番茄ACC合酶反义基因对河套蜜瓜的转化

河套蜜瓜（CucumismeloLcvHetau）的子叶经预培养。芽诱导和生根培养，获得再生小植株，诱导率达58％。取带有番茄ACC合酶反义基因的双元载体pMQ6／JM109与农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）LBA4404经三亲融合后，与在MS0上萌发5d、并在MS＋1mg／LNAA培养基上预培养3d的子叶共培养48h，然后转入含50mg／L卡那霉素的MS＋6mg／LZT的芽诱导培养基中，1l个月后诱导生芽，待芽长1．5－2cm时转入生根培养基中，1－2周后可诱导产生大量的根，形成完整的转基因小植株。经PCR和分子杂交检测证明，目的基因已整合入河套蜜瓜的基因组中。

番茄LE-ACC_2合酶基因5′端前导序列分离方法的研究

通过ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件对 Ｒｏｔｔｍａｎｎ等人发表的番茄 ＬＥ－ＡＣＣ２合酶的 ５’端 ２．０ Ｋｂ的前导序列作分析，设计了４对特异引物；以番茄果实、叶片的总ＤＮＡ为模板，采用特异ＰＣＲ扩增技术获得了 ２．０， １．８７， １．５８， １．２８ Ｋｂ ４个特异片段，用 Ｔ－Ｖｅｃｔｏｒ技术构建了１个克隆（２．０ Ｋｂ）、３个亚克隆（１．８７，１．５８，１．２８ Ｋｂ），对４个克隆产物进行了 ＤＮＡ序列测定，借助 ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件对所获得的各克隆序列进行综合处理与分析，获得了番茄 ＬＥ－ＡＣＣ２ ５’端前导序列的同源率为９９．９％，但第－９７９位的 Ｃ和第－１０７６位的 Ｔ分别为 Ｔ和 Ｃ所替代。对利用 ＰＣＲ技术分离大片段ＤＮＡ的各环节作了较详细的研究。