疏水色谱分离在重组人血白蛋白分离纯化中的应用研究

重组人血白蛋白用于高剂量生物制品的生产,给下游分离纯化技术带来了巨大挑战;疏水色谱分离是利用样品组分分子的疏水基团与介质的疏水集团间的作用力实现分离,在纯化重组人血白蛋白(rHSA)过程中,能够有效去除降解物。优选美国GE公司的Phenyl Sepharose 6FF (HS)疏水作用分离介质对rHSA中间体进行了分离纯化,优化了工艺控制条件。实验结果表明,使用50 mmol/L PB+0.1 mol/L NaCl的缓冲液,控制pH值为6.0,去除降解物效果及蛋白收率均最佳。

作固定化脂肪酶载体的交联聚乙烯醇

合成了交联聚乙烯醇的各种酯类。它们经改性用于蛋白质的分离或固定。PVA与表氯醇交联(CL-PVA)，然后与不同长度的线型脂肪酸酯化(Cn-CL-PVA)。阐述了所得产物的特征，测定了膨胀性、可溶性及脂化百分率。CL-PVA试样的平均水含量可达81％左右。研究了它们的稳定性及构造。热力学分析表明该载体稳定性增加了。同时，电子扫描显微数据(SEM)证实其表面结构取决于交联和酯化反应。并且，还呈现明显的非均匀结构，这主要存在于原料PVA和交联产物中，而终聚物则不然。最后，完成了工业用Candida rugosa酶的固定实验。实验证明蛋白质与碳链长度8～12的聚合物有较好的亲和力。数据表明，与Celite545相比，C8-CL-PVA是更好的物理吸附脂肪酶载体．进一步证明微生物脂肪酶更喜好疏水性载体。