蕲蛇酶纯化技术去除产品中细菌内毒素

目的了解生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术去除产品中细菌内毒素.方法采用药典半定量凝胶法测定五步蛇蛇毒先后经DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析、Phenyl Sepharose疏水柱层析、HiLoad 26/60 Sephadex 75 pg凝胶过滤柱层析等技术所得各阶段产品中细菌内毒素的含量;采用Folin-酚试剂法和蕲蛇酶注射液药品标准中的效价测定方法分别测定产品的蛋白含量和酶活力,求出每毫克蛋白和每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素的量.结果无论是DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析还是Phenyl Sepharose疏水柱层析或是HiLoad26/60 Sephadex 75 pg凝胶过滤柱层析均有去除细菌内毒素的作用,最终所得产品每毫克蛋白所含细菌内毒素为6.3～12.5 EU·mg-1,每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素为0.5～1.0 EU·U-1.结论生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术具有去除产品中细菌内毒素的作用,所得产品细菌内毒素的含量远低于药典对注射剂的细菌内毒素的含量要求.