高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质

Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4mol/L脲、1.8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。

疏水作用色谱填料研究进展

疏水作用色谱法（HIC）是一种有效的蛋白质分离纯化方法。综述了HIC填料的基质和配基的发展过程，举例说明了不同HIC填料对蛋白质的分离纯化效率，指出了制备型HIC填料的现状及其发展趋势。

疏水色谱法及其在生物大分子分离纯化中的应用

综合评述了疏水相互作用色谱法 ( hydrophobic interaction chromatography,HIC)

蛋白折叠液相色谱法中流动相对重组人干扰素-γ质量回收率的影响

蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、梯度洗脱模式和流速对rhIFN-γ质量回收率和活性的影响。分别以3.0mol/L(NH4)2SO4+0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)和0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)为流动相A和B,采用35min非线性梯度洗脱时,所得rhIFN-γ的质量回收率最高。

脲对Flt3配体包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用研究

目的研究小分子脲对包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用。方法考察在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)流动相中添加脲时,不同浓度的小分子脲对包涵体蛋白重组人酪氨酸激酶配体(recombined human Flt3ligand,rhFL)复性效率的影响,并采用荧光光谱技术,进一步研究目标蛋白Flt3复性前后复性效果变化与荧光强度变化的规律。结果当脲的添加浓度为3mol·L^(-1)时,rhFL的质量回收率达到33.1%,更易于恢复其天然构象及生物活性。结论添加适当浓度的脲可促进rhFL的复性与同时纯化,通过荧光光谱技术可以初步推测包涵体蛋白在复性过程中生物活性的变化,为rhFL蛋白药物的研发提供参考。

鸡卵黄免疫球蛋白分离纯化方法的研究进展

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)用于免疫学检测有许多优点,要求对IgY在去脂后进行纯化。作者在本文中就已建立的IgY分离纯化方法(离子交换色谱、疏水作用色谱、嗜硫色谱和亲和色谱等)作了综述。