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羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后线粒体疏水蛋白质组的定量分析 被引量:3
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作者 颜玉蓉 付玉荣 +1 位作者 王伟佳 邱宗荫 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期373-382,共10页
抗癌剂羟基喜树碱可以通过线粒体途径诱导肝癌细胞凋亡.应用定量蛋白质组学技术分析羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后的线粒体疏水蛋白质差异表达,探讨癌细胞凋亡机制及羟基喜树碱的抗癌机理.分离提取羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后的... 抗癌剂羟基喜树碱可以通过线粒体途径诱导肝癌细胞凋亡.应用定量蛋白质组学技术分析羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后的线粒体疏水蛋白质差异表达,探讨癌细胞凋亡机制及羟基喜树碱的抗癌机理.分离提取羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后的线粒体,并采用顺序抽提法提取疏水蛋白质;用含稳定同位素亲和标签的c-ICAT试剂标记蛋白,利用基于多维色谱-线性离子阱/静电场轨道阱质谱联用技术的鸟枪(shotgun)法策略分析鉴定了在肝癌细胞凋亡前后的线粒体中表达量差异有显著统计学意义(P<0·05)的疏水蛋白144种,其中,12种蛋白的表达量在凋亡细胞中下调,而表达量在羟基喜树碱诱导细胞凋亡后上调10倍以上的蛋白43种.这些蛋白主要与细胞分裂增殖、分化凋亡、能量代谢、核酸代谢以及信号转导相关.该研究结果为在亚细胞定量蛋白质组水平上深入探讨羟基喜树碱的作用机理提供了新的实验依据,亦为研究肿瘤细胞凋亡机制提供了新的思路. 展开更多
关键词 线粒体 疏水蛋白质 c—ICAT 羟基喜树碱 亚细胞蛋白质组学
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荧光热漂移实验体外检测核小体的解聚 被引量:1
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作者 郭明欣 张凤慧 +3 位作者 邵学勤 赵秀娟 蔡禄 赵宏宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1021-1028,共8页
核小体是真核生物染色质的基本组成单元。核小体的解聚可以动态调控诸如DNA复制、转录、重组等以DNA为模板的生物学过程。特定荧光探针分子与蛋白质疏水残基结合后可被激发荧光信号。荧光热漂移(fluorescence thermal shift,FTS)是一种... 核小体是真核生物染色质的基本组成单元。核小体的解聚可以动态调控诸如DNA复制、转录、重组等以DNA为模板的生物学过程。特定荧光探针分子与蛋白质疏水残基结合后可被激发荧光信号。荧光热漂移(fluorescence thermal shift,FTS)是一种利用该原理检测温度上升时蛋白质变性过程的方法。本文以Widom 601序列为DNA模板,盐透析法体外装配核小体;分别在实时荧光定量PCR仪的VIC和TAMRA通道激发下,利用FTS检测了核小体在Tris-NaCl(TN)缓冲液和HEPES缓冲液中的解聚状态。研究结果发现,DNA对照序列在TN缓冲液中产生的背景噪声较大,VIC通道激发下组蛋白八聚体产生的荧光信号相对较强。FTS检测核小体的结果显示,随着温度的上升核小体的解聚过程分为2个阶段,~71℃和~84℃是核小体解聚速度最快的温度范围,而75℃~80℃是降解速度较慢的阶段。基于FTS基本原理,本研究发展了一种新颖的可用于检测核小体结构稳定性的方法,为核小体与染色质结构相关问题的研究奠定了一定的技术基础。 展开更多
关键词 核小体解聚 荧光热漂移 蛋白质疏水结构域 染色质结构
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Fluorescence triggered by ligand-protein hydrophobic interaction
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作者 LIU ZhenZhen DU LuPei LI MinYong 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2013年第11期1667-1670,共4页
Hydrophobic fluorescence:Tan and his colleagues recently introduced a brand new chemotype of environment-sensitive fluorescent turn-on probes to detect the hydrophobic ligand-binding domain by using SBD fluorophore.Th... Hydrophobic fluorescence:Tan and his colleagues recently introduced a brand new chemotype of environment-sensitive fluorescent turn-on probes to detect the hydrophobic ligand-binding domain by using SBD fluorophore.The design strategy described in this report generalized the environment sensitivity turn-on mechanism to recognize a specific protein,which provides a robust breakthrough for interchanging fluorescence in conventional small-molecule fluorescent imaging. 展开更多
关键词 non-enzyme protein environment-sensitive probe turn-on fluorescence SBD fluorophore
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