20种川产道地药材对番茄灰霉菌的抑制作用研究

通过使用无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、石油醚和水6种溶剂对20种具有抑菌潜力的川产道地药材活性物质进行提取,以番茄灰霉病菌为供试菌,采用菌丝生长速率法研究其抑菌效果,通过系统研究川产道地药材提取物抑菌效果,在扩充中药材抑菌实验理论数据的基础上,为进一步研发中药杀菌剂提供基础参考。结果表明,在供试浓度为0.1g/mL条件下,乙醇提取物中黄柏、川射干、花椒、黄连、石菖蒲、大黄、川乌抑菌率为100%;乙酸乙酯提取物中川射干、黄连、桔梗、石菖蒲、使君子、川乌抑菌率为100%;三氯甲烷提取物中续断、金银花抑菌率为100%;丙酮提取物中石菖蒲抑菌率为100%;石油醚和水提液抑菌率均小于80%。

番茄灰霉菌拮抗细菌的筛选鉴定及评价

为分离鉴定一些对番茄灰霉菌具有拮抗作用且适合当地生境的生防细菌,以金华连续10年的番茄种植保护地土壤为材料,分离细菌,并以灰霉菌为靶标菌对其拮抗效果进行检验,对候选菌株进行格兰氏染色,将其16S rDNA序列与GenBank中已知标准菌株的16S rDNA序列比对,利用Neighbor-joining方法构建进化树,通过菌株发酵液灌根番茄后48 h,离体叶片挑战接种番茄灰霉菌,以及温室盆栽接种实验明确其防治效果.结果显示:分离获得5株疑似芽孢杆菌,其中1株(JH-2)对番茄灰霉病菌具有较高抗性,鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),与标准菌株AB735995.1解淀粉酶芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)聚于同一分支,同源性高达99%;菌株JH-2发酵液处理的番茄叶片病斑面积为对照处理的77%,防治效果为22.3%;菌株JH-2处理后对番茄灰霉的防治效果为38.9%.以上结果表明,解淀粉酶芽孢杆菌JH-2灌根后,可以触发番茄植株系统抗病性,增强植株免疫能力.

细菌菌株HX21对番茄灰霉菌的影响

从辽宁省、吉林省等地采集不同作物的根际土壤121份,分离纯化后得到细菌菌株88株,孢子萌发抑制试验和平板对峙培养分别筛选番茄灰霉菌拮抗细菌菌株54株、61株。在2次抑菌试验中,编号分别为HX21、QX41、QX42的菌株均表现出良好的拮抗效果,故选其作室内防病叶盘试验。结果表明,HX21对灰霉菌分生孢子抑制率达81.1%,这与孢子萌发试验和平板对峙试验的结果基本一致。

番茄灰霉病拮抗木霉菌的筛选及效果评价

利用57株木霉菌株对番茄灰霉菌(Botrytis cineren)进行室内抑菌效果测定和小区防病试验。结果表明:①木霉菌菌株对灰霉菌的作用机制主要表现在较强的重寄生作用,其释放的代谢产物消解灰霉菌菌丝。②其中有的木霉菌菌株的分生孢子释放的代谢产物能够抑制灰霉菌孢子萌发,有的能够刺激灰霉菌孢子萌发,说明各个木霉菌菌株的代谢产物不尽相同。③两年的小区防治番茄灰霉病试验,有4株木霉菌株的平均防治效果在60%以上,其菌株具有生长速度快、产孢早及产孢量大等特点。

番茄灰霉菌拮抗放线菌LA-5的筛选及鉴定

利用稀释涂布法从番茄根际土壤中分离放线菌,并以番茄灰霉菌为靶标,利用对峙培养法和牛津杯法筛选拮抗放线菌,得到一株具有较强抑菌活性的放线菌LA-5.通过培养特征、生理生化特性及基于16S r DNA序列系统进化分析,将菌株LA-5初步鉴定为链霉菌.复筛结果显示,LA-5发酵滤液对番茄灰霉菌孢子萌发及菌丝生长均有明显的抑制作用,其中100倍发酵滤液对孢子萌发抑制率和菌丝生长抑制率均在50%以上;受抑制菌落呈白色,气生菌丝萎缩稀疏,菌丝纤细、分支明显减少.离体防效试验显示,菌株LA-5发酵原液对番茄灰霉病防效可达83.4%.该菌株有望开发为防治番茄灰霉病的生防菌株.

木霉菌制剂防治设施大棚番茄灰霉病效果研究

通过马铃薯葡萄糖培养基平皿对峙培养,筛选出对番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)有拮抗活性的木霉(Tricheoderma spp.)菌株TR34、TR64、TR85和TR353。将这4株木霉菌分别制成含2×108个/g活孢子可湿性粉剂,用于室内生测试验。结果显示,经TR85可湿性粉剂处理的番茄植株病情指数(DS)显著低于(P≤0.05)经TR34、TR64、TR353和50%速克灵可湿性粉剂以及清水对照处理番茄植株。进一步将TR85可湿性粉剂用于2012年和2013年在上海金山地区的大棚番茄灰霉病防治药效试验。2年的试验结果基本一致,经TR85可湿性粉剂3 750、3 000 g/hm2处理的番茄植株的病情指数分别显著低于(P≤0.05),而防治效果分别显著高于(P≤0.05)经Tr85可湿性粉剂2 250 g/hm2和50%速克灵病情指数处理,且TR85 3 000、3 750 g/hm2处理之间的病情指数和防效无显著性差异。

蛇床子提取物对番茄灰霉病菌的抑制效果

为研究蛇床子提取物对番茄灰霉病的抑菌效果及抑菌活性的稳定性,以番茄灰霉病菌作为供试菌种,用蛇床子提取物作为抑菌剂,采用生长速率法测定其抑菌效果。结果表明,蛇床子不同溶剂提取物对供试菌种均表现出抗菌效果,并筛选出最佳提取溶剂为乙醇(φ=95%),其抑菌率达到76.92%;提取时间和方式是超声提取30min,抑菌率达到78.87%,超声波提取10、60min与震荡1、2、3d变化不大;在不同质量浓度下测定蛇床子抑菌效果,当提取物质量浓度为20g.L-1时,接菌后3.5d菌丝生长抑制率可达到最大值,为77.35%;蛇床子提取物抑菌活性的试验中,蛇床子在-20℃和100℃时抑菌活性低于0～80℃处理;蛇床子的光稳定性在光照超过48h之后抑菌活性有所下降;蛇床子的有效保存时间在0d最大,以后逐渐降低,超过25d抑菌率明显下降。因此,蛇床子提取物对番茄灰霉菌的最佳抑菌条件是用乙醇(φ=95%)提取,超声波提取30min,质量浓度为20g.L-1,避光保存于4℃的冰箱中,保存时间不超过25d。

苦参提取物抑制番茄灰霉病菌活性的研究

以苦参提取物做为抑菌剂,采用生长速率法和悬滴法,室内测试不同浓度（1,5,10,20g·L-1）苦参提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性。结果表明：不同苦参提取物浓度对番茄灰霉病菌菌丝均具有抑制作用,且作用强度随浓度增加而增强。接菌后4d,20g·L-1苦参提取物处理的菌丝抑制率达92.14%;苦参提取物对病菌孢子萌发抑制作用较强,且随着提取物浓度的增大,萌发抑制作用增强。20g·L-1苦参提取物处理的孢子萌发抑制率为97.46%,且均与对照差异达显著水平。不同温度、pH值、保存时间对苦参提取物抑菌的影响结果表明：在-20~100℃,随着处理温度升高,其抑菌活性下降显著,100℃处理时抑菌率降至62.43%;pH值5～9抑菌活性最高且变化较小,pH值为11时,抑菌率下降到71.07%;在4℃下保存5d与0d的抑菌率无差异,随着保存时间的延长,抑菌率逐渐降低,超过21d抑菌率显著下降。

苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性

以野外采集苍耳和室外种植苍耳提取物为对照,利用生长速率法、孢子萌发法及显微观察,研究了苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉菌活性的影响。结果表明:苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉菌具有较强的抑制作用,其抑制菌丝生长的EC50为20.27 mg/mL,在30 mg/mL浓度下,对番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌发的抑制率均达到70%以上,其对孢子形成和孢子萌发的EC50分别为9.06 mg/mL和15.21 mg/mL,其抑菌活性与野外采集苍耳和室外种植苍耳抑菌提取物相当.

番茄灰霉病拮抗细菌18BS-12发酵条件的优化及防治效果

【目的】对采自陕西、甘肃和河南省的51个土壤样品中的细菌进行分离纯化,筛选番茄灰霉菌的拮抗生防菌株,并研究其防治效果和最优发酵条件。【方法】分别以平板对峙法和牛津杯法测定所分离菌株及其发酵滤液对番茄灰霉菌的抑菌作用,筛选出抑菌作用显著的菌株,测定其离体和温室防治效果,并通过正交试验对防治效果明显且稳定的生防菌株的发酵条件进行优化,最后进行16SrDNA序列分析,对筛选菌株进行初步鉴定。【结果】经分离纯化得到533株细菌菌株,其中18BS-12的抑菌活性最好,离体和温室防治效果分别为82.37%和75.61%。对菌株18BS-12发酵培养基(NA培养基)进行正交试验优化,得到最佳发酵培养基配方(质量分数)为玉米粉2.0%,牛肉膏1.5%,FeSO40.015%。发酵滤液抑菌活性最强的发酵条件为:在250mL三角瓶中,将种子液按3%的体积比接种到50mL培养基中,初始pH 7.0,温度32℃,转速180r/min,发酵时间5d。菌株18BS-12的发酵滤液活性物质在高温、碱性条件和紫外光照射下较稳定。通过对其16SrDNA序列的分析比对,初步将其鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)。【结论】菌株18BS-12是1株对番茄灰霉病具有防治潜力的生防菌株。

菊芋叶片提取物抑菌活性与化学成分的研究

为了开发新型植物源杀菌剂和充分利用菊芋(Helianthus tuberosus L.)资源,本文尝试用石油醚、乙醚、乙酸乙酯和水等4种溶剂对菊芋叶片进行平行提取,采用生长速率法测定菊芋叶片提取物对水稻纹枯菌(Rhizoc-tonia solaniKühn)、小麦赤霉菌[Gibberella zeae(Schw.)Petch]、番茄早疫菌[Alternaria solani(Ellis et Martin)Jones et Grour]和番茄灰霉菌(Botrytis cinerea Pers.)生长量的抑制活性;并通过试管法和滤纸法对菊芋叶片内化学成分进行初步预试。抑菌实验结果表明:(1)菊芋叶片各溶剂提取物处理与对照处理相比差异显著;(2)菊芋叶片水提取物处理与各有机溶剂提取物处理差异也基本显著;(3)菊芋叶片各溶剂提取物同浓度处理对水稻纹枯菌、番茄早疫菌和番茄灰霉菌抑制效果较好;(4)菊芋叶片乙酸乙酯提取物抑菌效果最为显著,浓度为20mg/mL时对番茄早疫菌和番茄灰霉菌已达到完全抑制,对水稻纹枯菌抑制率也达到77.91%。初步化学预试结果说明,菊芋叶片中含有蛋白质、氨基酸、还原糖类、有机酸、酚类和鞣质、黄酮类、内酯类、强心甙以及油脂等化学成分。

枯草芽孢杆菌BAB-1脂肽类化合物的分离及稳定性分析

枯草芽孢杆菌菌株BAB-1是一株高效防治番茄灰霉病的生防细菌。通过盐酸沉淀、甲醇萃取的方法,从该菌株的发酵上清液中提取出一种脂肽类化合物。该物质能够显著抑制番茄灰霉菌菌丝生长及分生孢子的萌发,孢子萌发抑制率为83.02%。抑菌谱试验表明该物质对多种植物病原真菌具有明显的抑制作用。此外,该抑菌物质对热稳定,能耐受较广的pH范围,对多种蛋白酶不敏感,在几种常用有机溶剂中保持抑菌活性基本不变。结果表明枯草芽孢杆菌菌株BAB-1产生的脂肽类物质性质稳定,具有较强的抑菌作用。

凤县几种野生植物内生放线菌的分离筛选

用选择性培养基从采自凤县的12种野生植物中分离获得15种放线菌。非寄主作物定殖试验表明分离所获放线菌不仅能够定殖在不同植物体内,而且能定殖在植物的不同部位,具有内生性;皿内拮抗试验结果表明,15株内生放线菌中有2株对5种供试靶标真菌(梨状毛霉菌、西瓜枯萎菌、番茄灰霉菌、粉红聚端孢、苹果炭疽菌)有明显拮抗活性,其中Am3对灰葡萄孢菌抑制率达89.0%。Am5对西瓜枯萎病菌抑制率达81.0%;2株内生放线菌的发酵液对供试靶标真菌也有明显抑制作用,菌体残渣提取物的拮抗活性明显高于发酵滤液提取物。温室番茄、黄瓜防病促生实验结果显示菌株Am3、Am5有较好的防病促生作用,其中经Am3处理过的番茄植株干重比对照植株干重增加120%,对番茄灰霉病的防效达68.9%。

竹醋液复合盐抑菌活性的研究

根据竹醋原液的较低pH值2.4-3.2,若直接喷洒于植物蔬菜茎叶上会使植物受到药害,将竹醋液转换成复合钙盐,降低其酸度,测定该盐的抑菌效果。实验结果表明,竹醋液复合钙盐在pH值小于6.29的范围内能够抑制灰霉菌的生长,并且pH值越大抑菌效果越不明显,pH为5.22的竹醋液复合钙盐的最低抑菌浓度是50%。