疏风止痉方对耐药性癫痫大鼠脑组织NF-κB p65表达的影响及脑脊液卡马西平浓度影响

[目的]通过观察疏风止痉方对耐药性癫痫大鼠脑组织NF-κB p65表达的影响及脑脊液卡马西平药物浓度的影响,探讨中药复方治疗难治性癫痫的作用机制。[方法]应用氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型,将成功点燃的癫痫模型先后经过丙戊酸钠及卡马西平预处理后筛选出耐药性癫痫模型大鼠,将大鼠随机分为正常对照组、耐药模型组、阳性对照组、疏风止痉方低剂量组、疏风止痉方中剂量组、疏风止痉方高剂量组共6组,每组10只。灌胃治疗28 d后,采用免疫组化法和Western blot法检测海马NF-κB p65的分布表达,微透析技术联合高效液相色谱法采取并检测大鼠脑脊液的卡马西平浓度。[结果]除正常对照组外的其他各组脑脊液卡马西平浓度均高于耐药模型组,与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);与阳性对照组比较,疏风止痉方各剂量组脑脊液卡马西平浓度虽均降低,但与疏风止痉方高剂量组比较无统计学差异;疏风止痉方各组随着中药剂量的增加,脑脊液中卡马西平浓度呈递增趋势,但3组之间无统计学差异。[结论]中药复方疏风止痉方联合卡马西平,通过调节耐药性癫痫大鼠脑内NF-κB炎症信号通路,抑制P-gp的过度表达,从而能够提高耐药性癫痫大鼠脑脊液中卡马西平的药物浓度,而且随着中药剂量的增加卡马西平浓度呈递增的趋势。

马融教授创用疏风止痉方治疗小儿难治性癫痫验案

癫痫为儿科常见的神经系统疾病之一,70%的患儿经过正规的中医或中西医结合抗痫治疗后,癫痫发作可得到良好的控制,约30%的患儿经长期治疗,仍得不到有效地控制,成为难治性癫痫。近年来,马融教授突破了传统的“豁痰熄风”抗痫疗法,在临床中运用银翘散治疗癫痫的过程中,通过其疏风解表、开通经络的功效,使得邪有出路,助药直达病所,后将方中加入金果榄、全蝎,首创疏风止痉方治疗难治性癫痫患儿,取得了一定的疗效,并附验案讨论。

疏风止痉方对耐药癫痫大鼠发作行为及NF-κB通路影响

目的:基于NF-κB通路探讨疏风止痉方对耐药性癫痫大鼠的发作机制。方法:健康幼龄SD大鼠100只,随机选取10只作为正常组大鼠,其余90只用于匹罗卡品点燃癫痫模型,将点燃成功的癫痫模型大鼠通过2周卡马西平、2周丙戊酸钠预处理后仍有癫痫发作的大鼠作为耐药性癫痫模型。将耐药性癫痫模型大鼠随机分5组,分别予卡马西平(Carbamazepine,CBZ)、特异性抑制剂(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)、卡马西平联合疏风止痉方低剂量、卡马西平联合疏风止痉方中剂量、卡马西平联合疏风止痉方高剂量灌胃治疗28 d,观察大鼠癫痫发作情况,免疫组化法检测及免疫印记蛋白(Western blot)法检测核转录因子κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)、P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及NF-κB信号通路上下游细胞因子的表达。结果:正常组大鼠未见发作,海马NF-κB、P-gp及相关炎性因子表达最低。与正常组比较,CBZ组、PDTC组、疏卡联合组发作次数减少(P<0.01),各实验组NF-κB、P-gp及相关炎性因子表达增强(P<0.05)。与CBZ组比较,PDTC组、疏卡高组发作次数明显减少(P<0.01),疏卡高组发作级别降低(P<0.05),发作时间无差异(P>0.05),NF-κB、P-gp及相关炎性因子表达降低(P<0.01),PDTC组在降低NF-κB方面更有优势。与PDTC组比较,疏卡高组发作次数减少(P<0.05),发作级别降低(P<0.05),NF-κB、P-gp表达增强(P<0.01),相关炎性因子表达降低(P<0.05),CBZ组发作次数增多、发作级别升高(P<0.05),NF-κB、P-gp表达增强(P<0.01),相关炎性因子表达无差异(P>0.05)。结论:疏风止痉方可以减少耐药性癫痫模型大鼠发作次数、减轻发作级别,对发作持续时间无影响,其机制可能与疏风止痉方抑制相关炎性因子的表达,下调NF-κB、P-gp水平有关。

基于网络药理学和分子对接探讨疏风止痉方治疗耐药性癫痫的作用机制

[目的]探讨疏风止痉方治疗耐药性癫痫的作用机制。[方法]在中药系统药理数据库(TCMSP)筛选疏风止痉方12味中药活性成分,并预测作用靶点;运用GeneCards、OMIM数据库获取耐药性癫痫相关基因,获得DRE相关靶点;利用R4.0.0语言筛选药物和疾病的交集靶点,借助String数据库构建靶点蛋白互作网络;通过Cytoscape 3.7.2软件构建中药-化学成分-疾病靶点网络;使用R语言进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,利用Cytoscape软件构建KEGG关系网络;最后通过AutoDock Vina对重要化合物作分子对接验证。[结果]得到潜在作用靶点165个,筛选出槲皮素、木犀草素、山柰酚、汉黄芩素、柚皮素5个主要化学成分,7个核心靶点PTGS2、HSP90AA1、ESR1、AR、MAPK1、AKT1、MAPK3,基因富集分析得到2584条GO功能条目和171条KEGG通路。分子对接结果表明疏风止痉方中主要活性成分与核心作用靶点具有良好的结合活性。[结论]该研究初步揭示了疏风止痉方治疗耐药性癫痫的作用机制,主要是通过抗病毒、抑制炎症、神经保护等作用起到协同增效作用,为临床合理应用提供了理论依据。