疏水作用柱层析技术纯化HBsAg条件的筛选

在应用流水作用柱层析纯化HBsAg中，对流水介质的功能基类型、交联密度、盐的浓度、操作温度等决定疏水性强弱的因素作了比较研究。结果表明，应用以C4为功能基的Butyl—Sepharose（6～8μmol／ml）和以C3为功能基的Propyl－Sepharose（20～22μmol／ml）疏水介质、8％（NH4）2SO4，18～24℃等条件纯化HBsAg时结果较理想。

应用国产疏水介质纯化重组HBsAg的研究

用国产Butyl－S－Sepharose流水介质，以HIC技术纯化rHBsAg（CHO细胞产），与瑞典Pharmacia公司生产的同类流水介质对照。比较通过HIC后rHBsAg的漏出，纯化rHBsAg终产品性状和纯度等指标。结果表明二者差异无显著意义，且国产流水介质纯化的HBsAg的某些性状有所改善。

蕲蛇酶纯化技术去除产品中细菌内毒素

目的了解生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术去除产品中细菌内毒素.方法采用药典半定量凝胶法测定五步蛇蛇毒先后经DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析、Phenyl Sepharose疏水柱层析、HiLoad 26/60 Sephadex 75 pg凝胶过滤柱层析等技术所得各阶段产品中细菌内毒素的含量;采用Folin-酚试剂法和蕲蛇酶注射液药品标准中的效价测定方法分别测定产品的蛋白含量和酶活力,求出每毫克蛋白和每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素的量.结果无论是DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析还是Phenyl Sepharose疏水柱层析或是HiLoad26/60 Sephadex 75 pg凝胶过滤柱层析均有去除细菌内毒素的作用,最终所得产品每毫克蛋白所含细菌内毒素为6.3～12.5 EU·mg-1,每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素为0.5～1.0 EU·U-1.结论生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术具有去除产品中细菌内毒素的作用,所得产品细菌内毒素的含量远低于药典对注射剂的细菌内毒素的含量要求.