无机基质疏水作用色谱填料的研制及扩试

以无机基质可控孔径玻璃（ＣＰＧ）和大孔硅胶为基质、聚乙二醇（ＰＥＧ１０００）为配基，利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱（ＨＩＣ）填料，并进行了１５０ｇ／批的扩大试验，用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明，此类填料对蛋白质的分离性能良好，对胰蛋白酶的活性回收率大于９５％。

溶菌酶在疏水表面吸附的研究

采用摇床法,通过改变盐酸胍浓度和溶菌酶浓度测定不同温度下的变性溶菌酶(Lys)在疏水色谱填料PEG 600表面的吸附等温线.研究发现,25℃,35℃和45℃吸附达平衡所需时间分别为5h,4h和2h.原因可能是25℃时包覆作用显著,温度升高时,包覆作用消失,吸附容易达到平衡.改变盐酸胍浓度时,吸附量的变化与三种作用力,即去水合作用、亲合力及分子构象作用力的相对大小有关.0.8mol/LGuHCl吸附量达最大值,暗示蛋白可能发生了构象突变(至少是微扰).以吸附计量置换模型(SDM A)对溶菌酶的吸附等温线进行拟合的线性关系很好,表明SDM A适用于溶菌酶在液固界面上的吸附.SDM A热力学研究表明,变性溶菌酶折叠吸附过程中总的自由能ΔGP为负值,净吸附自由能ΔGA均比相应条件下的ΔGP的负值更大,而净解吸附自由能ΔGD均为正值.说明上述自发过程是由ΔGA作为驱动力的结果,符合吸附过程的一般规律.

应用Phenyl Bio-Sephar FF进行辣根过氧化物酶精分离的研究

辣根过氧化物酶是一种广泛应用于临床医学诊断以及抗体-抗原研究领域的常用酶。不同纯度和活性要求的酶常常被用于满足不同的应用领域。我们采用phenyl疏水介质填料对该酶进行分离纯化研究,并且通过一次分离收集不同的部分获得不同纯度和活性要求的酶。同时,我们发现采用phenyl疏水介质填料对于辣根过氧化物酶有专一性的捕捉效能,并且可以通过硫酸铵浓度的梯度变化轻易地从柱上解析。这种新型填料的应用和工艺带来了简洁经济的生产流程。