,抗性水平最高的菌株来自辽宁省,抗性指数为44.3;施药地区灰霉病菌的抗性频率均高于未施药地区;抗性菌株的抗药性可稳定遗传;供试11株抗性和敏感菌株在产孢量和孢子萌发率、菌丝生长速率、活体致病力等生物学性状方面的差异与其抗性水平之间无明显相关性。

啶菌噁唑对番茄灰霉病菌的抑菌作用研究

采用生物测定方法研究了啶菌噁唑对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea不同发育阶段的影响。结果表明:其对菌落扩展、芽管伸长、分生孢子产生和菌核形成均具有显著的抑制活性,其中啶菌唑对P9-菌株菌丝生长和芽管伸长的EC50值分别为0.193和0.154μg/mL,0.5μg/mL的啶菌噁唑对菌丝生长和芽管伸长的抑制率大于77%,对分生孢子和菌核萌发的抑制率分别低于10%和40%,表明药剂对分生孢子萌发无明显抑制作用。紫外吸收分析显示,啶菌噁唑可破坏细胞的膜结构,促使菌体核酸和蛋白外渗。离体叶片毒力测定结果表明,120μg/mL的啶菌噁唑可有效抑制番茄灰霉病病斑扩展,抑制率达83.74%。

对番茄灰霉病菌有抑菌活性的丁香和细辛提取物提取条件研究

经试验证明 ,2种中草药丁香和细辛的乙醇提取物对番茄灰霉病菌具有较强的室内抑菌活性。本研究对这 2种中草药的提取进行了不同提取溶剂、不同溶剂浓度和提取时间的测试。结果表明 ,80 %甲醇或甲醇∶丙酮∶水 (2∶2∶1) ,30℃ ,15 0r/min震荡提取 2d是丁香提取物较适宜的室内提取条件 ;80 %乙醇 ,30℃ ,15 0r/min震荡提取 3d是细辛提取物的较适宜的室内提取条件。

对番茄灰霉病菌有抗菌活性的植物提取物的室内筛选

研究用80%乙醇对95种植物材料粉末进行提取,得到提取物母液。利用PDA培养基将提取物母液稀释100倍,采用生长速率法测试提取物对番茄灰霉病菌的室内抑菌作用。在供试的95种植物材料中,有20种植物材料的提取物对番茄灰霉病菌的菌丝生长表现了不同程度的抑制作用。在10倍提取液稀释液进行的抑菌圈法和悬滴法测试中,丁香、黄连、女贞子和细辛4种提取物表现了对番茄灰霉病菌分生孢子萌发的极显著抑制作用,与对照化学药剂"施佳乐"0 1%处理达到同一显著水平。将提取液稀释200倍,采用生长速率法进行二次筛选,北豆根、丁香、甘草、细辛、辛夷,黄连和远志7种提取物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用与空白对照均达到极显著水平。结合对孢子萌发抑制作用结果,认为丁香和细辛可以作为重点进行深入研究。

番茄灰霉病菌拮抗菌D2-4发酵条件的研究

对拮抗番茄灰霉病菌的 D2 - 4菌株培养基成分和发酵条件进行研究。结果表明 ,在 2 8℃ ,180 r· min- 1 振荡培养条件下 ,最佳发酵时间为 96 h左右 ,培养 2 0～ 2 4 h的种子液以 7%的接种量转接有利于提高抑菌活性 ,装液量为6 0 m L· 2 5 0 m L- 1 三角瓶 ,均匀设计试验得出 ,最佳培养基配方为 (10 0 m L发酵培养基中含 ) :黄豆饼粉 1.10 g、葡萄糖 2 .71g、蔗糖 1.0 0 g、Na Cl0 .10 g、酵母膏 0 .10 g、p H6 .6 1。

北京地区番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性检测

为了检测北京地区番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性,指导生产上科学用药,从北京12个区、县采集番茄灰霉病样150份,分离纯化获得109个番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的单孢菌株,采用菌丝生长速率法测定了番茄灰霉病菌对嘧霉胺(pyrimethanil)的抗药性。所测菌株中嘧霉胺抗性菌株出现的比例高达82.57%,且以高抗菌株为主,占78.89%,抗性水平最高的菌株EC50是最敏感菌株的5 096倍;不同区县番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性存在差异,门头沟区、密云县、延庆县、怀柔区和平谷区、大兴、通州和顺义8个区县的高抗菌株所占比例达66.67%～100%,海淀、朝阳和房山3个区未检测到高抗菌株。上述结果说明北京地区番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性非常普遍,且以高抗菌株为主,生产上应替换新型杀菌剂防治番茄灰霉病。

创制杀菌剂啶菌恶唑生物活性及应用研究(Ⅰ)——番茄灰霉病

啶菌恶唑(试验代号:SYP-Z048)是一种结构新颖、作用方式独特的新型杀菌剂,具有保护、治疗效果及良好的内吸传导性。对子囊菌、担子菌和半知菌引起的多种植物病害具有良好的防治作用。啶菌恶唑对番茄灰霉病具有很高的离体杀菌活性和优异的田间防治效果。室内离体试验啶菌恶唑对番茄灰霉病(Botrytiscinerea )的EC50值为0.206 /ml;1998～2002年多点的田间小区试验结果表明:啶菌恶唑在处理剂量200～400 g a.i./hm2、施药2～3次、间隔期6～8d的条件下对番茄灰霉病有良好的防治效果,防效优于目前生产上推广使用的多菌灵、腐霉利、菌核净、嘧霉胺等常规杀菌剂。

哈茨木霉菌与5种杀菌剂对番茄灰霉病菌的协同作用

采用对峙法、菌丝生长速率法和离体叶片法分别测定了哈茨木霉菌Trichoderma harzianum与5种不同作用机制杀菌剂联用对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea的抑制作用。结果表明,联用可增强哈茨木霉菌及啶酰菌胺、嘧菌酯、咯菌腈、氟啶胺和啶菌噁唑5种供试药剂对番茄灰霉病菌的抑制作用,即具有协同作用,因此可考虑将杀菌剂与木霉菌联合用于番茄灰霉病的防治。

番茄灰霉病拮抗细菌Bacillus-1的筛选和鉴定

为了寻找番茄灰霉病的高效生防菌,从感染灰霉病的番茄大田土壤中,筛选出一株对灰霉病有较强拮抗能力的细菌Bacillus-1,对番茄体外和体内实验发现,Bacillus-1对番茄灰霉病发病率的抑制率达到83%。经过形态特征、生理生化特性鉴定和16S rRNA基因序列分析,初步确定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该高效拮抗菌的分离为番茄灰霉病的生物防治及其防治机理的研究奠定了基础。