套式／多重PCR方法应用于疟疾诊断与监测的初步评价

目的与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR(UT-PCR)在疟疾监测中的应用价值。方法在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较镜检法与UT-PCR的初检结果,对结果不一致的血片再次镜检复查,同时对其滤纸血样重复PCR2～3次;评估UT-PCR与镜检法的敏感性和特异性。结果400例发热患者血样中,镜检法初检检出疟原虫阳性234例,其中恶性疟125例,间日疟109例;UT-PCR检出疟原虫阳性235例,其中恶性疟124例,间日疟109例;恶性疟和间日疟混合感染2例。两法初检结果一致的血样占92.5%(370/400),其中阴性154例,阳性216例(间日疟117例,恶性疟99例)。复查25份初检结果不一致的血样,包括镜检阴性PCR阳性11例,镜检阳性PCR阴性10例,镜检为恶性疟PCR为间日疟3例,镜检为间日疟而PCR为混合感染1例,其中15份与UT-PCR的初检结果一致,7份"假阳性"原因不明,仅3份为PCR的假阴性。根据复查结果评估PCR的敏感性为99.6%,特异性为98.8%。结论采用更敏感的UT-PCR疟疾诊断方法有助于解决疟疾诊断与鉴别诊断中的疑难问题,提高疟疾监测的质量和效率。

贵州省县级和省级疟疾诊断实验室检测结果比较分析

贵州省省级疟疾诊断实验室通过PCR法和镜检法对各县级疟疾诊断实验室上报的疟疾网报病例进行复核,以PCR和镜检一致的结果作为判定依据,对县级疟疾诊断实验室镜检结果进行评价。共对89份血样进行复核,PCR检出24份阳性,15份为恶性疟原虫,7份为间日疟原虫,2份为卵形疟原虫,均为输入性病例;省级镜检和PCR结果一致的有21份。县级与省级检测结果的总符合率为79.8%(67/84),县级漏检率为9.5%(2/21),误检率为23.8%(15/63),两级实验室检测的Kappa值为0.6,属于中、高度一致。

浙江省5例输入性疟疾误诊病例的病原学诊断分析

目的对浙江省5例输入性疟疾误诊病例进行病原学诊断和鉴定。方法收集浙江省5例前期误诊为输入性间日疟患者的流行病学资料和血样,进行镜检、快速疟疾诊断试纸条检测和巢氏PCR检测(采用疟原虫属特异性引物和种特异性引物),并将PCR扩增片段测序后,与GenBank中已有的序列进行Blast比对分析。结果 5例患者均为自非洲的归国人员,其中3例归国前有疟疾发病史。镜检结果显示,4份血样为卵形疟原虫感染,1份(病例1)为卵形疟原虫和间日疟原虫混合感染。快速疟疾诊断试纸条检测结果均为疟原虫阴性。巢氏PCR检测结果显示,5份血样的全血DNA均扩增出卵形疟原虫特异性条带(800 bp),其中1份血样(病例1)同时还扩增出间日疟原虫特异性条带(120 bp)。测序序列经Blast比对,5份血样的扩增片段序列与卵形疟原虫SSU RNA部分序列的同源性均为99%,其中1份血样(病例1)的另一扩增片段序列与间日疟原虫SV5 18S rRNA部分序列的同源性为99%。结论 5例输入性疟疾病例,4例为卵形疟原虫感染,1例为卵形疟原虫和间日疟原虫混合感染。

套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性和稳定性初探

目的提高标签引物-套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。方法用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病(感冒,流感,伤寒,肝炎等)患者血样20份;抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4m1,进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感染血样;健康者血样作对照。用热裂解法制备DNA模板,用线粒体细胞色素氧化酶基因作为靶基因,应用相关软件和网络资源(PrimerPremier5.0,PUBMED,NCBI-BLAST和Mfold服务器)设计和优化标签引物-套式/多重PCR,并用于检测所采集制备的各种血样。结果间日疟与恶性疟患者血系列稀释为含1000、100、10和1个虫/μl后经标签引物-套式/多重PCR检测,恶性疟和间日疟患者各稀释含虫血样分别在611bp和255bp出现1条带,能检测到原虫密度均为1个虫/μl血;非疟疾发热病人血样30份及其他传染病患者血样均为阴性;健康者血样未出现扩增条带,每种血样反复测试3次以上均获得同样结果。结论经优化的标签引物-套式/多重PCR在疟疾诊断中具有较高的敏感性、特异性和稳定性。

应用巢式PCR评价低流行区疟疾诊断结果

目的初步评价大连市疾控人员对疟疾的诊断能力，为低流行区疟疾诊断方法的选择提供理论依据。方法收集2010--2012年大连市上报的27例疟疾阳性病例的血液样本．应用巢式PCR（nest—PCR）方法对诊断结果进行复核：以复核结果为标准，比较镜检和快速诊断试剂盒（rapid diagnosistest．RDT）方法的检测敏感性及对虫种鉴定的正确率。结果27份样本的巢式PCR结果为恶性疟23份，间日疟2份，卵形疟l份，阴性1份，无混合感染。镜检对阳性样本的敏感度为76．9％（20／26），远低于RDT方法的96．2％（25／26）；镜检和RDT联合使用，敏感度可达100％。对虫种的鉴别，镜检对阳性样本的正确检测率为50％（13／26）：RDT方法仅能鉴别恶性疟和非恶性疟．对恶性疟阳性样本的正确检测率为100％（23／23）。结论采用镜检和RDT联合应用的方法，能够提高检测的敏感性。建议在有条件的疾控单位建立人体疟原虫的分子检测体系．更有效地防止对疟疾病例的漏诊和误诊。

4种检测方法在用药后疟疾诊断中的应用分析

目的通过对4种检测方法的应用分析,为用药后疟疾病例准确诊断提供参考依据。方法镜检法、RDT、多重PCR法和荧光定量PCR法对55份临床疟疾病例标本进行对比分析。结果镜检疟原虫阳性39份,阳性率70.91%;RDT检测疟原虫阳性50份,阳性率90.90%;多重PCR检测疟原虫阳性42份,阳性率76.36%;荧光定量PCR检测疟原虫阳性41份,阳性率74.55%。RDT与镜检法检测结果差异有统计学意义(χ~2=10.446,P=0.001<0.05);镜检法与RDT法检测结果差异无统计学意义(χ~2=0.681,P=0.409>0.05);多重PCR方法、荧光定量PCR方法与镜检法检测结果差异均无统计学意义(χ~2=0.421,P=0.516>0.05;χ~2=0.183,P=0.669>0.05)。4种检测方法比较,多重PCR方法、荧光定量PCR方法灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值较其他两种方法高。结论 "金标准"镜检法易受客观因素影响,检出率低;RDT简单快捷,适合大范围筛查;两种PCR方法灵敏度特异性很高,荧光PCR相对多重PCR方法省时。建议不同方法相结合,以降低误检率。

分子生物学技术在疟疾诊断中的应用与展望

疟疾与艾滋病、结核是世界公认的危害人类生命健康的三大公共问题之一。世界卫生组织报告,2016年全球还有44.5万人死于疟疾,疟疾的早期快速诊断对于及时治疗感染病例,降低死亡率,显得尤为重要。疟原虫诊断主要分为病原学诊断、免疫学诊断和分子生物学诊断。传统病原学诊断是疟疾诊断公认的"金标准",但是在实际的临床应用中,病原体检测较为费时费力,且受专业镜检人员匮乏,临床经验等因素限制,容易造成漏诊和误诊,已远不能满足疟疾防治工作的需要。免疫学诊断主要采用检测抗原、抗体的血清学方法,由于可用于检测的特异性抗原较少、抗原抗体反应的干扰因素较多,血清抗体产生的时间较长等因素,使疟疾诊断的准确性和及时性上还有待提高。进入21世纪,随着核酸探针、聚合酶链反应、环介导等温扩增技术、下一代测序技术等的应用,为疟原虫的实验室检测提供了新的途径,表现出了越来越高的敏感度和特异度。本文就分子生物学技术在疟疾诊断领域中的应用与展望作一综述。

BinaxNOW疟疾快速诊断试剂卡现场应用效果

目的评价BinaxNOW疟疾快速诊断试剂卡现场应用效果。方法采用BinaxNOW疟疾快速诊断试剂卡检测临床"四热"病人,以镜检法为金标准,计算敏感性和特异性等指标。实验采用双盲法。结果使用BinaxNOW疟疾快速诊断试剂卡检测"四热"病人443例,检出疟疾阳性151例。总体敏感性为98.69%,特异性为100%,与镜检符合率为99.55%;检测恶性疟原虫的敏感性和特异性分别为100%和99.66%,与镜检符合率为99.76%;检测非恶性疟的其他疟原虫的敏感性和特异性分别为90.91%和100%,与镜检符合率为99.36%。结论BinaxNOW疟疾快速诊断试剂卡质量稳定、可靠,特异性、敏感性高。

《疟疾的诊断》(WS259-2015)标准跟踪评价

目的调查《疟疾的诊断》(WS259-2015)标准在各级疾病预防控制和医疗机构的知晓、掌握和现场应用情况,为进一步完善标准的内容和指标、精准化开展标准宣贯和强化标准实施提供科学依据。方法根据全国疟疾疫情数据资料将全国流行省份分为高、中、低三层,每层选取一个省份,对不同层级工作人员开展问卷调查后,赴现场进行访谈;同时搜集国家正式发布且正在使用的与疟疾消除和诊断相关的文件。结果回收调查问卷共320份,包括有效问卷301份,有效率达94.06%。有效问卷结果显示,94.35%(284/301)的疟疾防治工作者知晓该标准,获取途径以主动查阅为主。标准内容指标总体掌握率为72.09%(217/301),“疟疾诊断类型”和“疟疾临床表现”的掌握率较低,分别为39.53%(119/301)和36.55%(110/301)。标准一致性调查中,现行疟疾工作方案、网报系统与标准中临床表现、诊断类型等内容不完全一致。适用性评价中,92.36%(278/301)的被调查者认为该标准完全适用,仅6.64%(20/301)认为需要修订。回收问卷中对于该标准实施的建议共67条。结论各级疾控与医疗机构疟疾防治工作者对新版诊断标准掌握率偏低,理解有一定偏差,亟需加大培训宣传力度,开展标准解读。有必要在标准实施的不同阶段开展标准的跟踪评价,发挥标准的指导作用。

疟疾快速诊断试剂卡检测恶性疟原虫的应用评价

疟疾是由热带、亚热带的一种蚊叮咬传播疟原虫而引起的,以寒战、高热、大汗为特点。在亚洲和非洲地区疟疾仍然是威胁和危害人们健康最为严重的寄生虫疾病之一[1]。目前,全球仍有1.2亿疟疾患者,带虫者约3亿,

疟疾患者血液检验相关参数的变化情况及诊断价值分析

目的分析并评价常规血液检测相关指标的变化情况在疟疾感染疾病诊断中的应用价值。方法对比分析42例疟疾患者和42名健康对照者的RBC、Hb、WBC、PLT以及TCH等各项血液相关指标。结果对照组在RBC、Hb以及PLT3个指标方面均高于实验组,差异显著,具有统计学意义;2组在WBC以及红细胞体积分布宽度两项指标上无明显差异,不具统计学意义。实验组TCH为(2.6±0.5)(1.8～3.7)mmol/L,低于对照组TCH为(4.7±0.6)(3.5～6.7)mmol/L,差异显著(P<0.001),具有统计学意义。结论将RBC下降、Hb下降、TCH下降以及PLT计数下降作为疟疾感染诊断的辅助指标,将为疟原虫感染的诊断提供有价值参考。

疟疾快速诊断试剂卡与镜检及乳酸脱氢酶检验结果比较观察

目的分析以检测疟原虫乳酸脱氢酶的疟疾快速检测试剂卡与疟原虫镜检及疟疾患者乳酸脱氢酶检测进行比较观察。方法对2015~2016年在加纳务工返乡人员以疟原虫镜检阳性住院治疗前的患者作为主要观察对象,同时进行快速疟原虫检测试剂卡检测(胶体金法)及患者乳酸脱氢酶检测,疟疾阳性患者按照四种疟原虫种类分组统计分析比较。结果疟疾观察患者共144例,其中镜检阳性患者共142例和2例临床症状明显血检阴性患者,镜检阳性率为98.61%(142/144)。恶性疟108例,间日疟、三日疟和卵形疟分别为9例、1例和24例。快速疟原虫检测试剂检测总体阳性率为95.14%(137/144),两种方法的统计学检验差异无统计学意义(P>0.05)。乳酸脱氢酶增高的患者占44.44%(64/144),与血检方法比较统计学检验差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论该快速疟原虫检测试剂对疟原虫镜检技术掌握不熟练的医疗机构是一种较好的辅助检测试剂。而临床检验乳酸脱氢酶增高患者作为判断为疟疾患者存在较大的差异。

BinaxNow疟疾快速诊断试剂卡检测疟疾效果评价

目的评价BinaxNow疟疾快速诊断试剂卡对临床疟疾现症患者的检测效果，为今后在基层开展现场应用提供依据。方法以病原学镜检结果或特效药物治疗效果为依据，判定评价BinaxNow疟疾快速诊断试剂卡检测疟疾的敏感性和特异性。结果临床“四热”病人接受BinaxNow疟疾快速诊断试剂卡和病原学2种方法检查的53例中，均为阳性者24例，阴性25例，敏感性100％（24／24），特异性86．21％（25／29），两者符合率9246％（49／53），单一显示BinaxNow疟疾快速诊断试剂卡阳性4例。而未做病原学检测15例中，BinaxNow疟疾快速诊断试剂卡阳性5例，对单一显示Bias,xNow疟疾快速诊断试剂卡阳性9例，经过磷酸氯喹片／磷酸伯氯喹片组合药或蒿甲醚治疗有效或治愈，证实是非恶性疟的其它疟疾或恶性疟。结论采用BinaxNow喾疟疾诊断疟疾现症患者的阳性敏感性高（可达100％），与病原学镜检相比，BjnaxNow疟疾快速诊断试剂卡快速、简便、可靠、敏感和特异性高，适合在基层推广使用。

156例脑型疟疾救治体会

目的:了解脑型疟疾的临床特点及其治疗方法。方法:分析156例脑型疟疾患者的临床特征,给予抗疟、脱水、抗惊厥、抗炎及对症支持治疗,并观察疗效。结果:156例脑型疟疾患者,7d内体温控制,神志清楚者128例,7d以上体温控制,神志清楚者16例,死亡12例,治愈率为92.3%,病死率为7.7%。结论:对于脑型疟疾及早明确诊断并给予合理规范的治疗,对于改善症状,提高治愈率有重要作用。